Id2在Apc^(Δ716/+)小鼠肠道肿瘤发生中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding 2,Id2)在ApcΔ716/+小鼠肠道肿瘤发生中的作用。方法 Id2基因缺失的基因工程小鼠和肠道肿瘤模型ApcΔ716/+小鼠杂交后,统计ApcΔ716/+小鼠与ApcΔ716/+Id2-/-杂交小鼠小肠肠道肿瘤的数目及总负荷,观查其肠道肿瘤发生和发展的变化。结果与ApcΔ716/+Id2野生型小鼠比较,ApcΔ716/+Id2-/-杂交小鼠在4、8、12周龄时肠道肿瘤总数目与不同大小的肠道肿瘤数目明显减少,差异有统计学意义(P均<0.05)。结论 Id2的缺失能抑制ApcΔ716/+小鼠肠道肿瘤的发生,Id2在人类肠道肿瘤中可能发挥着促进肿瘤形成的作用。

Effect of Recql5 deficiency on the intestinal tumor susceptibility of Apc^(min) mice

AIM:To investigate whether Recql5,a DNA helicase that plays an important role in the maintenance of genome integrity,is a tumor suppressor in the gastrointestinal tract in mice.METHODS:We generated cohorts of both Recql5-proficient and Recql5-deficient Apcmin/+mice and compared the tumor susceptibility in their gastrointestinal tracts.RESULTS:Recql5 deficiency in Apcmin/+mice resulted in a significant increase in the tumor incidence in both the colon(P=0.0162)and the small intestine(P<0.01).These findings have provided the first genetic evidence for a tumor suppression role of Recql5 in the gastrointestinal tract of mice.Importantly,since mouse Recql5 and human RECQL5 are highly conserved,these findings also suggest that RECQL5 may be a tu-mor suppressor for human colon cancer.CONCLUSION:Recql5 has a tumor suppression role in the mouse gastrointestinal tract.

Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤转基因小鼠模型构建

目的探讨构建Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤小鼠模型最佳他莫昔芬诱导方式,建立小鼠模型。方法以C57BL/6J野生型小鼠为健康的对照组。以不同浓度、剂量、给药时长他莫昔芬腹腔注射于转基因小鼠,即组1以低剂量他莫昔芬(5 mg/kg)给药1 d,组2以低剂量他莫昔芬(5 mg/kg)给药3 d,组3以高剂量他莫昔芬(50 mg/kg)给药1 d,组4以高剂量他莫昔芬(50 mg/kg)给药3 d,给药4周后观察各组小鼠生存率、体重变化,药物诱导4周后观察各组小鼠肠道长度变化、肠内腺瘤生长数量以及大小,再通过苏木精伊红染色、显微镜下观察肠道组织、腺瘤的生理情况。结果第一部分实验发现雌鼠生存率低于雄鼠(P<0.001),死亡率高于雄鼠(P<0.05),各组不同浓度与剂量之间比较生存率差异具有统计学意义(P<0.01)。各组小鼠体重变化与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.001),组1与组2,组2与组3,组1与组4之间差异各具统计学意义(P<0.001,P<0.01,P<0.05)。各组小鼠大肠长度与对照组相比未具统计学意义(P>0.05),组1与组3差异具有统计学意义(P<0.05)。各组小鼠大肠内都长有腺瘤,多数于结肠远端,组3与组4腺瘤较多也较大。给药组小鼠大肠病理情况与健康对照组相比出现腺瘤生长,腺体组织排列紊乱、上皮细胞排列不齐,肠道黏膜屏障松散,隐窝分歧不规则,组3、组4也有炎症发生,组4部分区域发现细胞坏死。结论他莫昔芬诱导Apc⁃Kras⁃Cre肠腺瘤转基因小鼠造模成功,并且由此判断,他莫昔芬浓度10 mg/mL、5 mg/kg的剂量诱导1 d的诱导方式最为合适。

结直肠癌患者肠道菌群促进Apc^min/+小鼠肠道腺瘤进展的研究

目的:探讨结直肠癌患者的肠道菌群对Apc^min/+小鼠肠道腺瘤进展的作用。方法:将4周龄雌性Apc^min/+小鼠随机分为PBS组(灌服无菌磷酸盐缓冲液,PBS)、FMT-H组(灌服健康人菌液)和FMT-C组(灌服结直肠癌患者菌液),每组10只。给予3d抗生素鸡尾酒预处理后,进行为期8周的粪菌移植。光学显微镜下观察并记录每只小鼠肠道腺瘤负荷。收集肠道组织进行免疫组化评价肿瘤细胞增殖水平及Wnt信号通路活化情况。结果:与FMT-H组相比,FMT-C组腺瘤数量和肠道肿瘤组织中Ki-67阳性细胞百分比显著增加。FMT-C组中Wnt信号通路关键蛋白β-catenin出现异位表达,下游的细胞周期蛋白(cyclinD1)表达增多。结论:结直肠癌患者的肠道菌群可诱导肠道慢性低度炎症、活化Wnt信号通路、促进Apcmin/+小鼠肠道腺瘤进展。

