EMC6与Apaf-1、Caspase-3在宫颈癌组织中的表达及临床预后意义

目的 探讨宫颈癌中EMC6、Apaf-1和Caspase-3蛋白的表达情况,并分析其与患者临床病理特征和预后的关系。方法 采用免疫组化方法检测宫颈癌及癌旁组织中EMC6、Apaf-1和Caspase-3蛋白的表达,并收集患者的临床病理资料进行分析,Spearman检测变量间的相关性,单因素及多因素Cox分析预后影响因素。结果 EMC6、Apaf-1及Caspase-3蛋白在宫颈癌组织中的阳性表达率均低于癌旁组织,差异有统计学意义(P均<0.05);不同临床病理特征间EMC6蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P>0.05);不同分化程度宫颈癌患者中Apaf-1蛋白阳性表达率差异有统计学意义(χ^(2)=4.723,P=0.030);不同临床分期和分化程度宫颈癌患者中Caspase-3蛋白阳性表达率差异有统计学意义(χ^(2)=4.495,P=0.034;χ^(2)=5.010,P=0.025)。EMC6与Apaf-1、Caspase-3相关性系数分别为r=0.626(P<0.001)、r=0.554(P<0.001),均呈正相关;单因素检验得出,病理类型(P=0.047)、肿瘤大小(P<0.001)、EMC6(P=0.004)、Apaf-1(P=0.029)和Caspase-3(P=0.039)是影响宫颈癌患者总体生存期的预后因素;多因素分析显示,EMC6(P=0.005)、肿瘤大小(P<0.001)是宫颈癌患者不良预后的独立影响因素。结论 宫颈癌组织中EMC6、Apaf-1和Caspase-3的低表达与患者预后不良相关,其中EMC6与Apaf-1、Caspase-3呈正相关,且EMC6和肿瘤大小是独立的预后因素,这些蛋白在宫颈癌进展中发挥重要作用,有望成为预后标志物和治疗靶点。

喉鳞癌Apaf-1基因表达及启动子区甲基化研究

喉鳞癌细胞存在多种癌基因和抑癌基因异常 ,Apaf 1(apoptoticproteaseactivatingfactor 1)基因是诱导细胞凋亡的肿瘤抑制基因。为探讨Apaf 1基因在喉鳞癌发生中的作用 ,应用半定量PCR方法分析Apaf 1的表达用比较基因组杂交 (ComparativeGenomicHybrodization ,CGH)和杂合性丢失 (LossofHeterozygosity ,LOH)分析方法对喉鳞癌病人Apaf 1基因所在的 12 q2 2 2 3区域缺失情况进行研究 ,并用甲基化特异PCR对该基因启动子区甲基化情况进行了分析。结果表明 :11例喉鳞癌组织出现Apaf 1mRNA表达明显下调 ,占 4 0 7% (11/ 2 7) ,而 6例良性喉肿瘤未发现缺失或下调 ;CGH分析发现 ,18例喉鳞癌仅发现 2例存在 12 q2 2 2 3区域缺失 ,未发现扩增 ;LOH分析发现 ,72例喉癌组织Apaf 1基因的 5个多态位点LOH发生频率低 ,分别为 18 2 % (D12S346 )、13 9%(D12S170 6 )、18 2 % (D12S32 7)、2 2 2 % (D12S16 5 7)和 16 6 % (D12S393) ,11例出现Apaf 1mRNA下调的喉癌组织均检测到启动子区甲基化 ,而 16例Apaf 1mRNA表达未下调者仅 1例有甲基化 ,两者有显著差异 (χ2 检验 ,P=0 0 0 0 1)。通过以上结果 ,首次证实Apaf 1基因与喉鳞癌相关 ,在喉鳞癌中Apaf 1基因缺失发生率低 。

