Effects of antisense oligonucleotides targeting VEGF on radio sensitivity of uterine cervix cancer Hela cells

决定反的影响的目的察觉到在子宫的宫颈癌症 Hela 细胞的放射敏感度上指向脉管的内皮生长因素(VEGF ) 的 oligonucleotides。方法 VEGF 反感觉 oligodeoxynucleotides (ASODN ) 是进由调停 liposome 的方法的 Hela 房间的 transfected。有 oligodeoxynuclecotide 和 saline 的房间 transfected 被用作控制组。房间被 6 MV X 光线分别地在 0 Gy， 2 Gy， 4 Gy 和 6 Gy 的剂量照耀。VEGF mRNA 的表示被 RT-PCR 决定。Apoptosis 用 FCM 被评估。克隆效率由菌落形成试金是坚定的。结果 VEGF mRNA 的表示被 ASODN 禁止(P 【 0.01 ) 在 Hela 房间。被放射影响的禁止的激活导致了增加 apoptosis (P 【 0.01 ) 并且禁止平皿接种效率(P 【 0.01 ) 。VEGF 的表示在 Hela 房间由 X 照耀导致了的结论能被 VEGF ASODN 堵住。有 VEGF 的治疗可能在 HeLa 房间增加 apoptosis 并且提高放射敏感度。

^(99)Tc^m-EC-ASODN反义探针的合成和标记

报道反义探针99Tcm-EC-ASODN的合成和标记。将次乙酰双半胱氨酸(L,L-ethylenedicysteine,EC)与反义寡脱氧核苷酸(Antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)进行偶联,形成复合物EC-ASODN,通过核磁共振图谱(1H-NMR)、红外图谱(IR)、紫外(A260)吸收和电泳,鉴定EC-ASODN复合物的结构。用锝(99Tcm)标记EC-ASODN,通过薄层层析评价99Tcm-EC-ASODN的标记率、放化纯和稳定性。结果显示,1H-NMR、IR谱图、紫外吸收和电泳都证实EC与ASODN联结形成EC-ASODN,99Tcm-EC-ASODN的标记率为77.28%,放化纯为97.52%,Rf=0.95—1,4h内具有很好的稳定性。结论:EC与ASODN能形成稳定的复合物EC-ASODN,用99Tcm标记,方法简便,能得到标记率高和稳定性好的反义探针。

STAT6 ASODN对哮喘小鼠脾淋巴细胞影响的实验研究

目的研究STAT6反义寡核苷酸对哮喘小鼠脾淋巴细胞的影响作用。方法实验细胞分组:正常鼠空白组(A组)、正常鼠OVA组(B组)、哮喘空白组(C组)、哮喘OVA组(D组)、哮喘治疗组(E组)。正常设计并人工合成一段互补于小鼠STAT6 mRNA翻译起始区271-290的反义寡核苷酸片段,全链硫代修饰。用卵白蛋白和氢氧化铝复制哮喘模型,用淋巴细胞分离液分离脾淋巴细胞,进行体外培养并导入由阳离子脂质体转染剂Geneshuttle携带的反义寡核苷酸,观察反义寡核苷酸的转染对脾淋巴细胞STAT6蛋白表达水平及细胞培养上清中IL-4分泌水平的影响。免疫细胞化学观察脾淋巴细胞中STAT6蛋白的表达水平,同时采用酶联免疫吸附(ELISA)法测定脾细胞培养上清液中IL-4的浓度。结果D组细胞STAT6蛋白表达明显高于其余各组,均具有显著性差异(P均<0.01),STAT6 ASODN转染后,E组细胞该蛋白的表达量明显下降(P<0.01);D组脾淋巴细胞培养上清中IL-4分泌水平明显高于其余各组,均具有显著性差异(P均<0.01);STAT6 ASODN转染后,E组培养上清中IL-4分泌水平显著低于D组(P<0.01)。结论STAT6 ASODN可特异性抑制哮喘鼠脾淋巴细胞中STAT6蛋白的表达,并可特异性抑制脾淋巴细胞中IL-4的分泌,为反义基因技术治疗哮喘提供了依据。

