铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及机制研究

目的探讨铁皮石斛对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的影响及作用机制。方法用高脂饲料喂养建立ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型,随机分别给予生理盐水(10 mL/kg)、麝香保心丸溶液(20 mg/kg)、低剂量铁皮石斛液(10 g/kg)、高剂量铁皮石斛液(30 g/kg)为模型组、阳性药物组、低剂量组和高剂量组,普通饲料喂养ApoE-/-小鼠为对照组给予生理盐水(10 mL/kg),每组8只。治疗4周后,苏木精-伊红染色观察小鼠胸主动脉组织病理学改变;检测小鼠血浆中甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;利用荧光定量PCR技术检测胸主动脉中胆固醇外转运蛋白ATP结合盒转运体A1(ABCA1)、ATP结合盒转运体G1(ABCG1)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达情况。结果与对照组比较,模型组动脉内膜脂质斑块形成,斑块内有菱形胆固醇结晶,伴炎性细胞浸润和大量泡沫细胞聚集。与模型组比较,阳性药物组、低剂量组和高剂量组小鼠胸主动脉的泡沫细胞沉积减少,动脉粥样硬化病变程度减轻。与对照组比较,模型组TG、TC、LDL-C水平高、HDL-C水平低,ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量低,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比较,阳性对照组、低剂量组和高剂量组TG和TC水平降低,HDL-C水平升高;阳性药组、高剂量组ABCA1、ABCG1、PPARγ表达量升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论铁皮石斛可改善ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠的血脂水平,减轻动脉粥样硬化小鼠的动脉病变程度,可能与影响ABCA1、ABCG1和PPARγ的表达有关。

基于ACOX1-CPT2基因表达变化探讨肉苁蓉苯乙醇苷对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的改善作用

目的:探讨肉苁蓉苯乙醇苷(phenylethanoid glycosides from Cistanche deserticola, PGCD)对高脂饮食诱导ApoE-/-小鼠肝组织脂质代谢的影响。方法:70只雄性ApoE-/-小鼠随机分为模型组(MOD)、阿伐他汀[20 mg/(kg·d)]+依折麦布[20 mg/(kg·d)]组(A+E)及肉苁蓉苯乙醇苷组[(250、500、1000 mg/(kg·d))](L-PGCD、M-PGCD、H-PGCD),均以高脂饮食(脂肪42%、胆固醇0.15%)饲养,另取14只雄性C57BL/6J小鼠喂食普通饲料作为正常对照组。12周末,检测各组小鼠血浆三酰甘油(TG)含量和谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性。取新鲜肝组织匀浆,ELISA方法检测脂肪酸合成酶(FAS)、长链脂酰辅酶A脱氢酶(LCAD)等脂质代谢相关酶的含量;检测谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)和过氧化脂质(LPO)含量;RT-PCR检测肝组织酰基辅酶A氧化酶1(ACOX1)和肉碱棕榈酰基转移酶2(CPT2)的基因表达。结果:与模型组相比,3个剂量PGCD均明显降低血清和肝脏TG水平,抑制血清ALT、AST的活性,剂量依赖性地减少FAS含量,显著提升LCAD含量和GSH-Px和SOD活性,并降低MDA和LPO含量。RT-PCR实验显示,PGCD显著升高肝组织ACOX1和CPT2 mRNA表达。结论:肉苁蓉苯乙醇苷能够通过调控肝组织ACOX1和CPT2基因表达改善肝组织脂质代谢,降低肝组织的脂质沉积。

基于Wnt/β-catenin通路探讨通心络胶囊对ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠炎症水平的影响

