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Immobilization of antibodies on the self-assembled monolayer by antigen-binding site protection and immobilization kinetic control 被引量:1
1
作者 Myungok Yoon Hyun Jin Hwang Jeong Hee Kim 《Journal of Biomedical Science and Engineering》 2011年第4期242-247,共6页
The orientation of the biological molecule immobi-lized on a solid surface has been critical in devel-opment of various applications. In this study, ori-entation of antibody was retained by protecting the antigen-bind... The orientation of the biological molecule immobi-lized on a solid surface has been critical in devel-opment of various applications. In this study, ori-entation of antibody was retained by protecting the antigen-binding site of the antibody prior to immo-bilization to -functionalized mixed self-assembled monolayer (SAM) of 12-mercaptododecanoic acid and 1-heptanethiol. More importantly, the number of immobilization bonds formed between each an-tigen-binding site protected antibody molecule and the solid surface was controlled by optimizing the mole fraction of the activated carboxyl group of the linker molecules in the mixed SAM. The amount of antibody used in this study was approximately equivalent to the amount for one monolayer surface coverage. The resulting activity of protected immo-bilized antibody was about 10 fold higher than that of random immobilized 展开更多
关键词 Antibody Oriented IMMOBILIZATION antigen-Binding site PROTECTION SELF-ASSEMBLED MONOLAYER Kinetic Control
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Total and free prostate-specific antigen indexes in prostate cancer screening:value and limitation for Japanese populations 被引量:2
2
作者 Noboru Hara YasuoKitamura +1 位作者 ToshihiroSaito ShuichiKomatsubara 《Asian Journal of Andrology》 SCIE CAS CSCD 2006年第4期429-434,514-515,共6页
Aim:To assess the efficacy and limitation of free/total prostate-specific antigen ratio(f/tPSA)at a single institution in Japan,focusing on the avoidance of pointless prostate biopsies.Methods:In total,631 men between... Aim:To assess the efficacy and limitation of free/total prostate-specific antigen ratio(f/tPSA)at a single institution in Japan,focusing on the avoidance of pointless prostate biopsies.Methods:In total,631 men between 44 and 93 years old(mean 69.8 years)with elevated PSA underwent power-Doppler ultrasoundgraphy-guided transrectal 10-core prostate biopsies at Niigata Cancer Center Hospital,and their histological features were investigated with total PSA (tPSA)and f/tPSA.Results:PCa