李斯特菌感染对小鼠APC活性的影响

目的 :通过对转基因鼠脾T细胞的分化研究 ,探讨感染初期APC的活性。方法 :细胞因子ELISA测定转基因鼠脾T细胞产生的IFN γ及IL 4,FACS鉴定T细胞为TCR TG的T细胞 (Vβ8 2品系 )。 结果 :感染鼠的APC诱导TG鼠的T细胞向Th1方向分化 ,未感染鼠的APC诱导TG鼠的T细胞向Th2方向分化 ,IL 12和IL 4可影响APC对T细胞分化的诱导。结论 :感染和外来细胞因子影响APC的提呈诱导活性。

干酪乳杆菌对APC^(min/+)小鼠结直肠腺瘤的抑制作用及肠道菌群的影响

目的研究干酪乳杆菌(Lactobacillus casei,L.casei)对APC^(min/+)小鼠结直肠腺瘤发生的抑制作用,并且探讨其对肠道菌群的影响。方法将10只APC^(min/+)小鼠分为结直肠腺瘤组和L.casei治疗组,结直肠腺瘤组予PBS灌胃作对照,而L.casei治疗组予干酪乳杆菌灌胃,每天记录小鼠体重、毛发、精神状态等一般情况。实验终点分离结肠,测量结肠长度、计算结直肠腺瘤数量,并行HE染色观察结肠病理情况,采集小鼠粪便,利用16s高通量测序分析小鼠粪便菌群的变化。结果L.casei治疗后APC^(min/+)小鼠大体状态改善,结肠长度/体重较结直肠腺瘤组显著增加(P<0.01),结直肠腺瘤数量减少(P>0.05),组织学癌变倾向更轻;菌群分析提示L.casei治疗后APC^(min/+)小鼠α-多样性有明显下降趋势(P>0.05),两组菌群结构差异显著(PC1+PC2=60.58%,Anosim,Amova;P<0.05,P<0.05),进一步利用LEfSe分析发现L.casei治疗后APC^(min/+)小鼠Gammaproteobacteria纲、Enterobacteriales目、Enterobacteriaceae科、unidentified_Enterobacteriaceae属、Faecalibaculum属、Escherichia_coli种显著增加,而Tenericutes门、Mollicutes纲、Rhizobiales目、Ruminococcaceae科、Eggerthellaceae科、Anaerovorax属、Ileibacterium属、Ileibacterium_valens种显著减少(P均<0.05)。结论干酪乳杆菌干预对APC^(min/+)小鼠结直肠腺瘤有抑制作用,其作用效果可能与下调促癌菌群和上调抑癌共生菌有关。

气道嗜酸性粒细胞摄取吸入性颗粒抗原的研究

目的 :通过小鼠哮喘模型观察气道嗜酸性粒细胞 (EOS)能否摄取吸入的颗粒性抗原。方法 :予 6周龄 BAL B/ c雌性小鼠腹腔注射鸡卵清蛋白 (OVA)使其致敏 ,行 OVA (若丹明标记 )雾化吸入刺激后进行支气管肺泡灌洗 ,收集支气管肺泡灌洗液进行 EOS分离提纯 ,将纯化后的 EOS涂片后在荧光显微镜下观察其是否摄取红色标记的 OVA。结果 :荧光镜下清楚地观察到气道 EOS摄取了吸入的红色标记的 OVA,摄取了 OVA的 EOS形态完整。结论 :EOS在气道表面遭遇外来抗原后 ,可摄取经气道吸入的颗粒性抗原 ,这一重要功能使 EOS完成了作为抗原提呈细胞 (APC)所必需的首要任务。