漆黄素通过调节Apaf-1．ERK和COX-2信号通路诱导人宫颈癌细胞凋亡

【目的】探讨天然产物漆黄素抗宫颈癌细胞生长及其分子作用机制。【方法】以人宫颈癌Hela细胞为模型,将漆黄素作用于细胞,利用MTT、PI以及Annexin V方法观察细胞的生长和凋亡情况,通过Western blot、RT-PCR以及免疫荧光方法分别考察凋亡相关信号通路的关键蛋白caspase和Apaf-1的表达水平和活性变化,ERK/MAPK信号通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平的变化,以及COX-2蛋白和PGE2的表达水平的变化,并通过使用小分子抑制剂和RNA干扰技术等方法进一步分析上述关键蛋白在漆黄素抗肿瘤细胞生长中的作用。【结果】漆黄素(当作用浓度为80～200μmol/L时)可显著抑制20%～48%Hela细胞增殖和(当作用浓度为100～200μmol/L时)显著诱导细胞凋亡;使Caspase-3和Caspase-9的蛋白酶活性分别增加20%～50%和22%～38%;促进Apaf1蛋白的表达;能有效诱导Cytochrome-C的释放;降低ERK/MAPK信号通路中ERK1/2蛋白的磷酸化水平;与ERK抑制剂或siRNA联合使用可抑制60%～70%细胞增殖;减少COX-2蛋白的表达;明显减少PGE2的产生,仅1800～2600 pg/mL;减少p300、NF-κB、p50、p65与COX-2启动子的结合,与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。【结论】漆黄素通过调控Apaf-1、ERK和COX-2的分子机制来诱导宫颈癌Hela细胞的凋亡及抑制细胞生长。

Survivin、Apaf-1和caspase-9在胃癌腹膜转移中的表达及意义

目的探讨Survivin、Apaf-1以及caspase-9在胃癌腹膜转移中的表达和意义。方法采用免疫组化技术检测24例伴腹膜转移的胃癌患者原发灶、腹膜转移灶以及24例同期无腹膜转移的进展期胃癌原发灶中Survivin、Apaf-1及caspase-9蛋白的表达。结果胃癌腹膜转移组中Survivin表达增强,在腹膜转移灶中表达最高,而Apaf-1及caspase-9在胃癌腹膜转移组中均减弱,其中腹膜转移灶中表达最低;腹膜转移组中Survivin与Apaf-1、caspase-9的表达有差异,而在无腹膜转移组中三者间差异无统计学意义。结论 Survivin、Apaf-1及caspase-9在胃癌腹膜转移过程中发挥重要作用,三者在胃癌原发灶中表达强度的检测可望成为预测胃癌术后是否发生腹膜转移的重要方式。

凋亡促进因子TFAR19,Apaf-1与腰椎间盘突出症的关系研究

目的探究凋亡促进因子TFAR19,Apaf-1与腰椎间盘突出症关系。方法随机选择广西医科大学第一附属医院脊柱骨病外科住院接受手术的腰椎间盘突出症患者99例,其中设单个节段突出的患者70例为A组,多个节段突出(腰椎间盘突出节段数量≥2个)的患者29例为B组,于入院次日收集外周静脉血。同时随机选取健康体检者40例作为对照组(C组)。采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测腰椎间盘突出症患者血清中TFAR19,Apaf-1浓度。结果 C组、B组及A组血清中TFAR19浓度分别为1.30±0.09,1.85±0.14和2.33±0.25 ng/ml,各组之间TFAR19浓度差异具有统计学意义(F=7.979,P<0.01)。与C组相比,A组(q=3.60,P=0.012)、B组(q=5.59,P<0.01)TFAR19浓度差异具有统计学意义。A组、B组之间TFAR19浓度差异有统计学意义(q=2.93,P=0.012)。C组、B组及A组血清中Apaf-1浓度分别为107.52±11.58,159.22±11.87,203.20±20.21 Pg/ml,各组之间Apaf-1浓度差异具有统计学意义(F=8.828,P<0.01)。与C组相比,A组(q=3.89,P=0.007)、B组(q=5.86,P<0.01)Apaf-1浓度差异具有统计学意义。A组、B组之间Apaf-1浓度差异有统计学意义(q=2.97,P=0.037)。各组间性别构成比差异无统计学意义(x^2=0.229,P=0.892)。各组之间年龄差异无统计学意义(F=0.091,P=0.91)。结论腰椎间盘突出症患者血清TFAR19,Apaf-1表达上调加速了腰椎间盘退变过程,参与了腰椎间盘突出症的发生,并且与椎间盘突出节段数量相关,突出节段数量越多,TFAR19,Apaf-1表达量越高。