was detected in 126 of 134 patients(94.3%)with tPSA of 26 ng/mL or higher.The detection rate was 59.4% for tPSA of 21-25 ng/mL,followed by 39.2% for 16-20 ng/mL,30.0% for 11-15 ng/mL, 20.0% for 4.1-10 ng/mL and 7.6% for≤4.0 ng/mL,f/tPSA of the PCa group was significantly lower than that of non-malignamt disorders in any tPSA ranges(mean 0.122 vs.0.160,P<0.001).Receiver-operating characteristics analyses showed that f/tPSA(AUC:0.664)performed more valuably than tPSA(AUC:0.559)in patients with tPSA between 3.0-10 ng/mL(P<0.01).Although f/tPSA of 0.250 for the cut-off value might miss 1.8% PCa patients,it potentially spares 9.2% of unnecessary biopsies.Conclusion:f/tPSA is more valuable compared with tPSA alone for the prediction of the occurrence of PCa.We recommend 0.250 as the cut-off value for f/tPSA in PCa screening for Asian men having so-called grey-zone tPSA.(Asian J Androl 2006 Jul;8:429-434) 展开更多
关键词 prostate cancer screening free/total prostate-specific antigen ratio multi-site biopsy single-institutional trial
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苏紫猪SLA-1基因多态性及其抗病潜能分析 被引量:1
3
作者 王泽平 王飞飞 +6 位作者 张芮铭 付言峰 赵为民 戴超辉 程金花 廖超 李辉 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期1918-1927,共10页
【目的】探究苏紫猪白细胞抗原-1(swine leukocyte antigen-1,SLA-1)基因多态性,并对其抗病潜能进行分析,以期为苏紫猪分子育种提供理论基础。【方法】以苏紫猪血细胞cDNA为模板,用PCR法扩增苏紫猪SLA-1基因并测序,利用DNAStar和Mega 5.... 【目的】探究苏紫猪白细胞抗原-1(swine leukocyte antigen-1,SLA-1)基因多态性,并对其抗病潜能进行分析,以期为苏紫猪分子育种提供理论基础。【方法】以苏紫猪血细胞cDNA为模板,用PCR法扩增苏紫猪SLA-1基因并测序,利用DNAStar和Mega 5.0软件分别进行相似性分析及系统进化树构建;利用NetMHCpan 4.1 server分析SLA-1与非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)抗原表位结合的能力及特征;运用生物学软件对其编码蛋白的理化性质、亲/疏水性、跨膜区、结构和功能等进行预测。【结果】试验成功扩增6条苏紫猪SLA-1等位基因序列,分别为SLA-1*sz01、SLA-1*sz02、SLA-1*sz03、SLA-1*sz04、SLA-1*sz05和SLA-1*sz06,其高变异位点主要位于肽结合沟(peptide-binding groove,PBG)α1区和α2区;相似性比对结果显示,6条苏紫猪SLA-1等位基因核苷酸、氨基酸序列相似性分别在92.9%~96.9%、87.0%~94.8%之间,与不同品种猪核苷酸、氨基酸序列相似性分别在92.8%~98.8%、84.3%~98.0%之间;ASFV来源多肽结合能力的预测结果显示,SLA-1*sz01蛋白具有较强的ASFV抗原呈递能力,与ASFV来源B354L蛋白多肽片段FIDKTTVLY具有最高亲和力;SLA-1*sz01蛋白功能域及三级结构预测结果显示,SLA-1*sz01与免疫系统相关,具有经典的SLA-1三级结构。【结论】本研究扩增得到6条苏紫猪SLA-1基因序列,其中SLA-1*sz01能够限制性结合较多的ASFV来源抗原表位多肽,与多肽片段FIDKTTVLY具有最高亲和力,可作为苏紫猪抗病育种的候选基因。研究结果为ASFV疫苗的研发提供参考基础。 展开更多
关键词 苏紫猪 SLA-1基因 多态性 抗原结合位点 抗病潜能
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鸭坦布苏病毒E蛋白生物信息学分析 被引量:1
4
作者 胡怡 徐欢 +5 位作者 杜志强 朱玲玲 汪婷 殷世彬 汪威 汪招雄 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2023年第3期192-199,共8页