PEI-RGD/^(125)I-(α_V) ASODN的制备及其对肝癌HepG2细胞侵袭力的抑制

目的:探讨以PEI-RGD(polyethyleneimine-Arg-Gly-Asp)为转染载体的125I-(αV)ASODN投递在体外对HepG2肝癌细胞侵袭力的影响。方法:125I标记整合素αV亚基的ASODN,以聚乙烯亚胺衍生物PEI-RGD为载体制备PEI-RGD/125I-(αV)ASODN复合物,通过受体介导方式转染进入HepG2细胞,利用Boyden小室侵袭模型检测复合物对HepG2细胞侵袭力的影响。结果:(1)125I-(αV)ASODN的标记率为(73.78±4.09)%,放化纯度为(96.68±1.38)%,37℃放置48 h后的放化纯度仍>90%,表明其稳定性良好;(2)HepG2细胞对PEI-RGD/125I-(αV)ASODN的摄取于4μl/2μg时达到峰值[(12.77±0.85)%],之后明显降低,故选择2μl/1μg作为PEI-RGD/125I-(αV)ASODN对HepG2细胞的作用剂量;(3)相对于其他实验组和对照组,PEI-RGD/125I-(αV)ASODN组显著降低了HepG2细胞的侵袭能力(P<0.01)。结论:以PEI-RGD为载体投递125I-(α)ASODN能有效抑制HepG2细胞的侵袭力。

c-mycASODN对半乳糖诱导的晶体上皮细胞中两种抗氧化酶活性的影响

目的 探讨ASODN对半乳糖性白内障晶体上皮细胞 (LEC)中抗氧化系统活力的影响。方法 采用组织培养方法 ,以半乳糖诱发兔晶状体形成白内障 ,以不同浓度c mycASODN导入LEC后检测LEC中GSH Px、SOD活性。结果 在半乳糖性白内障形成过程中 ,LEC中GSH Px、SOD活性明显降低 ,导入不同浓度c mycASODN后 ,LEC中GSH Px、SOD活性明显增加。结论 在半乳糖性白内障形成过程中 ,导入c mycASODN后能改善LEC的抗氧化能力。

趋化因子受体CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达

背景与目的:研究表明,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1(stromalcell-derivedfactor1)与肿瘤的增殖、分化和转移等恶性表现密切相关。本研究通过观察分化程度和增殖能力不同的鼻咽癌细胞中CXCR4的表达,初步了解CXCR4与鼻咽癌细胞恶性表现的关系。方法:分别以全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,RA)和端粒酶反义核酸处理鼻咽癌CNE1(高分化)和CNE2Z(低分化)细胞,原位杂交技术检测CXCR4mRNA表达,免疫组化法检测CXCR4蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,MTT法检测细胞增殖能力。结果:CXCR4mRNA和CXCR4蛋白在鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞均呈强阳性表达,且CNE2Z细胞表达强度显著高于CNE1细胞。经1×10-5mol/L和1×10-4mol/LRA作用后,与对照组比较,CNE1细胞G1期细胞明显增多,CNE2Z细胞S期细胞明显增多,同时两者的CXCR4mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.01),其中1×10-4mol/LRA作用较1×10-5mol/LRA作用强(P<0.01)。经端粒酶反义核酸作用后,CNE1和CNE2Z细胞增殖均明显受抑制,CXCR4蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CXCR4在鼻咽癌细胞高表达,其表达水平与鼻咽癌细胞的分化程度和增殖能力有关。