线粒体信号通路Cyt-c和Apaf-1表达及艾灸足阳明经穴保护胃黏膜损伤机制的研究

目的:通过观察急性胃黏膜损伤后细胞凋亡线粒体信号转导途径中关键物质细胞色素C(Cyt-c)、凋亡激活因子-1(Apaf-1)表达及艾灸"足三里"、"梁门"穴对胃黏膜细胞凋亡的影响,探讨艾灸预处理保护胃黏膜损伤作用的内在机制。方法:24只wister健康大鼠随机分为3组,8只/组,即捆绑对照组、模型对照组和艾灸穴位组。采用Western-blot方法检测大鼠胃黏膜Cyt-c的表达,免疫组化方法检测大鼠胃黏膜细胞凋亡指数(AI)、Apaf-1表达。结果:模型对照组AI、Cyt-c和Apaf-1表达上调,与捆绑对照组相比具有非常显著性差异(P<0.01);艾灸穴位组AI、Cyt-c和Apaf-1表达降低,与模型对照组比较具有显著性或非常显著性差异(P<0.05或P<0.01)。结论:无水乙醇灌胃可引发急性胃黏膜损,经线粒体Cyt-c→Apaf-1信号转导途径启动细胞凋亡程序,而艾灸足阳明胃经"足三里"、"梁门"穴预处理可以抑制细胞凋亡,其保护胃黏膜损伤作用的内在机制可能与下调线粒体凋亡通路Cyt-c和Apaf-1表达有关。

5-Aza-CdR对胃癌细胞系生长及Apaf-1基因异常甲基化的影响

目的:观察5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycitydine,5-Aza-CdR)对体外培养的胃癌SGC7901细胞和BGC823细胞增生、细胞周期和凋亡的影响及其对此两株细胞中Apaf-1基因的甲基化状态的影响.方法:不同浓度5-Aza-CdR处理体外培养的SGC7901细胞和BGC823细胞后,用MTT法检测处理24,48和72h的细胞增殖活性;PI染色和流式细胞仪检测药物处理后72h细胞周期分布和细胞凋亡率;MSP法检测用药前后细胞中Apaf-1基因的甲基化状态;RT-PCR法及Westernblot法检测用药前后细胞中Apaf-1的mRNA及蛋白表达的变化.结果:1×10-7,5×10-7,1×10-6和5×10-6mol/L5-Aza-CdR处理SGC7901和BGC823细胞24,48,72h后,细胞增生受到抑制,有时间和剂量的依赖性.流式细胞仪分析表明,各药物浓度处理72h后凋亡率增加明显:SGC7901细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6mol/L组分别为2.53%±1.19%,5.93%±0.86%,10.14%±1.51%,与对照组(0.12%±0.03%)相比差异显著(P<0.05);BGC823细胞5×10-7,1×10-6和5×10-6mol/L组分别为1.57%±0.26%,4.64%±1.05%,8.21%±1.46%,与对照组(0.57%±0.03%)相比差异显著(P<0.05).在5-Aza-CdR处理前未检测到SGC7901细胞系及BGC823细胞系的Apaf-1基因的mRNA及蛋白表达,经过5-Aza-CdR处理后,Apaf-1基因在SGC7901细胞系及BGC823细胞系中甲基化状态得到了逆转,Apaf-1基因的mRNA及蛋白重新表达.结论:5-Aza-CdR对SGC7901细胞和BGC823细胞具有增生抑制作用;Apaf-1基因的表达情况与其甲基化状态的改变有关.

膀胱癌抑癌基因Apaf-1和APC的甲基化状况及其临床意义

【目的】研究抑癌基因细胞凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和腺瘤性结肠息肉病相关基因(APC)的启动子甲基化状况与膀胱癌临床病理的关系及对患者复发的影响。【方法】采用甲基化特异性PCR方法检测110例膀胱癌组织中Apaf-1和APC的启动子甲基化状态,以15例正常膀胱黏膜组织为对照组。【结果】Apaf-1和APC基因在膀胱癌组织中的甲基化率为90.0%和82.7%,在正常膀胱组织为6.77%和20.0%,差异分别有统计学意义(P均=0.000)。Apaf-1及APC的甲基化率与肿瘤分化程度及临床分期有明显的相关性,随肿瘤分级、分期的增加而升高。在复发组与未复发组的比较中,Apaf-1的甲基化阳性率分别为97.6%(41/42)和85.3%(58/68),差异有统计学意义(χ2=4.382,P=0.036),而APC的甲基化率分别为85.7%(36/42)和80.9%(55/68),差异无统计学意义(χ2=0.424,P=0.515)。【结论】Apaf-1及APC的甲基化改变在膀胱癌的发生、发展过程中具有重要作用,Apaf-1启动子甲基化可能成为膀胱癌患者预后判断的分子标志物。