鸭坦布苏病毒(DTMUV)是一种能造成蛋鸭产蛋下降的新型黄病毒,E蛋白是鸭坦布苏病毒主要的抗原蛋白。本试验利用Protparam、ProtScale等相关在线软件预测分析了E蛋白的理化性质、亲水性、跨膜螺旋区、信号肽、亚细胞定位、二、三级结构和T... 鸭坦布苏病毒(DTMUV)是一种能造成蛋鸭产蛋下降的新型黄病毒,E蛋白是鸭坦布苏病毒主要的抗原蛋白。本试验利用Protparam、ProtScale等相关在线软件预测分析了E蛋白的理化性质、亲水性、跨膜螺旋区、信号肽、亚细胞定位、二、三级结构和T、B细胞抗原表位以及翻译后的修饰位点。结果表明,DTMUV E蛋白的分子式为C2405H3757N649O723S32,由501个氨基酸组成,理论等电点为7.63。该蛋白是定位于病毒衣壳中有2个跨膜螺旋区的稳定性、亲水性蛋白。分别由41.52%、19.96%、32.34%、6.19%的氨基酸参与E蛋白的无规律卷曲、α-螺旋、延伸链和β-转角的形成。三级结构预测模型蛋白覆盖率为100%。该蛋白含有18个潜在的糖基化修饰位点,52个潜在的磷酸化修饰位点,20个潜在的抗原决定簇,其中含有4个连续氨基酸数量超过10个的B细胞抗原表位。选取HLA_DRB1_0801亚型时,CD4+抗原表位有15个强结合肽,43个弱结合肽。对DTMUV E蛋白序列分析显示该蛋白是一种没有信号肽,有跨膜区,具有良好免疫原性的亲水性蛋白,该结果为对E蛋白功能的进一步研究奠定了理论基础。 展开更多
关键词 鸭坦布苏病毒 E蛋白 修饰位点 抗原表位
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日本乙型脑炎病毒单克隆抗体的抗原结合位点及亲和力测定 被引量:7
5
作者 张明杰 汪美先 +2 位作者 姜绍谆 马文煜 于碧云 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第1期34-37,共4页
用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别... 用快速酶联免疫吸附试验双抗体夹心法(RDS-ELISA),测定了6株抗日本乙型脑炎病毒(JEV)单克隆抗体(nG2、2H4、2D2、mG9、2F2、mC3)的抗原结合位点及相对亲和力。通过ELISA相加试验证实,6株单克隆抗体识别5个不同的抗原位点.2H4和2F2识别的抗原位点相同或接近,而其余单克隆抗体则识别不同的或相距较远的抗原位点。从50%最大结合的单克隆抗体浓度分析可知,6株单克隆抗体的相对亲和力为nG2>2H4>2D2>mG9>2F2>mC3,浓度范围约为0.01~1.50ng。本研究为JEV单克隆抗体在诊断学及其疫苗研究中的应用提供了必要的资料。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 单克隆抗体 抗原位占
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猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间片段的克隆与原核表达 被引量:2
6
作者 张春叶 孙英健 +3 位作者 沈红 李焕荣 吴国娟 于同泉 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第6期510-513,共4页
将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白。结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析... 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点B与C之间的目的片段经克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导重组菌株表达其融合蛋白。结果显示,目的片段的大小为357bp,序列分析表明,S基因与其他猪传染性胃肠炎病毒相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测表明,分子质量约34ku的融合蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 传染性胃肠炎病毒 S基因 抗原位点B 抗原位点C 克隆 原核表达
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在毕赤酵母中的表达 被引量:4
7
作者 于天飞 王君伟 +1 位作者 胡森 靳淼 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期154-157,共4页
采用基因重组的方法构建了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K-ts,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达外源蛋白的毕赤酵母工程菌株GS... 采用基因重组的方法构建了含有猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段的巴斯德毕赤酵母Pichiapastoris分泌型表达载体pPIC9K-ts,经线性化后采用电穿孔法将其导入毕赤酵母GS115中,大量筛选后获得高效表达外源蛋白的毕赤酵母工程菌株GS115/pPIC9K-ts。表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性。本研究为TGE的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 抗原位点 表达 毕赤酵母
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猪繁殖与呼吸综合征病毒山东分离株N蛋白基因的原核表达及其单克隆抗体的制备与鉴定 被引量:4
8