目的探究通心络胶囊对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响及其通过Wnt/β-catenin信号通路产生的作用机制。方法将24只ApoE-/-小鼠随机分为正常饮食组(n=6)及高脂饮食组(n=18)。高脂饮食组喂养8周后,随机分为阿托伐他汀组(n=6)、通心络胶囊组(n=6)、模型组(n=6),并分别给予阿托伐他汀4.8 mg/kg、通心络胶囊超微粉1.5 g/kg以及同体积的生理盐水,每日1次,持续8周。末次给药后禁食12 h,收集各组小鼠主动脉组织进行苏木素-伊红(HE)及油红O染色,观察主动脉斑块情况;收集小鼠血清,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的含量;并通过蛋白免疫印迹法(Western blotting)和实时荧光定量聚合物酶链式反应(Real-time PCR)检测主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白及基因表达量的变化。结果与正常组相比较,模型组小鼠的斑块面积明显增加,血清中的炎症因子TNF-α和IL-6含量增加。与模型组相比较,通心络胶囊能够明显降低ApoE-/-小鼠粥样硬化斑块面积,降低血清中TNF-α和IL-6含量,降低主动脉组织中Wnt1、Wnt3a、β-catenin蛋白表达和基因水平。结论通心络胶囊可降低ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠血清中炎症因子表达,降低斑块面积,其机制可能与其调控Wnt/β-catenin信号通路有关。

养阴活血方干预ApoE-/-动脉粥样硬化小鼠DNA甲基化酶的研究

目的从DNA甲基化角度观察养阴活血方及其功效单元干预动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)进程。方法ApoE-/-小鼠随机分为对照组、模型组、辛伐他汀组、养阴活血方组、养阴组、清热组和活血组。对照组小鼠给予普通饲料喂养,其余组小鼠均给予高脂饲料喂养。分别于第10、12、14、16、18周,对照组小鼠注射等体积无菌PBS,其余组腹腔注射10μg的LPS。灌胃给药与高脂饲料喂养同时进行,第20周检测。油红O染色观测小鼠主动脉斑块面积;生化试剂盒检测小鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C、non-HDL-C水平;HE冠脉染色观测小鼠冠脉管腔狭窄情况和管腔面积;qPCR检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Tet1、Tet2、Tet3、Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b mRNA表达;Western blot检测小鼠脾脏/主动脉DNA甲基化酶Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达;ELISA检测细胞因子IL-6、IL-2、TGF-β1的变化。结果与模型组相比,养阴活血方组能显著减少斑块面积并抑制冠脉狭窄(P<0.01),降低TG、LDL-C水平(P<0.01),升高HDL-C水平(P<0.05),降低脾脏Dnmt1和Dnmt3a蛋白表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt1 mRNA、Dnmt3b mRNA(P<0.05,P<0.001)和主动脉Dnmt1、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),下调血清IL-6水平(P<0.05),上调TGF-β1水平(P<0.05)。与模型组比较,各功效单元组均不同程度减少斑块面积、调节血脂水平;养阴组降低脾脏Dnmt3b mRNA表达(P<0.05),降低主动脉Dnmt3b mRNA(P<0.001)和Dnmt3a蛋白(P<0.05)表达,升高TGF-β1水平(P<0.05);清热组降低脾脏Dnmt1蛋白表达(P<0.05),主动脉Dnmt1和Dnmt3b mRNA(P<0.05)和Dnmt1、Dnmt3a、Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05),增加TGF-β1水平(P<0.05);活血组降低主动脉Dnmt3a和Dnmt3b蛋白表达(P<0.05),降低IL-6水平(P<0.05)。结论养阴活血方通过调节血脂,降低DNA甲基化酶Dnmts的表达,改善炎症水平,从而有效减少高脂联合LPS注射诱发的ApoE-/-小鼠AS斑块的形成。

ApoE-/-小鼠在中医抗动脉粥样硬化研究中的应用及进展

在全球范围内,心血管疾病已成为威胁人类健康的“头号杀手”,而动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心血管疾病共同的病理生理基础,已成为欧美国家第一大死亡原因;在中国,随着经济水平及生活方式的改变,其发病率也呈逐年上升趋势。ApoE-/-小鼠由美国洛克菲勒大学生化遗传与代谢实验室和北卡罗莱纳大学病理遗传实验室应用胚胎干细胞基因敲除技术于1992年培育成功。ApoE-/-小鼠是动脉粥样硬化研究的经典动物模型,可在自然膳食的情况下形成严重的高脂血症,并自发形成纤维斑块和复合斑块,病理学改变与人类极为相似,因而被广泛应用于中医抗AS的研究。