脂质体介导bcl-x_L反义寡核苷酸对鼻咽癌CNE-2Z细胞株凋亡的影响

背景与目的:实验证明bcl-xL在鼻咽癌CNE-2Z细胞中存在高表达,它可能在鼻咽癌的发生发展中发挥着重要的作用。本研究以脂质体(lipofectin)为载体,将人工合成的bcl-xL反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)片段导入CNE-2Z细胞,拟探讨ASODN对CNE-2Z细胞的影响。方法:以bcl-xL的编码区为靶点,人工合成20个碱基全硫代修饰的反义寡核苷酸,脂质体转染反义寡核苷酸进入CNE-2Z细胞后,用MTT法检测细胞成活率;用琼脂糖凝胶电泳、荧光染色、流式细胞术等方法检测细胞凋亡。结果:MTT结果发现,ASODN在Lip介导下即可显著抑制CNE-2Z细胞株细胞增殖(P<0.01),ASODN对细胞增殖的抑制作用随其浓度增加而增强;ASODN作用细胞36h后,经Hoechst33258/PI双染在荧光显微镜下可见细胞缩小、染色质固缩、核断裂;流式细胞仪分析发现在G1峰前出现一个亚二倍体峰即凋亡峰;琼脂糖凝胶电泳分析可见ASODN/Lip处理组出现明显的“梯状”外观等凋亡特征性改变。结论:ASODN脂质体转染CNE-2Z细胞后可促进CNE-2Z的细胞凋亡;在肿瘤研究中,bcl-xL可作为一个有用的靶基因,为开发鼻咽癌基因治疗药物提供实验依据。

CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的:观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MGC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bc l-2的表达水平,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法:RT-PCR法检测CD44、bc l-2 mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果:CD44反义寡核苷酸(1.6μmol/L)处理后,明显地抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达水平,在CD44配体低分子量透明质酸(HA)存在下,使MGC80-3表面下调的Fas分子显著增高,表达率从6.69%提高到16.81%(P<0.01)。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高,并呈效靶比依赖效应(P<0.01)。MGC80-3细胞bc l-2 mRNA的相对表达定量值由1.06降至0.32。结论:CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达,上调Fas分子的表达,下调凋亡抵抗基因bc l-2的表达,并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。

反义寡核苷酸抑制survivin基因表达及肝癌细胞生长的研究

目的:采用反义寡核苷酸抑制肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的作用。方法:采用脂质 体介导survivin反义寡核苷酸转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,Western blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表 达,流式细胞仪检测凋亡细胞比率,检测转染前后细胞贴壁率变化,并绘制细胞生长曲线。结果:survivin反义寡核苷酸转染 后,肝癌细胞survivin蛋白及mRNA表达均显著降低,细胞贴壁率显著降低,细胞增殖活性明显受抑,细胞凋亡率显著增加。 结论:survivin反义寡核苷酸转染可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长。

反义核酸与疾病治疗研究进展

反义寡核苷酸是根据碱基互补原理,用人工或生物合成的特定互补的DNA或RNA序列,导入靶细胞,形成mRNA-DNA或mRNA-RNA杂交双链,从而抑制或封闭目的基因的表达,使其丧失活性,达到基因控制和治疗的目的。反义寡核苷酸药物的发展开拓了基因药理学的一个新领域。本文综述了反义寡核苷酸的分类核作用机制及其在病毒感染、肿瘤和心血管等疾病治疗中的应用,并提出这一领域中存在的一些问题。

反义寡核苷酸对丙型肝炎病毒调控基因表达的体外抑制活性研究

为探讨反义寡核苷酸（ Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ） 对丙型肝炎病毒（ Ｈ Ｃ Ｖ） 的抑制活性，研究和开发新型抗 Ｈ Ｃ Ｖ 药物。采用 Ｈ Ｃ Ｖ ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞株 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ ，评价了３ 条针对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ，即 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 。将 Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ 包封的 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎ 与 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６ 细胞株每天作用５ 小时，连续３ 天后检测荧光素酶活性。结果提示，在 Ｈｅｐ Ｇ２９７０６细胞中，三种 Ａ Ｓ Ｏ Ｄ Ｎｓ 均具有特异性的剂量依赖性抑制活性。浓度在０５μｍｏｌ／ Ｌ 时， Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 对 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶表达抑制率分别为６１ ％ 、５５ ％ 及４８ ％ 。 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 连续作用８ 天，其抑制率可达８１ ％ 。上述资料论证了 Ｈ Ｃ Ｖ３６３ 、 Ｈ Ｃ Ｖ３４９ 及 Ｈ Ｃ Ｖ２７９ 在 Ｈ Ｃ Ｖ５′ Ｎ Ｃ Ｒ 调控荧光素酶基因的稳定表达细胞中对 Ｈ Ｃ Ｖ 调控基因具有明显的抑制活性。