作者 曹丙蕾 张群 +2 位作者 凌宗帅 邱洪凯 杨超然 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2014年第4期1772-1776,共5页
采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His... 采集某发病猪场病料进行疑似PRRSV分离鉴定,经克隆测序获得一株美洲型的高致病性PRRSV SD-TA株分离株,并对其N蛋白(核衣壳蛋白)基因设计引物进行克隆转化,构建重组质粒pET-30a-ORF7,鉴定后经诱导表达纯化获得大小约为21KD(含6×His标签蛋白)的重组N蛋白。将纯化蛋白免疫BALB/c小鼠,经间接ELISA检测后取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行细胞融合,并对融合细胞上清进行抗体检测,通过有限稀释法,获得了2株能稳定分泌抗N蛋白抗体的杂交瘤细胞株,命名为6D10和3H5,经鉴定后两者均为IgG1型,且识别于不同的抗原位点,经Western-blot和IFA检测,单抗6D10和3H5均能与N蛋白发生特异性反应,与无关蛋白无交叉反应,且均能与PRRSV经典株(VR株)和高致病性变异株(SD-TA株)感染的Marc-145细胞产生特异性反应。 展开更多
关键词 PRRSV 单克隆抗体 抗原位点 WESTERN-BLOT IFA
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猪传染性胃肠炎病毒纤突蛋白抗原表位区的表达及其免疫原性分析 被引量:4
9
作者 秦志华 张明宇 +1 位作者 张传美 单虎 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第7期22-24,共3页
为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白(S)上主要抗原位点的免疫原性,本研究将S基因上A、B、C、D四个位点进行RT-PCR扩增,构建重组质粒pET30a-S,诱导表达后Western-blot检测,表明目的蛋白具有良好的抗原性。将纯化的目的蛋白免疫小鼠3... 为研究猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)纤突蛋白(S)上主要抗原位点的免疫原性,本研究将S基因上A、B、C、D四个位点进行RT-PCR扩增,构建重组质粒pET30a-S,诱导表达后Western-blot检测,表明目的蛋白具有良好的抗原性。将纯化的目的蛋白免疫小鼠3次,在初次免疫后第0,14,28,42天采血,并用间接ELISA方法监测血清抗体动态水平变化。结果表明,获得的重组蛋白能诱导免疫小鼠产生特异性的体液免疫,说明该蛋白具有发展成TGEV亚单位疫苗的潜力。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 抗原表位 原核表达 免疫原性
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应用抗-HBc单克隆抗体研究乙型肝炎核心抗原的抗原位点 被引量:2
10
作者 詹美云 汤少华 +3 位作者 张文英 田瑞光 张满仓 刘崇柏 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 1990年第2期140-144,共5页
应用基因工程表达的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)免疫Balb/c小鼠,取该鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得8株能稳定分泌高滴度抗HBcAg抗体的杂交瘤细胞株.用其中7株(4A4、4B5、3H6、3A5、1G8、1D3、5G10)与HBcAg亲和性相近的单克隆抗体(Mc... 应用基因工程表达的乙型肝炎核心抗原(HBcAg)免疫Balb/c小鼠,取该鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞融合,获得8株能稳定分泌高滴度抗HBcAg抗体的杂交瘤细胞株.用其中7株(4A4、4B5、3H6、3A5、1G8、1D3、5G10)与HBcAg亲和性相近的单克隆抗体(McAb)首次证明,在HBcAg上存在3个不同的抗原位点,并分别命名为α、β和γ. α抗原位点:能诱生中和及免疫沉淀抗体,在体外能中和HBcAg的抗原活性,能与HBc-Ag产生免疫沉淀线.如3H6、4A4、4B5、3A5等单克隆抗体. β抗原位点:不能诱生中和及免疫沉淀抗体,但此种单克隆抗体与4A4或4B5混合后即可与HBcAg产生免疫沉淀线.如1G8、1D3 McAbs. γ抗原位点:能诱生免疫沉淀抗体,但不能诱生中和抗体.如5G10McAb. 抗相同抗原位点的单克隆抗体之间可产生有意义的互相竞争抑制,而抗不同抗原位点的单克隆抗体之间则无,或很少有竞争抑制.对有关问题进行了讨论. 展开更多
关键词 乙型肝炎 核心抗原 抗原位点
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猪传染性胃肠炎病毒S基因B和C抗原位点片段在昆虫细胞中的胞内表达 被引量:2
11
作者 于天飞 邵淑丽 +2 位作者 黎明 吕建伟 徐兴军 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 CAS 2012年第4期277-280,共4页
通过基因重组的方法,在昆虫细胞胞内表达了猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因B和C抗原位点片段.表达蛋白经Dot-ELISA检测具有良好的抗原性.本研究为TGEV的血清学检测方法的建立提供了必要的物质基础.
