香鱼ApoC-Ⅰ的克隆、序列分析及其镉胁迫下的表达

载脂蛋白C-Ⅰ（Apolipoprotein C,ApoC-Ⅰ）是载脂蛋白家族中分子质量最小的成员,在脂类摄入、转运和分泌中发挥重要作用。通过c DNA文库随机测序获得了香鱼（Plecoglossus altivelis）ApoC-Ⅰ（Pa ApoC-Ⅰ）全长c DNA序列。Pa ApoC-Ⅰ由574个核苷酸组成,包含一个长度267 bp的开放阅读框,编码88个氨基酸,预测分子量为10.08 ku,N-末端1-20位氨基酸残基为信号肽序列。氨基酸序列多重比对结果表明,Pa ApoC-Ⅰ与虹鳟（Oncorhynchus mykiss）ApoC-Ⅰ同源性最高,为67.0%;系统进化树分析表明,哺乳动物、爬行动物、两栖类和鱼类的ApoC-Ⅰ分别成簇,Pa ApoC-Ⅰ位于鱼类ApoC-Ⅰ簇中,且与虹鳟ApoC-Ⅰ进化相关性最高。基因组结构分析表明,Pa ApoC-Ⅰ基因组DNA序列由2个内含子和3个外显子组成。实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR,qRTPCR）结果显示,Pa ApoC-ⅠmRNA表达量在香鱼肝组织中最高,镉胁迫后在肝、脾、肾和肠中显著上调,在鳃中表达量显著下调。综上,Pa ApoC-Ⅰ的表达与镉胁迫密切相关,可能作为水环境中重金属镉污染的生物分子标记。研究结果为进一步研究鱼类ApoC-Ⅰ的功能及其在重金属胁迫中的作用机制提供了基础资料。

中压液相层析法纯化人VLDL主要载脂蛋白

目的建立中压液相层析分离法纯化人VLDL主要载脂蛋白(apo)E、CⅠ、CⅡ和CⅢ的方法。方法以低温乙醇法制备人血浆白蛋白后的残余组分FⅡ+Ⅳ为原料,经一次性密度梯度超离心得到VLDL。脱脂后的VLDL(apoVLDL)经中压Sephacryl S-200柱层析得到apoE和apoCs粗品。apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,apoCs经DEAE-Sephacel离子交换层析进行分离。结果apoE经肝素琼脂糖CL-6B亲和层析进一步纯化,可得纯度为93.8%的纯品;apoCs经离子交换层析分离得到纯度为92%以上的apoCⅡ、apoCⅢ。所纯化各载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ经免疫单扩和SDS-PAGE鉴定为免疫纯及电泳纯。结论成功建立了一种可大量、快速、高分辨分离提纯载脂蛋白apo E、CⅠ、CⅡ及CⅢ的方法。