基于氧化应激途径探讨人参益脉方干预血管老化作用机制

目的观察人参益脉方对ApoE^(-/-)小鼠氧化应激及血管老化的影响,探讨其干预血管老化的作用机制。方法将40只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、西药组(瑞舒伐他汀,2.6 mg/kg)及中药低、高剂量组(人参益脉方,4.29、8.58 g/kg),每组10只,另取10只C57BL/6J小鼠作为正常组。采用西式饮食饲料喂养ApoE^(-/-)小鼠建立血管老化模型,同时各给药组分别予相应药物灌胃,正常组和模型组灌胃等体积纯净水,连续12周。HE染色及Masson染色观察小鼠主动脉组织形态变化,ELISA检测血清氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)含量,比色法测定血清活性氧(ROS)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽还原酶(GPX)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD^(+))含量,Western blot检测主动脉组织沉默信息调节因子1(SIRT1)、p21、p53、NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白表达。结果与正常组比较,模型组小鼠主动脉可见脂质沉积,内膜及中膜明显增厚,弹性纤维减少,胶原纤维增多;血清ox-LDL、ROS含量显著升高(P<0.01),GSH、GPX、NAD^(+)含量显著降低(P<0.01);主动脉组织SIRT1蛋白表达显著降低(P<0.05),p21、p53蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。与模型组比较,各给药组主动脉内膜可见少量脂质沉积,各层膜结构较清晰,胶原纤维减少;各给药组血清ox-LDL、ROS含量显著降低(P<0.01),GSH含量显著升高(P<0.05,P<0.01),中药低剂量组NAD^(+)含量显著升高(P<0.05);中药高剂量组主动脉组织p21、NOX4蛋白表达显著升高(P<0.05,P<0.01)。与西药组比较,中药高剂量组ROS含量显著降低(P<0.01),p53蛋白表达显著降低(P<0.05)。与中药低剂量组比较,中药高剂量组p21蛋白表达显著降低(P<0.01),NOX4蛋白表达显著升高(P<0.01)。结论人参益脉方可能通过调节氧化应激水平和相关蛋白表达减轻血管内皮损伤,从而发挥改善血管老化作用。

miR-126在ApoE-/-小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达

目的观察微小RNA(miR)-126及靶基因血管细胞粘附分子1(VCAM-1)在载脂蛋白E基因敲除(Apo E-/-)小鼠颈动脉粥样硬化斑块中的表达,探讨miR-126与动脉粥样硬化斑块形成的关系。方法取8周龄Apo E-/-小鼠24只,随机分为对照组(假手术+普通饮食)、模型组(颈动脉套管术+高脂饮食)各12只。术后第8周末检测血浆中总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的水平,HE染色观察颈总动脉斑块面积/血管面积,荧光定量PCR(RT-PCR)检测斑块内miR-126、VCAM-1 mRNA水平的表达,Western blot检测VCAM-1蛋白水平的表达。结果与对照组相比,模型组血脂水平明显升高(P<0.05);模型组的颈动脉粥样硬化斑块面积/血管面积明显大于对照组(P<0.01);miR-126表达水平在模型组明显低于对照组(P<0.01);VCAM-1的mRNA及蛋白的表达在模型组明显高于对照组(P<0.01)。结论 miR-126在颈动脉粥样硬化斑块中的表达下调可能在斑块形成过程中发挥重要作用。

FOXP3基因对ApoE-knockout小鼠动脉粥样硬化的影响

目的:研究FOXP3对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化形成的影响。方法:构建FOXP3-siRNA慢病毒载体,免疫磁珠分选Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞。利用Westernblot方法对构建的载体进行功能性研究。实验动物分为阴性对照组、阳性对照组、FOXP3-siRNA慢病毒注射组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组。比较各组小鼠的斑块面积和不同组织Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目和功能;利用ELISA法检测各组脾细胞炎性因子浓度;利用RT-PCR和Westernblot分析不同组织中FOXP3转录水平和Foxp3蛋白表达水平。结果:与对照组和Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞注射组比较,FOXP3-siRNA慢病毒注射组小鼠斑块面积明显增加(P<0.05);Foxp3+ CD4+ CD25+Treg细胞的数目显著减少(P<0.05),功能下降;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平降低(P<0.05)。与对照组和FOXP3-siRNA慢病毒注射组比较,输注Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞组斑块面积显著减小(P<0.01);Foxp3+ CD4+ CD25+ Treg细胞的数目显著增加(P<0.01),功能增强;Foxp3蛋白表达和FOXP3转录水平增高(P<0.01)。结论:FOXP3可能通过调控体内炎症反应而产生抗动脉粥样硬化作用。