前列腺癌组织中Apaf-1和Caspase-9表达及临床意义

目的检测凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)和细胞凋亡蛋白酶-9(Caspase-9)在前列腺癌(prostatic carcinoma,PCa)和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)中的表达,探讨Apaf-1、Caspase-9表达与PCa临床病理特征的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例PCa和60例BPH组织中Apaf-1和Caspase-9蛋白的表达。结果 PCa组中Apaf-1和Caspase-9的阳性率明显低于BPH组,差异有统计学意义(P<0.05);Apaf-1和Caspase-9的表达与患者年龄及远处转移无关,与病理分级及临床分期相关(P<0.05)。结论 Apaf-1和Caspase-9在PCa组织中低表达,二者呈正相关(rs=0.645,P<0.01),Apaf-1和Caspase-9可能与PCa的发生、发展密切相关。

基底细胞样乳腺癌中Apaf-1、Caspase-9和Bax蛋白表达临床意义分析

目的:检测凋亡蛋白酶活化因子-1(Apaf-1)、细胞凋亡蛋白酶-9(Caspase-9)和Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein,Bax)在基底细胞样乳腺癌(BLBC)中的表达,分析Apaf-1、Caspase-9和Bax与BLBC临床病理特征的关系。方法:采用免疫组化方法检测43例基底细胞样乳腺癌(BLBC)、57例non-BLBC(非基底细胞样乳腺癌)和60例癌旁正常乳腺组织中Apaf-1、Caspase-9和Bax蛋白的表达。结果 :免疫组化检测结果显示,BLBC及non-BLBC中Apaf-1、Caspase-9和Bax的表达水平都明显低于癌旁正常乳腺组织,差异均有统计学意义(P<0.05);Apaf-1在BLBC中的表达率与患者年龄无关,与肿瘤大小、淋巴结转移情况及临床分期相关,Caspase-9和Bax的表达水平和患者年龄及肿瘤大小无关,与BLBC淋巴结转移及临床分期相关(P<0.05)。结论:BLBC组织低表达Apaf-1、Caspase-9和Bax,三者表达分别呈正相关(P<0.01),Apaf-1、Caspase-9和Bax可能与BLBC的发生、发展密切相关。

Apaf-1和Ki-67在乳腺癌组织中的表达及临床意义

目的探讨凋亡酶激活因子(Apaf-1)和Ki-67在乳腺癌组织中的表达并分析两者表达的临床意义。方法收集2014年1月至2015年12月60例乳腺癌组织和30例癌旁组织存档蜡块,采用免疫组织化学En Vision法检测Apaf-1和Ki-67的表达情况,同时分析两者表达的相关性及与临床病理特征(年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、临床分期和身体质量指数)的关系。结果 Apaf-1在乳腺癌组织中的阳性表达率为21.7%(13/60),低于癌旁组织的70.0%(21/30),差异有统计学意义(P<0.05)。Ki-67在乳腺癌组织中的阳性表达率为73.3%(44/60),高于癌旁组织的36.7%(11/30),差异有统计学意义(P<0.05)。两者表达与年龄、身体质量指数均无关(P>0.05),与肿瘤大小、淋巴结转移及临床分期有关(P<0.05)。两者在乳腺癌组织中的表达呈负相关(r=-0.413,P=0.018)。结论 Apaf-1在乳腺癌中表达降低,而Ki-67水平升高,两者在乳腺癌的发展和侵袭中发挥促癌作用,有可能作为临床诊断乳腺癌的标志物。

大鼠弥漫性轴索损伤后海马CA1区Apaf-1蛋白表达及其对神经元凋亡的作用

目的:探讨大鼠弥漫性脑损伤后海马CA1区Apaf-1蛋白表达及其对神经元凋亡的作用.方法:采用Marmarou打击法制作大鼠重型闭合性颅脑损伤模型,以免疫组化技术检测海马CA1区Apaf-1蛋白的表达.结果:大鼠弥漫性脑损伤后3h,海马CA1区Apaf-1蛋白表达含量开始增加,6h达到高峰,12h仍保持高水平,24h开始下降,但仍高于正常对照组.结论:Apaf-1蛋白可能参与了大鼠弥漫性脑损伤后海马CA1区的病理变化.