关键词 TGEV 抗原位点 昆虫细胞 胞内表达
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口蹄疫病毒VP1基因C末端串连表达及其抗体ELISA方法的初步建立 被引量:1
12
作者 彭贵青 陈焕春 +3 位作者 钱平 李祥敏 洪琦 顾贫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第6期670-674,共5页
口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B细胞和T细胞抗原表位位于其C末端,参照Taiwanse97(AJ294928)设计了1对特异性引物,扩增出VP1基因C末端。序列分析表明:其C末端长285bp,编码74个氨基酸,与O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99核苷酸和氨基酸同源... 口蹄疫病毒主要免疫原性基因VP1的B细胞和T细胞抗原表位位于其C末端,参照Taiwanse97(AJ294928)设计了1对特异性引物,扩增出VP1基因C末端。序列分析表明:其C末端长285bp,编码74个氨基酸,与O/HKN/12/91、O/PEN/TAW/99核苷酸和氨基酸同源性分别为95%、93%和96%、93%;利用同尾酶Xho 、Sal 将VP1基因C末端串连起来;再将单拷贝和双拷贝C末端基因插入到原核表达载体pGEX-KG后,转化BL21(DE3),在IPTG诱导下获得表达,经Westernblot检测证实表达产物具有活性。以表达产物包被ELISA板,初步建立了特异、敏感的ELISA诊断方法。同时用表达产物免疫Balb/c小鼠,能产生一定的抗O型口蹄疫病毒的抗体。 展开更多
关键词 抗体 表达产物 末端 ELISA方法 VP1基因 T细胞抗原 表位 口蹄疫病毒 O型口蹄疫 特异性引物
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口蹄疫病毒抗原位点研究进展 被引量:7
13
作者 吴海波 邵军军 常惠芸 《动物医学进展》 CSCD 2005年第9期1-4,共4页
抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫... 抗原位点是在空间结构上相互独立的蛋白结构域,并决定了蛋白的抗原特性。口蹄疫病毒有A、O、C、Asia1、SAT1、SAT2和SAT3型7个血清型,口蹄疫病毒的抗原结构十分复杂,不同的血清型有着不同的抗原位点,并且存在广泛的抗原变异。对口蹄疫病毒的抗原位点进行分析一直是口蹄疫病毒研究领域中的热点,该研究将有助于了解病毒的致病机理和推动新型疫苗的研制。文章对病毒的基本特性、抗原位点的研究方法和研究概况做一综述。 展开更多
关键词 口蹄疫病毒 基本特性 抗原位点
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猪传染性胃肠炎病毒S基因A抗原位点序列的克隆与原核表达 被引量:2
14
作者 张春叶 张莉 +4 位作者 沈红 李焕荣 吴国娟 于同泉 路苹 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期845-849,共5页
将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫... 将RT-PCR扩增的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因A抗原位点目的片段克隆、双酶切后连接于表达载体,经酶切、PCR和测序鉴定的阳性重组质粒转化BL21(DE3),用IPTG诱导,进行SDS-PAGE和Western-blotting分析,确定目的蛋白的原核表达情况和免疫特异性。结果显示,目的片段的大小为534bp,序列分析表明,该基因与其他TGEV相应基因具有很高的同源性;Western-blotting检测可见分子质量约43 ku的融合蛋白条带,表明,该蛋白具有良好的反应原性。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因A抗原位点 克隆 原核表达
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甲型H1N1流感病毒HA基因进化与蛋白特征分析 被引量:3
15
作者 周小东 曾照芳 李明强 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期75-78,共4页