木犀草素改善高脂诱导的ApoE-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化作用研究

目的:探讨木犀草素对高脂诱导的Apo E-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化的改善作用。方法:采用高脂饲料喂养诱导非酒精性脂肪肝和动脉粥样硬化模型,木犀草素低、高剂量(70,140 mg/kg)灌胃给药,每天1次,连续12周。给药结束后,检测血清血脂四项、超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),肝脏匀浆检测谷丙转氨酶、天冬氨酸氨基转移酶(AST);观察肝脏组织HE染色和油红O染色以及主动脉根部的油红O染色;通过TUNEL试验检测肝脏细胞的凋亡;应用免疫组化检测肝脏bcl-2和caspase-3的表达。结果:木犀草素能够使肝脏ALT、AST水平降低;提高血清中SOD、GSH-Px,降低血清MDA的表达;改善肝脏中脂质堆积以及脂肪泡的形成,减少主动脉根部的脂质堆积;降低TUNEL阳性细胞数,以及提高肝脏中bcl-2和减少caspase-3的表达。结论:本研究表明木犀草素可通过减少氧化损伤来改善高脂诱导的Apo E-/-小鼠非酒精性脂肪肝及动脉粥样硬化。

一种新型apoE-/-小鼠动脉粥样硬化和心肌梗死双模型的建立

目的对apoE-/-小鼠给予高脂饮食和开胸结扎左前降支(LAD)干预,探索建立一种新型同一生物体内动脉粥样硬化(AS)和急性心肌梗死(AMI)并存的小鼠双模型。方法选择30只雄性6周龄apoE-/-小鼠,高脂饮食饲养;5只普通饮食饲养作为对照。第12周时异氟烷气体麻醉下,开胸采用挤压法暴露心脏,直视下快速结扎LAD中段,体表心电图记录心电学变化;继续饲养3周后处死动物并取材,评估心肌梗死和动脉粥样硬化的病理改变。采用心肌Evans′blue-TTC染色观察心肌梗死范围,Masson染色观察心肌梗死病理变化;主动脉血管段行油红O染色及HE染色,观察动脉粥样硬化斑块形成。结果术中见结扎点下方心肌变白,心电图提示ST段和J点抬高,符合急性心肌梗死临床特征。心肌Evans′blue-TTC染色可见明显的白色梗死区域,Masson染色可见心肌梗死区凝固性坏死伴大量纤维组织形成,符合心肌梗死的典型病理改变。直视条件下主动脉血管段可见大量斑块形成,油红O染色见明显橘红色染色区域,HE染色可见斑块内泡沫细胞脂质沉积,证实apoE-/-小鼠结合高脂饮食可形成明显的动脉粥样硬化病理改变。结论首次报道一种新型apoE-/-小鼠动脉粥样硬化和心肌梗死双模型的建立,两种病理状态的并存更为接近临床心血管疾病的发病特点,为冠心病发病机制的研究和药物干预评估提供平台。