Survivin反义寡核苷酸对卵巢癌耐药细胞COC_1/DDP抑制的实验研究

背景与目的Survivin是近年发现的一种细胞凋亡抑制基因,它与卵巢癌细胞的生长及耐药性密切相关,本研究探讨经脂质体介导的survivin反义寡核苷酸(Lip-ASODN)对人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP生长、凋亡及细胞周期的影响。方法将脂质体介导的survivin-ASODN转染COC1/DDP细胞;细胞动力学检测、MTT法观察细胞生长情况;RT-PCR检测survivinmRNA的表达;通过Western杂交检测caspase-3蛋白及活性;流式细胞仪分析细胞凋亡率及细胞周期变化。结果与空脂质体及SODN组相比,经survivin-ASODN作用后的COC1/DDP细胞的生长受到明显抑制,72h的细胞生长抑制率可达(68.3±6.2)%(P<0.05)。SurvivinmRNA的表达明显下降,而caspase-3的活性增加,并呈时间依赖性。ASODN组细胞周期发生了明显变化,细胞被阻滞于G0/G1期,占79.21%,G2/M及S期分别为4.92%、15.87%,均明显下降;细胞凋亡率为33.18%,明显高于SODN组及空脂质体组(P<0.05)。结论SurvivinASODN能抑制人卵巢癌耐药细胞COC1/DDP生长,降低survivinmRNA的表达并诱导COC1/DDP细胞凋亡。

反义寡核苷酸逆转卵巢癌细胞对拓扑替康耐药性的研究

背景与目的:研究表明乳腺癌耐药蛋白(breastcancerresistanceprotein,BCRP)在卵巢癌拓扑替康(topotecan,TPT)耐药株A2780/TPT中存在高表达,它可能在卵巢癌耐药中起着重要的作用。本研究拟探讨BCRP反义寡核苷酸(antisenseoligonucleotide,ASODN)片段对A2780/TPT细胞耐药的逆转作用。方法:人工合成包含BCRPmRNA翻译起始位点的ASODN片段,并合成相应的正义寡核苷酸(senseoligonucleotide,SODN)片段作为对照。用脂质体Lipofect-2000将ASODN及SODN分别转染进A2780/TPT细胞,分别用RT-PCR法、流式细胞仪及MTT法检测A2780/TPT细胞经体外转染后,BCRPmRNA的表达、胞内罗丹明荧光强度及对TPT耐药指数的改变。结果:将ASODN/Lipofect-2000转染进A2780/TPT耐药细胞后,细胞内BCRPmRNA的表达较未转染细胞下降了59.42%(P<0.05),胞内罗丹明荧光强度由转染前的5.42增加到16.63(P<0.05),耐药指数由25降到5。而转染SODN/Lipofect-2000的A2780/TPT细胞中,上述指标无显著性变化。结论:转染ASODN/Lipofect-2000可部分逆转BCRP介导的卵巢癌细胞耐药。

C-erbB-2与c-raf-1基因反义寡核苷酸联合对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用

背景与目的:针对c-erbB-2与c-raf-1单基因的反义寡脱氧核苷酸(antisenseoligodexynucleotide,ASODN)治疗肿瘤的研究报道很多,这些研究往往局限于单个基因或细胞水平,从肿瘤发生的多基因学说上讲是不恰当的。本研究旨在探讨c-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的治疗作用。方法:在BALB/c裸鼠上建立卵巢上皮癌模型,然后随机分成阴性对照组和6个实验组(分别为脂质体c-erbB-2SODN组、脂质体c-raf-1SODN组、脂质体c-erbB-2ASODN组、脂质体c-raf-1ASODN组、全剂量联合反义给药组、半剂量联合反义给药组)。检测裸鼠体重及肿瘤体积变化,计算抑瘤率及肿瘤缩小率。结果:给药后,全剂量联合反义给药组与半剂量联合反义给药组的肿瘤体积抑瘤率分别为72.5%和78.4%,肿瘤重量抑瘤率分别为70.7%和75.3%,肿瘤缩小率分别为29.7%和41.6%。在给药后,各组裸鼠体重变化无明显统计学差别。结论:C-erbB-2与c-raf-1基因联合ASODN在体内能明显地抑制肿瘤生长。