山羊Apaf-1和Apaf-2基因的cDNA克隆、序列分析及组织表达

采集5只多胎金堂黑山羊和5只单胎藏山羊在发情期的卵巢、垂体等组织样,进行Apaf-1和Apaf-2基因的c DNA克隆、序列分析,以及定量PCR技术对其mRNA进行组织表达量研究。结果表明,克隆出Apaf-1基因长度为3 750 bp,编码1 249个氨基酸,Apaf-2基因编码区全长为318 bp,编码105个氨基酸。这两个基因在两种山羊中序列相同,没有突变,且在5种组织中的表达均无差异。表明凋亡基因Apaf-1和Apaf-2在动物的进化中比较保守,与山羊多羔性状的相关性需要进一步研究。

大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及Apaf-1表达的变化

目的观察大鼠脑缺血再灌注后海马CA1区超微结构及凋亡相关基因凋亡蛋白激活因子(Apaf)-1表达的变化。方法健康雄性SD大鼠随机分为假手术组和模型组,其中模型组缺血30 min后再灌注,根据再灌注时间不同又分为2、24、72 h 3个亚组。采用Pulsinelli四血管阻断法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,透射电镜下观察海马CA1区神经元超微结构变化,免疫组织化学法和Western印迹法检测大鼠海马组织凋亡相关基因Apaf-1蛋白表达的变化。结果透射电镜结果显示:假手术组海马CA1区神经元胞核较大,呈圆形或椭圆形,核膜清晰完整,常染色质呈细颗粒状均匀分布,胞浆内可见丰富的细胞器。模型2 h组海马CA1区神经元核膜凹陷,核染色质密度增高,线粒体轻微肿胀;模型24 h组海马CA1区神经元核膜邹缩严重,核仁物质增多、偏移,线粒体结构松散、空泡状,线粒体嵴断裂,粗面内质网脱颗粒;模型72 h组海马CA1区神经元核固缩,核染色质呈团块状边集于核膜下,线粒体不同程度脱空。免疫组化和Western印迹结果显示:假手术组Apaf-1蛋白仅有少量表达,模型组各时间点Apaf-1蛋白表达均增高(P<0.05)。结论大鼠脑缺血再灌注可导致海马CA1区神经元的凋亡,这可能与凋亡相关基因Apaf-1的激活有关。

大鼠脑创伤后海马区Apaf-1表达

目的: 研究颅脑创伤后神经细胞凋亡的机制.方法: 采用重型闭合性颅脑创伤大鼠模型.利用免疫组化方法,动态观察大鼠颅脑创伤后海马区Apaf 1的表达.结果: 假手术组及正常对照组海马CA2区未检测出Apaf 1蛋白的表达及凋亡阳性细胞.创伤组大鼠伤后6h(A=0 047±0 008)海马CA2区出现Apaf 1蛋白表达, 24h(A=0 182±0 028)达高峰, 48h(A=0 121±0 016 )即有所下降.结论: 脑创伤后Apaf 1表达增加可能造成神经细胞凋亡.

白血病细胞系APAF-1cDNA类型与基因表达关系的研究

目的:探讨白血病细胞系APAF-1cDNA的结构差异及其与基因表达的关系。方法:应用RT-PCR结合测序方法研究白血病细胞系K562和CEM/VLB100APAF-1cDNA类型;应用RT-PCR和Westernblot方法分析两个细胞系APAF-1基因的表达水平;检测caspase-3活性以比较APAF-1基因在两个细胞系的功能差异。结果:测序结果K562和CEM/VLB100APAF-1cDNA分别属于APAF-1XL和APAF-1L型,两个细胞系APAF-1mRNA表达水平无差异。K562细胞中APAF-1蛋白表达水平和caspase-3活性明显低于CEM/VLB100。结论:APAF-1的结构差异影响了APAF-1蛋白表达水平,可能是造成caspase-3活性降低的重要原因。