松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响

目的探究松果菊苷对动脉粥样硬化血管钙化小鼠Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法将48只7周龄雄性ApoE-/-小鼠采用随机数字表法分为6组,每组8只:分别为模型组,松果菊苷(ECH)12.5、25、50 mg/kg组,辛伐他汀片(Sta)组和对照组,依据不同分组建模及给药。观察小鼠主动脉组织形态学变化,检测小鼠血清中生化指标水平,采用实时荧光定量PCR法检测小鼠主动脉组织β-连环蛋白(β-catenin)mRNA的表达水平,采用Western Blot法检测小鼠主动脉组织β-catenin、Wnt3a、LDL受体相关蛋白5(LRP5)及骨形态发生蛋白2(BMP-2)蛋白表达水平,采用免疫组化法检测小鼠主动脉组织LRP5蛋白表达水平。结果ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉中膜较模型组明显变薄,弹力纤维排列整齐,斑块明显缩小。ECH 25、50 mg/kg组和Sta组TG、TC、LDL-C水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组和Sta组HDL-C水平均高于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型组小鼠主动脉β-cateninmRNA表达水平高于对照组,ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组β-cateninmRNA表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠模型组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平高于对照组,ECH 25、50 mg/kg组及Sta组小鼠主动脉β-catenin、Wnt3a、LRP5及BMP-2蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。模型组小鼠主动脉LRP5蛋白表达水平高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。ECH 12.5、25、50 mg/kg组及Sta组LRP5蛋白表达水平均低于模型组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论ECH可以有效改善小鼠动脉粥样硬化血管钙化的发生与发展,其机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

电针对ApoE-/-小鼠血浆hs-CRP、IL-6含量及主动脉窦斑块TNF-α表达的影响

目的观察电针对ApoE-/-小鼠血浆超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6)含量及主动脉窦斑块肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法将造模成功的ApoE-/-小鼠30只随机分为模型组和药物组及电针组,每组各10只。电针组予针刺单侧神门、内关、后三里及三阴交,并接通韩氏电针仪,药物组给予辛伐他汀40mg/(kg·d)。采用ELISA法检测各组小鼠血浆hs-CRP及IL-6的含量,免疫组织化学法检测各组小鼠主动脉窦斑块中TNF-α的表达。结果电针组血浆中hsCRP、IL-6含量与模型组相比较,均有显著降低(P<0.01);主动脉窦TNF-α免疫组化显示:模型组有大量TNF-α分布于纤维帽上,斑块中含有大范围坏死核和胆固醇结晶体,而电针组少量TNF-α表达于纤维帽上,未见明显坏死核和胆固醇结晶体。结论电针治疗改善了ApoE-/-小鼠机体的炎症反应状态、达到保护血管内膜、抑制斑块发展的作用,说明抗炎可能是电针治疗AS的机制之一。

雷公藤内酯醇对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的作用研究

目的研究不同剂量雷公藤内酯醇对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的治疗效果。方法将4只10周龄雄性ApoE-/-小鼠作为模型组,4只10周龄雄性C57BL/6J小鼠作为对照组,适应性喂养1周后处死,取主动脉标本做HE染色。另将10周龄雄性ApoE-/-小鼠32只作为实验组,按每天每千克体重给药量随机分为4组:50μg/(kg·d)、75μg/(kg·d)组、100μg/(kg·d)、空白对照组,每组8只。10周龄雄性C57BL/6J小鼠8只作为阴性对照组。给药3周后处死小鼠,取主动脉标本做HE染色;收集血清,测定IL-10、IL-12含量。结果 (1)在11周龄时两组主动脉HE染色Roberts&Thompson方法评分分别为:模型组[(5.250±0.500)分]>对照组[(0.500±0.577)分],差异有统计学意义。(2)经不同浓度雷公藤内酯醇处理3周后,各组主动脉HE染色Roberts&Thompson方法评分分别为:空白对照组[(6.500±0.189)分]>100μg/(kg·d)组[(4.625±0.183)分]>50μg/(kg·d)组[(3.375±0.183)分]>75μg/(kg·d)组[(1.375±0.183)分]>阴性对照组[(0.000±0.000)分],差异有统计学意义。(3)75μg/(kg·d)组血清中IL-10浓度升高最明显,与各组比较差异均有统计学意义(P<0.001);各组血清中IL-12浓度均较空白对照组降低,其中75μg/(kg·d)组降低最明显,两者之间的差异有统计学意义(P<0.01)。结论 (1)在11周龄时,ApoE-/-小鼠能形成AS模型。(2)不同浓度雷公藤内酯醇处理3周后,ApoE-/-小鼠AS病变有不同程度缓解,其中75μg/(kg·d)浓度下效果最佳。(3)雷公藤内酯醇能够上调IL-10、下调IL-12的表达水平,抑制炎症反应,减轻粥样斑块的形成,此可能为免疫抑制剂抗动脉粥样硬化的机制之一。