目的:通过对甲型H1N1流感病毒的HA基因序列进行分析,揭示其基因的变异性与本次疫病流行的内在因素的关系。方法:运用DNAStar、DNAMAN、Modeller 9V6和在线分析软件等生物信息学手段对HA基因和蛋白进行比较分析。结果:甲型H1N1流感毒株... 目的:通过对甲型H1N1流感病毒的HA基因序列进行分析,揭示其基因的变异性与本次疫病流行的内在因素的关系。方法:运用DNAStar、DNAMAN、Modeller 9V6和在线分析软件等生物信息学手段对HA基因和蛋白进行比较分析。结果:甲型H1N1流感毒株的HA基因来源于猪源谱系流感病毒,免疫压力比较小,基因重组融合了人流感病毒基因片段。甲型H1N1流感病毒HA蛋白裂解位点氨基酸性质保守,碱性氨基酸不足,但潜在表位整体电势发生改变影响到抗体分子的识别和结合。HA蛋白多个抗原位点发生显著变化,并且有3糖基化位点就发生在抗原决定簇上;结论:HA基因重组导致HA蛋白变异致使抗原改变,造成人群普遍缺乏特异性免疫力,导致流感暴发与大规模流行。 展开更多
关键词 甲型H1N1 流感病毒 HA 生物信息 糖基化位点 抗原位点
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猪轮状病毒vp4基因的克隆及其在昆虫细胞中的表达 被引量:4
16
作者 宋岩 师东方 +3 位作者 樊琛 刘胜旺 魏华 李一经 《中国病毒学》 CSCD 2005年第1期61-64,共4页
本研究扩增猪轮状病毒中国分离株 JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1 756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得 vp4... 本研究扩增猪轮状病毒中国分离株 JL94株VP4蛋白主要抗原编码区基因(1 756 bp),将测序结果与国外分离株进行比较;将该基因片段同载体pMel BacA连接后,与杆状病毒DNA共转染入昆虫细胞Sf9,经蚀斑筛选纯化重组病毒并再感染Sf9细胞获得 vp4 基因的表达,对表达的 VP4 蛋白进行 Western blot分析和血清中和抗体试验。结果表明:JL94株VP4主要抗原编码区基因与国外分离株 CRW 8 株、Gottfried株该基因片段氨基酸同源性分别为96.43%和67%,说明 JL94株与 CRW 8 株属同一 VP4 血清型,而与 Gottfried株属不同血清型。JL94 株VP4主要抗原编码区氨基酸最大变异处位于 aa81 aa207。vp4 基因在昆虫细胞中表达量占细胞总蛋白的 20%,Western Blot证实表达蛋白有良好的生物学活性。所表达的蛋白免疫小鼠产生中和抗体,阻断 JL94 在 MA104 细胞上引起的细胞病变。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP4基因 主要抗原编码区基因 克隆 真核表达
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青海省2011-2012年乙型流感病毒HA1基因特性研究 被引量:6
17
作者 于娟 饶华祥 +3 位作者 李红 卢囡囡 易虎 赵生仓 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期32-35,共4页
目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株,提取病毒RNA,通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,采用DNA Star5.0MegAlign和MEGA4... 目的了解2011—2012年青海省乙型流感病毒HA1基因变异情况。方法随机选择2011—2012年流感病原监测中分离到的乙型流感毒株,提取病毒RNA,通过RT—PCR法扩增病毒HA1基因,纯化产物进行核苷酸序列测定,采用DNA Star5.0MegAlign和MEGA4.0生物软件对测序结果进行分析处理,推导出氨基酸序列并进行基因特性分析。结果12株Victoria系乙流感病毒HA1区域核苷酸序列与2009—2011年WHO推荐疫苗株B/Brisbane/60/2008同源性为88.6%~95.7%,氨基酸替换数在2~5个,所有分离株均在1个相同的氨基酸位点发生了相同的替换,部分分离株在320位减少了一个糖基化位点。5株Yamagata系乙型流感病毒HAl区域核苷酸序列与2011-2012年WHO推荐疫苗株B/Wisconsin/01/2010HA1区相比较同源性为97.7%~99.3%,氨基酸替换数在2—3个,所有分离株均在2个相同的氨基酸位点发生了相同的替换(N116K,D196N),在196位增加了一个糖基化位点。结论青海省2011—2012年乙型流感病毒HA1基因特性正在逐渐发生变异,但尚未形成抗原漂移,今后在流感监测工作中要加强流感病原学的监测,及时发现新的乙型流感病毒变异株。 展开更多