三疣梭子蟹Apaf-1基因的克隆及其在低盐和病原胁迫后的表达分析

本研究利用RACE方法克隆获得三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)凋亡蛋白酶激活因子-1(Apoptoticproteaseactivatingfactor-1,Apaf-1)基因,该基因c DNA全长为2032bp,其中,ORF为1050 bp,编码349个氨基酸,预测分子量为39.13 kDa,理论等电点为7.67。同源性和系统发育分析显示,Apaf-1与凡纳滨对虾(Litopenaeusvannamei)Apaf-1的同源性最高,为51.27%,并与凡纳滨对虾聚为一支。组织表达分析显示,Apaf-1基因的相对表达水平在肝胰脏最高,其次是肌肉、心脏、鳃和眼柄,血细胞和表皮最低。不同盐度胁迫后,Apaf-1在Ⅱ期幼蟹体内表达水平在3 h达到最大值,此后,呈先下降再上升趋势;Apaf-1在80日龄盐度20胁迫后三疣梭子蟹的鳃中呈上升趋势,在肝胰腺中为先上升后下降趋势,表明盐度改变能影响该基因在鳃和肝胰腺组织中的表达。不同病原感染实验结果显示,在血细胞中,注射副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)后Apaf-1的表达于48 h到达峰值,为对照组的2.76倍(P<0.05),注射白斑综合征病毒(WSSV)后,仅在12 h表达水平上调,为对照组的1.25倍(P<0.05);在肝胰腺中,注射副溶血弧菌后在72 h到达峰值,为对照组的5.44倍(P<0.05),注射WSSV后在12h到达峰值,为对照组的5.89倍(P<0.05),整体呈上调表达趋势。本研究为进一步理解三疣梭子蟹Apaf-1基因的生理功能提供了参考。

曲古抑菌素A对膀胱癌T24细胞增殖及Apaf-1和APC基因表达的影响

【目的】研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A(TSA)对人膀胱癌T24细胞的增殖抑制作用及对Apaf-1、APC基因表达的影响。【方法】采用3×10-4mmol/L TSA作用T24细胞,MTT法检测TSA对T24细胞生长的抑制作用;流式细胞术(FCM)检测TSA作用前后T24细胞周期和凋亡的变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测TSA作用前后膀胱癌细胞中Apaf-1、APC mRNA表达的变化。【结果】TSA对T24细胞的生长具有明显的抑制作用;TSA作用后T24细胞的G0/G1期比例增加,S期比例减少,细胞凋亡率增加(P<0.05);RT-PCR结果显示TSA处理能明显诱导Apaf-1、APC基因表达增加。【结论】TSA能抑制T24细胞体外生长,诱导细胞周期阻滞和凋亡,其可能通过诱导Apaf-1、APC基因表达增加而发挥体外抗膀胱癌作用。

清心滋肾汤对围绝经期大鼠卵巢Caspase-3 Caspase-9及Apaf-1的影响

目的:研究中药清心滋肾汤对围绝经期大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1的影响,探讨清心滋肾汤治疗绝经综合征的作用机制。方法:选用自然衰老的围绝经期雌性SD大鼠40只,月龄12月,随机分为4组(n=10):围绝经期模型组、清心滋肾汤低剂量组、清心滋肾汤中剂量组、清心滋肾汤高剂量组。另选4月龄的雌性SD大鼠10只作为青年对照组。连续灌胃4周后,采用Western blot(蛋白免疫印迹杂交)方法检测各组大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1蛋白的表达,采用RT-PCR(逆转录-聚合酶链反应)检测大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1 mRNA表达。结果:模型组大鼠卵巢Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1蛋白及mRNA表达普遍高于青年组,清心滋肾汤各剂量组Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1蛋白及mRNA表达呈不同程度的下降。结论:清心滋肾汤能下调卵巢Caspase-3、Caspase-9、Apaf-1凋亡因子的表达水平,延缓卵巢衰老,治疗绝经综合征。

15-Aza-CdR对Hs888T骨肉瘤细胞增殖、凋亡及Apaf-1基因表达的影响

目的探讨DNA甲基转移酶抑制剂5-氮杂-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)在骨肉瘤发生、发展中的作用及机制。方法采用不同浓度的5-Aza-CdR处理体外培养的骨肉瘤细胞Hs888T。MTT检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡情况,Western blot法检测细胞Apaf-1蛋白表达水平。结果5-Aza-CdR处理后Hs888T细胞增殖明显受抑,细胞阻滞于G0/G1期,细胞凋亡增加,且与药物浓度及作用时间有关;Apaf-1蛋白表达水平显著增加。结论5-Aza-CdR在骨肉瘤发生、发展中起重要作用;可能机制为诱发Apaf-1在内的某些基因去甲基化。