新塔花对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化模型中TLR4/NF-κb信号通路的影响

目的观察新塔花水提物抗动脉粥样硬化(AS)的作用机制并对Toll样受体4(TLR4)/核转录因子-κb(NF-κb)信号通路及相关细胞因子的影响并探讨其机制。方法 40只8周龄ApoE小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组[3 mg/(kg·d),溶于0.5 mL蒸馏水]、新塔花水提物高剂量组[32 g/(kg·d)]、新塔花水提物低剂量组[9 g/(kg·d)],每组10只;同品系C57小鼠10只为空白组。所有小鼠给予高脂饲料普通环境饲养。适应性喂养1周后,实验组给予一定剂量药物灌胃,空白组和模型组给予等量蒸馏水灌胃,每周根据小鼠体质量变化调整灌胃剂量。12周后处死小鼠,采集血清及主动脉。胸主动脉用于苏木素伊红(HE)染色;血清用于酶联免疫双抗夹心(ELISA)法和血脂4项检测:三酰甘油(TAG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDLG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C);升主动脉用于免疫组织化学(IHC)法检测TLR4、NF-κb蛋白水平。结果血脂检测他汀组、高剂量组、低剂量组具有明显的降脂效果(P <0.01),高剂量组和低剂量组具有一定的降低胆固醇效果(P <0.05);ELISA见模型组细胞黏附因子(ICAM)比空白组明显升高(P <0.01),他汀组、高剂量组、低剂量组低于模型组(P <0.01);模型组基质金属蛋白酶-9(MMP-9)较空白组明显升高(P <0.01),他汀组、高剂量组、低剂量组低于模型组(P <0.01);免疫组化(IHC)结果模型组高于空白组免疫组化分析模型组TLR4、NF-κb表达水平均高于空白组(P <0.01),他汀组、高剂量组和低剂量组TLR4、NF-κb表达水平均低于模型组(P <0.01)。结论新塔花具有预防AS的作用,其机制可能与调控TLR4/NF-κb信号通路有关。

补阳还五汤抗ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化作用与机制研究

目的探究补五还阳汤对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化的抗击作用与机制研究。方法构建ApoE-/-动脉粥样硬化模型,并分为造模组、观察组A和观察组B各5只,分别每天给予高脂饮食、高脂饮食+补五还阳汤5 g/kg、补五还阳汤15 g/kg共12周,并用C57BL/6J-12小鼠5只作为空白对照进行正常饮食,对比4组小鼠的体质量、血脂、炎性因子的水平。结果给药前4组小鼠体质量并无明显差异(P<0.05),随着时间增加,各组小鼠体质量均明显增大,对比给药12周后各组小鼠的体质量,发现造模组和观察组小鼠体质量明显低于空白对照组(P<0.05),而观察组A小鼠体质量明显低于造模组小鼠,观察组A与观察组B小鼠体质量并无明显的差异(P>0.05);造模组小鼠的甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC)、低密度蛋白胆固醇(LDL-C)、氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)水平明显高于空白对照组小鼠(t=5.274、5.101、4.763、4.856,P<0.05),而高密度脂蛋白(HDL-C)、载脂蛋白(ApoA-I)显著低于空白对照组小鼠(t=5.924、5.806,P<0.05);观察组A小鼠的TG、TC、LDL-C、ox-LDL水平明显低于造模组小鼠(t=6.283、5.934、5.553,P<0.05),而HDL-C、ApoA-I显著高于造模组小鼠(t=4.683.5.271,P<0.05),而观察组A与观察组B小鼠并无明显差异(P>0.05);造模组小鼠血清中白细胞介素-1(IL-1)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、细胞间黏附因子1(ICAM-1)、血管细胞黏附因子1(VCAM-1)、单核细胞趋化活性蛋白1(MCP-1)的含量均明显高于空白对照组小鼠(t=9.238、12.156、7.232、15.681、21.164、11.059、13.068、16.329,P<0.05),而观察组A小鼠以上指标均明显低于造模组小鼠(t=7.435、10.182、6.568、13.143、19.642、10.506、12.306、13.132,P<0.05),观察组A与观察组B并无明显差别(P>0.05);而4组小鼠NF-κB的表达水平并无明显变化。结论补五还阳汤可以降低ApoE-/-小鼠的体质量、血脂水平和炎性因子水平,但对NF-κB无影响。

