抗蝰蛇毒IgY灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用的研究

目的探讨抗蝰蛇蛇毒鸡卵黄抗体(immunoglobulin yolk,IgY)经腹腔注射或灌胃对蝰蛇伤小鼠保护作用,为其口服制剂的应用奠定理论基础。方法用蝰蛇原毒单一抗原免疫母鸡,收集第12天以后的鸡蛋,用水稀释法提取抗蝰蛇毒IgY;间接法ELISA检测IgY的效价和灌胃小鼠体内IgY的吸收时间;以胃排空率实验确定蛇伤前灌胃IgY的最佳时间,以腹腔注射和不同浓度IgY灌胃实验分别检验IgY对蝰蛇伤小鼠的保护作用。结果初次免疫后第12天开始收集抗体,水稀释法提取的IgY效价为1∶6400;不同浓度IgY灌胃后,2.5～3.5h胃排空率均达61.8%以上,血浆中抗体效价亦相应达高峰;腹腔注射和IgY灌胃实验对蛇伤小鼠的保护作用明显,小鼠的存活时间与阴性IgY组小鼠相比差异显著(P<0.05);同等效应下,灌胃IgY的有效剂量大约为腹腔注射的10～15倍。结论抗蝰蛇蛇毒IgY经腹腔注射和灌胃实验均能有效保护蝰蛇伤小鼠。

卵源性多价抗蝮蛇毒IgY的制备及检测

采用短尾蝮（Gloydius brevicaudus）、乌苏里蝮（Gloydius ussuriensis）、岩栖蝮（Gloydius saxatilis）、原矛头蝮（Protobothrops mucrosquamatus）和菜花原矛头蝮（Protobothrops jerdonii）5种蛇毒的混合物制备类毒素，免疫20～22周龄莱航母鸡并收集鸡卵，用冻融法、水稀释法和PEG法提取卵黄多价抗蝮蛇毒IgY ，并用酶联免疫法和蛋白印迹法对所得Ig Y效价进行检测。结果表明：母鸡在免疫期间产下的鸡卵中，均存在可有效中和上述5种蛇毒的卵黄抗体Ig Y ，且诱导量随免疫强度的提高而增加；不同方法所得有效抗体的含量存在一定差异，且同一提取法所得抗体对不同蛇毒的交叉中和能力也不同，这可能与动物对5种蛇毒的免疫应答存在差异有关。

抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体的制备、纯化和保护性实验研究

目的:探索抗眼镜蛇毒鸡卵黄抗体(IgY)的制备方法及其生物学活性,为替代马源性抗蛇毒血清奠定基础。方法:眼镜蛇毒原毒免疫母鸡,采用水稀释-硫酸铵盐析-阴离子交换层析三级提取法纯化IgY;SDS-PAGE测定各级提取物的抗体纯度;间接ELISA法和双向免疫扩散法观察效价变化;动物体外中和实验检测其生物活性。结果:卵黄经水稀释法及经60%硫酸铵盐析蛋白回收率为40.36%;进一步经阴离子交换层析,总蛋白回收率14.86%,效价提高24倍;IgY分子量约为220 kD,由两个亚基组成;体外中和试验表明,2.28 mg/kg特异性IgY能完全中和2 LD50的眼镜蛇毒,保护小鼠免受眼镜蛇毒的攻击。结论:以眼镜蛇毒原毒为免疫源,经水提、盐析、层析三级提取,可从鸡卵黄中获得高纯度、高活性的特异性IgY。

卵黄抗体(IgY)及其在蛇伤治疗中的研究进展

传统抗蛇毒血清存在生产成本高、得率低、多种副作用等不足,使得寻找更理想的蛇毒解毒剂变得十分迫切;因卵黄抗体(IgY)在生产及中和蛇毒毒性等方面所体现的独特优势,成为开发新蛇毒解毒剂的重要研究对象。当前研究表明:IgY与哺乳动物IgG功能相似但结构不同;IgY据有良好的耐压及耐酸碱稳定性,但对高温及蛋白水酶敏感;相比IgG,IgY的生产成本低且具有非侵略性,其运用于免疫分析可降低假阳性率;产蛋鸡的免疫应答受抗原(剂量、分子量)、佐剂类型、免疫途径、免疫间隔等4种主要因素共同影响;纯化方法影响IgY纯度与活性;已制备出的多种抗蛇毒IgY对蛇毒引起的毒理作用有很好的中和效果。随着生物技术的快速发展,抗蛇毒IgY有望被开发成解毒剂、诊断试纸、亲和配体、口服制剂等,在蛇伤研究领域的应用前景广阔。