基于代谢组学探索小檗碱对APC^(min/+)小鼠结直肠腺瘤的作用机制

目的 探讨小檗碱抑制APC^(min/+)小鼠结直肠腺瘤的作用机制。方法 随机取8只C57BL/6小鼠作为对照组,将APC^(min/+)小鼠随机分为模型组和小檗碱低、高(50、100 mg/kg)剂量组,每组8只,60%高脂饲料饲养,持续给药10周,观察结直肠肿瘤数量、最大肿瘤直径;苏木素-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色观察结直肠病理表现,免疫组化观察结直肠ki67、p53阳性率;高分辨非靶向代谢组学检测各组血清代谢物,运用正交偏最小二乘判别分析(orthogonal partial least squares discriminant analysis, OPLS-DA)筛选差异代谢物,对差异代谢物进行功能富集分析;RT-qPCR检测结直肠组织中鸟氨酸转氨甲酰酶(ornithine transcarbamylase,OTC)、精氨酸酶1/2(arginase 1/2,ARG1/2)、一氧化氮合酶2(nitric oxide synthase2,NOS2)、精氨酸代琥珀酸裂解酶(argininosuccinate lyase,ASL)m RNA表达水平。结果 小檗碱可以显著减少APC^(min/+)小鼠结直肠肿瘤数量与最大肿瘤直径,改善肠道非典型增生和炎性浸润,抑制ki67和p53阳性表达率(P<0.001);代谢组学结果发现,与对照组比较,模型组小鼠有145个差异代谢物,与模型组比较,小檗碱组小鼠有51种差异代谢物,功能富集分析显示精氨酸生物合成途径代谢物DL-谷氨酸、L-瓜氨酸、N-乙酰-L-谷氨酸、N-α-乙酰-L-鸟氨酸在模型组小鼠血清中上调,小檗碱治疗后下调;RT-qPCR结果显示,与对照组比较,模型组小鼠肠道中OTC的m RNA表达水平下降(P<0.001),ARG1、ARG2、NOS2的m RNA表达升高(P<0.001);与模型组比较,小檗碱低、高(50、100 mg/kg)剂量组可以恢复OTC m RNA表达(P<0.001)、抑制ARG1、ARG2、NOS2的m RNA表达水平(P<0.001)。结论 小檗碱对结直肠腺瘤的治疗作用可能与抑制血清精氨酸合成、调控精氨酸代谢关键基因表达有关。

Id2在小鼠家族性腺瘤性息肉病发生中的作用

目的研究DNA结合抑制物2(inhibitor of DNA binding2,Id2)在ApcΔ716/+小鼠家族性腺瘤性息肉病(familial adenomatous polyposis,FAP)发生中的作用。方法 Id2基因缺失的基因工程小鼠和家族性腺瘤性息肉病模型ApcΔ716/+小鼠杂交后,统计ApcΔ716/+小鼠与ApcΔ716/+Id2-/-杂交小鼠小肠肠道息肉的数目及总负荷,通过Western blot及原位杂交技术测定腺瘤性息肉Id2的表达。结果腺瘤性息肉组织中Id2蛋白及mRNA表达明显升高,相比ApcΔ716/+Id2野生型小鼠,ApcΔ716/+Id2-/-杂交小鼠肠道息肉总数目与不同大小的肠道息肉数目有明显减少(P均<0.05)。结论肠道腺瘤性息肉组织中Id2表达升高,Id2的缺失能抑制ApcΔ716/+小鼠肠道腺瘤性息肉的发生,Id2在人类家族性腺瘤性息肉病中可能发挥着促进肠道息肉形成的作用。

贝参特牌西洋参三七胶囊对氢化可的松所致免疫低下小鼠的影响

目的观察贝参特牌西洋参三七胶囊(APC)对氢化可的松所致小鼠免疫功能低下的调节作用。方法清洁级ICR雄性小鼠随机分为对照组、模型组及APC低、中、高剂量组,每组40只。对照组及模型组每日灌胃给予0.5%羧甲基纤维素钠20ml/kg,药物组分别灌胃给予APC0.25、0.5、1.0g/kg,每日1次,连续灌胃30天。除对照组外,各组均于给药第24、26、28、30天皮下注射氢化可的松40mg/kg,建立小鼠免疫功能低下模型。计算小鼠胸腺、肝脏和脾脏系数,测定小鼠廓清指数K,吞噬活性α,T淋巴细胞转化功能,NK细胞活性,血清溶血素生成及血清TNF-α和IL-6含量。结果APC能明显增强小鼠脏器系数、廓清指数和吞噬指数,提高NK细胞活性,促进血清溶血素生成和T淋巴细胞增殖反应,提高血清TNF-α和IL-6含量。结论APC对小鼠非特异性及特异性免疫功能均具有增强作用。