PCSK9干扰慢病毒载体对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响

目的观察PCSK9干扰慢病毒载体（LV—PCSK9RNAi—GFP）对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化病变的影响，并探讨其可能机制。方法6周龄雄性ApoE-/-小鼠30只适应性喂养l周后，随机分为对照组和LV-PCSK9RNAi—GFP组，每组15只，其中LV—PCSK9RNAi—GFP组通过尾静脉注射LV-PCSK9RNAi-GFP，每只鼠注射量为4×10’TU。两组小鼠予以高脂喂养，12周后处死动物，采用荧光显微镜观察LV-PCSK9RNAi-GFP转染情况；实时荧光定量PCR和Westernblotting检测动脉粥样硬化病变处PCSK9表达；

青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化的影响

目的探讨青蒿素对ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化以及炎症因子的影响。方法将20只ApoE-/-基因敲除小鼠分为青蒿素组和PBS处理组,每组10只,经高脂喂养8周,与对照组小鼠(C57BL/6J标准饮食小鼠,10只)比较,通过血管大体油红O染色评价斑块面积;HE染色观察病变形态及血浆中炎症因子的变化。结果与对照组比较,PBS处理组及青蒿素组均可见动脉硬化斑块,炎症因子水平升高。青蒿素组的动脉硬化程度及炎症因子水平均明显低于PBS处理组。结论青蒿素可以改善ApoE-/-基因敲除小鼠动脉粥样硬化进展。

水蛭对非酒精性脂肪肝病小鼠的保护作用及其机制

目的探讨水蛭对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠的保护作用及潜在机制。方法将雄性载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠随机分为模型组和水蛭低、高剂量组(0.45、0.9 g/kg),每组10只;另取同周龄野生型雄性C57BL/6J小鼠10只,作为对照组。对照组小鼠以基础维持饲料喂养,其余各组小鼠以高脂饲料喂养12周以建立NAFLD模型。第13周,各药物组小鼠灌胃相应药液,每天1次,连续8周。末次给药后,测定各组小鼠的体重、肝脏质量,并计算肝脏指数;检测其血清核因子κB(NF-κB)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;观察其肝组织病理形态学变化,并检测肝组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)、沉默信息调节因子1(SIRT1)蛋白的表达情况。结果与对照组比较,模型组小鼠肝组织可见较多的脂肪空泡和炎症细胞浸润,并有明显的脂质堆积;其体重、肝脏质量及肝脏指数和血清NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG、LDL-C水平均显著升高,血清HDL-C水平和肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白的表达水平均显著降低(P<0.01)。与模型组比较,水蛭低、高剂量组小鼠肝组织病理改变均有所缓解;其体重、肝脏质量及肝脏指数和血清NF-κB、TNF-α、IL-1β、IL-6、TC、TG、LDL-C水平均显著降低,血清HDL-C水平和肝组织中PPARγ、SIRT1蛋白的表达水平均显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论水蛭可能通过激活PPARγ、SIRT1蛋白的表达来调节肝脏脂质代谢、抑制炎症反应,从而发挥对NAFLD的改善作用。