关键词 乙型流感病毒 HA1基因 抗原决定簇 糖基化位点
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新城疫病毒HN基因主要抗原位点区段的原核表达 被引量:2
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作者 罗晶璐 齐岩 任涛 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期90-93,共4页
利用生物软件对新城疫病毒GD/GM/03/Ch的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定169-267位氨基酸、318-405位氨基酸和448-571位氨基酸3个区域作为多肽表位候选区域.用含新城疫病毒HN基因的重组质粒为模板,设计引物通过PCR扩... 利用生物软件对新城疫病毒GD/GM/03/Ch的血凝素神经氨酸酶(HN)蛋白进行抗原特性分析,选定169-267位氨基酸、318-405位氨基酸和448-571位氨基酸3个区域作为多肽表位候选区域.用含新城疫病毒HN基因的重组质粒为模板,设计引物通过PCR扩增获得HNa、HNb和HNc 3个抗原结构域基因片段,分别经双酶切定向克隆到原核表达载体pBT上进行表达,并构建了pBT-HNa-b-c串联重组质粒进行表达,经过SDS-PAGE和W est-ern-b lot分析,验证了表达产物具有反应原性. 展开更多
关键词 新城疫病毒 HN基因 抗原位点 原核表达
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O型口蹄疫病毒结构蛋白VP1的原核表达与抗原性分析 被引量:3
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作者 徐程 陈亚波 方维焕 《动物医学进展》 CSCD 2007年第6期14-18,共5页
研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目... 研究分析了O型口蹄疫病毒(FMDV)结构蛋白VP1与当前猪FMDV疫苗血清的免疫反应性。将VP1基因克隆至原核表达载体pET32c,并在大肠埃希菌BL21中得到了表达,Western blot分析表明该重组蛋白与豚鼠O型FMDV标准阳性血清具有良好免疫反应性。目的蛋白经纯化后用ELISA分析其与猪疫苗血清的免疫反应性,结果显示该重组VP1蛋白(rVP1)只能与部分O型FMDV疫苗血清反应。推测当前使用的不同O型FMDV疫苗毒株在VP1重要中和抗原位点G-H环(134 aa^158 aa)与C末端(200 aa^213 aa)存在较大差异。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 免疫反应性 疫苗毒株 中和抗原位点
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猪轮状病毒vp4基因在大肠杆菌中的表达 被引量:2
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作者 宋岩 李一经 +3 位作者 魏丽丽 于小龙 樊琛 师东方 《中国病毒学》 CSCD 2004年第5期462-466,共5页
以猪轮状病毒JL94株核酸为模板扩增该病毒vp4全基因,对扩增产物进行测序及序列比较;根据VP4的5’端(1bp~750bp)特异片段主要决定其活性的观点,再设计一对引物扩增该主要抗原位点基因,将此主要抗原位点基因同pGEX-6P-1载体连接并转化入E... 以猪轮状病毒JL94株核酸为模板扩增该病毒vp4全基因,对扩增产物进行测序及序列比较;根据VP4的5’端(1bp~750bp)特异片段主要决定其活性的观点,再设计一对引物扩增该主要抗原位点基因,将此主要抗原位点基因同pGEX-6P-1载体连接并转化入E.coli.BL21(DE3)plays,经IPTG诱导表达出蛋白质;对表达的蛋白进行Westernblot分析、纯化和血清中和抗体试验。结果表明:JL94株与国外分离株CRW-8株、BEN-307株vp4全基因片段氨基酸同源性分别为96.98%和98.05%,说明JL94株与CRW-8株、BEN-307株属于同一VP4血清型;经IPTG诱导VP4主要抗原位点基因获得了高效表达,表达量占菌体蛋白的26%;Westernblot结果和所表达的融合蛋白免疫小鼠产生的中和抗体能阻断JL94在MA104细胞上引起的细胞病变,说明所表达蛋白有良好的生物学活性。 展开更多
关键词 猪轮状病毒 VP4基因 VP4主要抗原位点基因 原核表达
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