半乳糖受体介导的c-myc反义寡核苷酸对人肝癌细胞的靶向投递作用

背景与目的:c-myc反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotide,ASODN)能抑制肝癌细胞的增殖,脂质体和腺病毒介导的c-mycASODN投递虽能显著抑制肝癌细胞的增殖,抑制荷肝癌小鼠肿瘤的生长,但这种投递缺乏靶向性;受体介导的药物投递具有高效性和靶向性的特点,已被用于基因及ASODN的靶向投递。本实验以半乳糖(galactose,Gal)-聚乙烯亚胺(polyethyleneimine,PEI)作为载体,介导c-mycASODN作用于人肝癌细胞Bel-7402,探讨c-mycASODN对Bel-7402细胞的靶向投递作用。方法:用流式细胞仪检测Bel-7402、U937细胞对荧光标记的Gal-PEI-c-myc-ASODN(简称Gal-PEI-ASODN)的摄取率及细胞内平均荧光强度;相差/荧光显微镜观察荧光标记的Gal-PEI-ASODN及c-myc-ASODN进入Bel-7402、U937、Raji细胞的形态;台盼蓝拒染法检测不同浓度Gal-PEI-ASODN对这三种细胞增殖的影响。结果:荧光标记的Gal-PEI-ASODN或ASODN与相应细胞孵育10min到4h,Gal-PEI-ASODN-Bel-7402细胞的荧光摄取率为88.25%～98.66%,细胞内平均荧光强度为38.64%～111.90%,与单纯c-mycASODN-Bel-7402细胞组、Gal-PEI-ASODN-U937细胞组相比,所有时间点的细胞荧光摄取率、胞内平均荧光强度均显著增高,经Poission分布检验,均有显著性差异(P<0.01)。相差/荧光显微镜观察到?

Skp2反义寡核苷酸对K562细胞生长和增殖的影响

背景与目的:泛素-蛋白酶体途径是真核细胞中选择性降解短寿命蛋白的重要途径。S期激酶相关蛋白2(S-phasekinase-associatedprotein2,Skp2)是此途径中的一个重要组件,它是决定细胞周期素依赖性激酶抑制因子p27降解的关键蛋白。近年来,在实体瘤的研究中发现Skp2是癌蛋白,能促进癌细胞的细胞周期进展,但在白血病细胞恶性增殖中所起的作用还未见报道。本实验旨在研究Skp2反义寡核苷酸(antisenseoligodeoxynucleotides,ASODN)对白血病细胞系K562细胞生长和增殖的影响及其可能的机制。方法:Skp2反义寡核苷酸和K562细胞共同培养,通过显微镜下观察、四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察K562细胞生长和增殖,流式细胞术分析细胞周期,逆转录聚合酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RT-PCR)和细胞免疫化学测定Skp2mRNA、蛋白及p27mRNA、蛋白的表达。结果:Skp2反义寡核苷酸处理后,K562细胞增殖受抑,细胞周期阻滞于G0/G1期犤Skp2ASODN组(39.7±9.1)%,对照组(31.5±7.3)%,P<0.05犦。Skp2mRNA及Skp2蛋白水平降低;尽管p27mRNA未见改变,但其蛋白水平明显升高。结论:Skp2反义寡核苷酸能抑制K562细胞增殖,这种抑制作用主要是通过调控泛素-蛋白酶体途径,进而影响细胞周期进展而实现的。

