阿尔茨海默病转基因鼠模型的建立

目的建立阿尔茨海默病(AD)双转基因鼠,为进一步研究AD发病机制提供较为理想的实验动物。方法将人载脂蛋白E4转基因鼠和突变APP转基因鼠杂交。结果经PCR初筛,对阳性小鼠基因组DNA作进一步的Southern杂交鉴定,获得2只双转基因小鼠,之后传代建系。结论为进一步研究多个基因对AD的致病作用提供较为理想的实验动物。

人突变Ap0E4基因对转基因鼠血脂代谢的影响

目的探讨人突变载脂蛋白E4(apolipoprotein E4,ApoF4)基因表达对转基因鼠血脂代谢的影响。方法应用显微注射法建立人突变ApoE4基因的转基因鼠,分子杂交鉴定。酶法测定人突变ApoE在F1代小鼠染色体上的整合与在血中的表达。酶法测定小鼠血清三酰甘油(triglyceride,TG)和血清胆固醇(cholesterol,TC)水平。结果人突变ApoE4基因稳定地整和于F1代小鼠染色体上并高效表达于血清中。12月龄转基因鼠血脂代谢[血清TG水平(2.89±0.31)mmol/L,血清TC水平(3.02±0.14)mmol/L]与同龄对照组鼠[血清TG水平(2.05±0.12)mmol/L,血清TC水平(2.11±0.01)mmol/L]比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论人突变ApoE4基因的异常表达影响到了小鼠的血脂代谢。

亚慢性铝染毒对转人载脂蛋白E4基因小鼠β-淀粉样蛋白含量及低密度脂蛋白家族的影响

[背景]铝是阿尔兹海默病的重要环境因素,载脂蛋白E4基因(ApoE4)是阿尔兹海默病的重要遗传因素。近年来铝和ApoE4基因如何导致学习记忆损伤引起了广泛关注。铝和ApoE4基因分别对β-淀粉样蛋白(Aβ)清除和神经元突触可塑性的影响有待进一步研究。[目的]探究铝与ApoE4基因联合作用对小鼠Aβ及载脂蛋白E受体2(ApoER2)等低密度脂蛋白家族含量的影响。[方法]野生型和转人ApoE4基因型的C57BL/6小鼠各16只,每种类型小鼠随机分为染铝组[40μmol·kg^-1Al(mal)3]、对照组(生理盐水),每组8只。染毒方式为腹腔注射,每注射5d停止2d,染毒时间为60d。采用Morris水迷宫试验检测小鼠学习记忆能力,以高尔基染色检测海马CA1区突触可塑性,采用Western blotting法检测海马组织中ApoER2、低密度脂蛋白受体相关蛋白-1(LRP1)、极低密度脂蛋白受体(VLDLRs)、淀粉样前体蛋白(APP)的蛋白表达情况,用Elisa方法检测海马中Aβ40和Aβ42蛋白含量。[结果]Morris水迷宫试验结果显示野生型小鼠对照组和染铝组、转ApoE4基因型小鼠对照组和染铝组染毒结束后第1天逃避潜伏期分别为(48.56±18.31)、(46.77±19.91)、(45.13±19.07)、(46.81±18.04)s,至染毒结束后第5天分别下降至(19.43±13.28)、(27.03±17.47)、(21.27±20.17)、(30.06±20.02)s。方差分析显示,染毒结束后第4、5天各组逃避潜伏期差异有统计学意义(P<0.05);同类型小鼠对照组低于染铝组,同处理条件下野生型小鼠低于转基因型小鼠,但基因类型和铝之间交互作用无统计学意义(P>0.05)。野生型小鼠对照组和染铝组、转基因型小鼠对照组和染铝组穿越平台次数分别为(2.86±0.99)、(1.88±0.64)、(2.63±0.77)、(0.50±0.53)次,基因类型和铝之间交互作用有统计学意义(P<0.05)。野生型小鼠对照组和染铝组、转基因型小鼠对照组和染铝组树突棘密度分别为每微米(0.57±0.06)、(0.34±0.05)、(0.39±0.05)、(0.26±0.04)个,基因类型和铝之间交互作用有统计学意义(P<0.05)。Western blotting结果显示,染铝与基因类型对ApoER2和LRP1的蛋白表达存在交互作用(P<0.05),且均会导致ApoER2和LRP1蛋白表达下降,对APP和VLDLRs的蛋白表达无交互作用(P<0.05)。Elisa检测结果表明,β40蛋白表达在各组间差异无统计学意义(P>0.05);而Aβ42蛋白表达在各组间差异有统计学意义,且基因类型和铝之间存在交互作用(P<0.05)。[结论]铝和ApoE4基因对小鼠学习记忆能力存在一定程度的影响,尤其是空间学习记忆能力。铝和ApoE4基因对海马CA1区突触可塑性可能存在交互作用,表明铝和ApoE4基因联合作用可能对突触可塑性造成影响;铝和ApoE4基因对Aβ含量变化可能存在交互作用,尤其是Aβ42含量的变化,其原因可能是铝和ApoE4基因联合作用导致低密度脂蛋白家族中ApoER2和LRP1降低。