白细胞介素6／信号转导和转录激活因子3通路在胆酸诱导Apc^min／＋小鼠肠腺瘤癌变中的作用

目的探讨胆酸对Apcmin/＋小鼠肠道腺瘤癌变的影响及其作用机制。方法将20只Apc^min/＋小鼠分为对照组和胆酸组，每组10只。对照组常规饮食，胆酸组在常规饮食基础上添加0.4%胆酸。给药12周后处死，观察两组肠道肿瘤数目、大小和分布情况。HE染色评价肠道肿瘤病理类型，Ki-67免疫组织化学法评价肿瘤细胞增殖水平。实时荧光定量PCR检测肠道炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α mRNA表达水平。通过免疫组织化学法评价胆酸对IL-6/信号转导和转录激活因子3（IL-6/STAT3）通路的激活情况。蛋白质印迹法进一步验证胆酸刺激对IL-6/STAT3及其下游靶基因细胞周期蛋白的影响。统计学分析采用独立样本t检验。结果与对照组相比，胆酸可显著增加Apc^min/＋小鼠肠道腺瘤数量[（22.80±0.93）个比（33.40 ±1.17 ）个]和Ki-67阳性细胞率[（31.60±2.14）%比（71.20±3.19）%]，差异均有统计学意义（t＝7.11、10.31，P均〈0.01）。胆酸组HE染色未见明显炎性细胞浸润，炎性细胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α相对表达量均高于对照组（分别为7.09±1.03比1.09±0.11，2.27±0.19比0.99±0.09，14.70±2.29比1.13±0.10），差异均有统计学意义（t＝5.81、6.11、5.92，P均〈0.01）。在小鼠肠道组织中胆酸可明显上调IL-6和磷酸化的STAT3（Tyr705）的蛋白质表达水平，胆酸刺激永生化结肠上皮细胞系（IMCE）组磷酸化的STAT3（Tyr705）表达水平约是对照组的5倍（5 517.00±81.50比863.50±9.13），细胞周期蛋白表达水平约是对照组的7倍（11 165.00±78.53比2 443.00±45.85），差异均有统计学意义（t＝56.74、95.91，P均〈0.01）。结论胆酸可通过诱导肠道低度炎性反应激活IL-6/STAT3通路，促进肿瘤细胞增殖从而诱导Apc^min/＋小鼠肠腺瘤癌变。

Cdc20基因突变促进APCmin/＋小鼠结肠癌的发展

目的 运用Cdc20^loxp/＋APC^min/＋ villin-cre^＋/-基因突变小鼠,研究Cdc20基因突变在APCmin/＋小鼠结肠癌发生和发展中的作用.方法 通过小鼠杂交得到Cdc20lloxp/＋APCmin/＋ villin-cre＋/-基因突变小鼠和APCmin/＋基因突变小鼠,通过表型分析及组织学分析,比较两组小鼠肠道肿瘤的差异.结果 Cdc20^loxp/＋APC^min/＋ villin-cre^＋/-和APCmin/＋基因突变小鼠肠道肿瘤数分别为（1.2±0.5）、（1.6±0.5）个,差异无统计学意义（t=0.215,P=0.588）;肿瘤最大径分别为（2.7±0.3）、（2.5±0.2） cm,差异无统计学意义（f=0.568,P=0.575）.Cdc20loxp/＋APCmin/＋villin-cre＋/-小鼠肠道肿瘤为腺癌,APCmin/＋小鼠肠道肿瘤为管状腺瘤.结论 Cdc20基因突变可加快APCmin/＋小鼠肠道肿瘤恶变,促进肠道肿瘤发展,但不影响肿瘤数目和大小.

ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-转基因小鼠模拟人散发性结直肠癌

目的构建能模拟人散发性结直肠癌发生发展的ApcloxP/loxP+ KrasLSL-Gl2D/-双转基因小鼠模型.方法将C57 BL/6-Apctm1Tyj/J小鼠(ApcloxP)、B6.129S4-Krastm4Tyj/J(KrasLSL-G12D)小鼠与C57 BL/6小鼠转换遗传背景后再杂交建系,通过聚合酶链反应(PCR)和荧光定量PCR鉴定小鼠及其子代基因型,筛选出基因型为Apclox/loxP+ KrasLSL-G12D/-的双转基因小鼠.将小鼠分为两组C57BL/6J(10只)和ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-(10只),在小鼠结肠镜下向小鼠肠黏膜内注射表达Cre重组酶和Luciferase的慢病毒,通过小动物活体成像系统(IVIS)动态观察小鼠成瘤情况,对小鼠瘤变组织取材进行苏木精-伊红(HE)染色观察其组织病理学变化情况,两组比较采用t检验.结果本研究成功培育出双转基因ApcloxP/loxP+ KrasLSL-G12D/-小鼠品系共24只,实验组与对照组小鼠日龄分别为(62±2)、(63±2)d,差异无统计学意义(t=0.343,P> 0.05);两组小鼠体重分别为(21.39±1.40)、(22.35±1.37)g,差异无统计学意义(t=0.682,P>0.05).向小鼠肠黏膜内注射慢病毒后,至12周末经IVIS观察及组织病理学证实,ApcloxP/loxP+KrasLSL-G12D/-组10只中有4只小鼠结直肠发生突变而形成肿瘤病灶,成瘤率40%,而C57BL/6J组小鼠未发生肿瘤.结论本研究成功通过表达Cre酶的慢病毒诱导ApcloxP/loxP+KrasLSL-G12D/-双转基因模型小鼠结直肠发生癌变,较好地模拟了人散发性结直肠癌的发生发展过程.