c-myc反义基因对人高转移肺癌细胞增殖和黏附活性的抑制作用

目的 :观察c myc反义基因抑制人高转移性肺癌PG细胞增殖 ,下调侵袭黏附性的作用和机制。方法 :合成c myc反义寡核苷酸 ,经脂质体包裹 ,转导入c myc高表达的PG细胞中。RT PCR方法检测c mycmRNA表达水平的变化 ,流式细胞术检测c myc蛋白的表达。MTT法检测细胞增殖活性 ,黏附实验检测PG细胞的黏附性。结果 :c myc反义基因 (>0 .6 2 5μmol/L)对PG细胞c mycmRNA、蛋白表达和细胞增殖活性具有明显的抑制作用 ,其处理PG细胞 72h后 ,2 0～ 80min不同时间的细胞黏附百分率 ,从 5 0 .0 %,81.2 7%和 90 .0 %分别显著下降到 31.5 %,37.5 %和 30 .0 %(P <0 .0 5 ) ,下降呈时间依赖效应。结论 :c myc反义基因抑制PG细胞c mycmRNA和蛋白表达水平 ,同时下调增殖活性和侵袭黏附性。

c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD_3AK杀伤敏感性的调节作用

目的 :观察c myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平 ,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法 :RT PCR方法检测c mycmRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c myc蛋白表达水平的变化。结果 :c myc反义寡核苷酸(1 μmol L) 明显地抑制PG细胞c mycmRNA和蛋白表达水平 ,显著提高细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达 ,其表达率分别从 68 44%、38 40 %增高到 83 1 6 %和 42 0 9% (P <0 0 1 )。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性 ,分别从 40 0 %、65 0 %、74 0 %增高到 52 0 %、74 0 %、91 0 % (P <0 0 1 )。结论 :c myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c mycmR NA和蛋白表达 ,上调PG细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达水平 。

MDR1反义寡核苷酸逆转胃癌耐药的研究

目的探讨MDR1反义寡脱氧核苷酸(Antisense oligodooxynucleotide,ASODN)片段逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药的可行性。方法经MDR1 ASODN转染SGC7901/ADM细胞后,采用MTT法检测瘤细胞对阿霉素抗癌药的敏感性;采用流式细胞术检测细胞周期的改变、细胞内Rh123的潴留状况;采用免疫细胞化学检测MDR1蛋白质表达水平的变化。结果SGC7901/ADM细胞经MDR1 ASODN转染48小时后,对阿霉素化疗药物的敏感性增强,细胞对阿霉素的半数抑制浓度(IC50)由转染前的16.82μg/ml降至2.66μg/ml;与未经转染的SGC7901/ADM相比,ASODN/LF转染后出现明显的细胞周期阻滞,大量细胞被阻滞于S期;瘤细胞内RH123的潴留量显著高于转染前;瘤细胞内P-gp、MRP的表达显著下降。结论转染MDR1 ASODN可部分逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM耐药。

MDR1/MRP反义寡核苷酸逆转胃癌细胞耐药的研究

目的:探讨MDR1/MRP反义寡脱氧核苷酸(Antisense oligodooxynucleotide,ASODN)片段逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM多药耐药(Multidrugresistance,MDR)的作用。方法:经MDR1或多药耐药相关蛋白(Multidrugresistance-asscociated protein,MRP)ASODN分别或联合转染SGC7901/ADM细胞后,采用RT-PCR法检测MDR1mRNA和MRPmRNA的表达,免疫细胞化学检测SGC7901/ADM细胞内p-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)、MRP的表达,流式细胞术检测瘤细胞内Rh123的潴留状况,MTT法检测瘤细胞对阿霉素、卡铂等抗癌药的敏感性。结果:SGC7901/ADM细胞经ASODN转染12h后,MDR1和MRPmRNA的表达均降低,转染24h后下降最明显,48h后恢复至转染前水平。经转染ASODN48h后,SGC7901/ADM细胞P-gp、MRP的表达显著下降,瘤细胞内Rh123的潴留量显著高于转染前,且联合转染MDR1和MRPASODN后瘤细胞内Rh123的潴留量显著高于单纯转染组。SGC7901/ADM细胞在联合转染MDR1和MRPASODN后对阿霉素、卡铂等化疗药物的敏感性明显高于单纯转染ASODN。结论:分别转染MDR1或MRPASODN可部分逆转人胃腺癌耐药细胞SGC7901/ADM多药耐药,而联合转染2种ASODN则可显著提高瘤细胞耐药逆转效率。