调脂方对ApoE-/-小鼠动脉斑块及端粒酶—端粒系统的影响

目的:观察调脂方对动脉粥样硬化(AS)模型小鼠外周血白细胞端粒、端粒酶以及主动脉病变、血脂、炎症指标的影响,探讨其抗AS作用机制。方法: 30只8周龄雄性ApoE -/-小鼠随机分为模型组、阿托伐他汀组、中药干预组,每组10只。另取同周龄雄性C57BL/6小鼠10只做空白对照组。采用高脂饲料喂养方法建立AS模型,空白对照组、模型组小鼠用蒸馏水灌胃,中药干预组灌服中药“调脂方”,阿托伐他汀组阿托伐他汀钙灌胃给药,持续12周。运用生化仪检测脂代谢指标:总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)及炎症指标:超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白介素-6(IL-6);采用油红“O”染色,观察动脉斑块形成及脂质堆积程度;荧光定量聚合酶链反应法检测外周血白细胞及血管细胞的端粒长度及端粒酶活性。结果:与正常空白对照组比较,模型组血清脂代谢指标和炎症指标均明显升高( P <0.01);与模型组比较,阿托伐他汀组和中药干预组均显著降低TC、LDL、HDL、hs-CRP( P <0.01),TG、IL-6( P <0.05);与阿托伐他汀组比较,中药干预组降低TC的作用较弱( P <0.05),而中药干预组在降低TG程度上优于阿托伐他汀组( P <0.05),在降低LDL、hs-CRP、IL-6及升高HDL上无明显差异。主动脉病理油红“O”染色显示模型组AS程度明显,中药干预组和阿托伐他汀组AS程度较模型组明显改善,阿托伐他汀组作用优于中药干预组。模型组外周血白细胞端粒长度明显短于空白对照组、外周血白细胞端粒酶活性低于空白对照组( P <0.05)。与空白对照组比较,中药干预组端粒酶活性、阿托伐他汀组端粒长度、端粒酶活性明显提高( P <0.01),中药干预组与阿托伐他汀组之间外周血白细胞端粒长度及端粒酶活性则无明显统计学差异。结论:调脂方具有抗小鼠AS作用,其机制可能与改善脂代谢、炎症指标及调控端粒长度及端粒酶活性相关。

TR3受体激动剂6-mercaptopurine对糖尿病ApoE-/-小鼠NF-κB p65/CylinD1通路影响及其与抗动脉硬化关系

目的:观察TR3受体激动剂(6-mercaptopurine,6-MP)对链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)诱导的载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE-/-)敲除糖尿病小鼠糖脂代谢及NF-κBp65/CylinD1通路的影响及其与抗动脉硬化的关系,探讨TR3受体在改善糖尿病动脉粥样硬化可能机制。方法:40只雄性ApoE^-/-小鼠随机分为4组:ApoE^-/-组、STZ-ApoE^-/-组、STZ-ApoE^-/-+6-MP5(5mg·kg^-1·d^-1)组、STZ-ApoE^-/-+6-MP10(10mg·kg^-1·d^-1)组,每组10只;6-MP腹腔注射法给药,每天1次,连续8周;STZ60mg/kg腹腔注射ApoE^-/-小鼠建立糖尿病动脉粥样硬化模型,血糖试纸法测血糖水平;酶法或匀相法测血脂水平;蛋白免疫印迹试验(Western-blotting)测胸主动脉组织NF-κBp65/CylinD1蛋白水平;油红O染色观察胸主动脉内膜动脉脂质沉积;HE染色测胸主动脉内膜粥样斑块面积。结果:与ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-组血糖及血清TG、TCHO、LDL-C均显著增高(P<0.05);TR3受体激动剂6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE^-/-小鼠血糖、血脂水平,与STZ-ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组血糖、TG、LDL-C、TC均显著降低(P<0.05),与ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-组胸主动脉NF-κB p65、CylinD1蛋白表达水平均显著增加(P<0.05);6-MP呈剂量依赖性降低糖尿病ApoE^-/-小鼠胸主动脉NF-κB p65/CylinD1蛋白表达,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组NF-κBp65/CylinD1蛋白表达水平均明显低于STZ-ApoE^-/-组(P<0.05);STZ-ApoE^-/-+6-MP10组与STZ-ApoE^-/-+6-MP5组之间胸主动脉NF-κBp65/CylinD1蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。油红O染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性抑制STZ-ApoE^-/-小鼠胸主动脉内膜脂质沉积;HE染色显示:TR3受体激动剂6-MP可呈剂量依赖性降低STZ-ApoE^-/-小鼠胸主动脉内膜斑块面积,减少斑块内部有空洞(脂质)形成,抑制斑块周围组织及斑块基底部平滑肌层增生,与STZ-ApoE^-/-组相比,STZ-ApoE^-/-+6-MP5组胸主动脉内膜斑块面积明显减小(P<0.05),STZ-ApoE^-/-6-MP10组斑块面积进一步减小(P<0.01)。结论:TR3激动剂6-MP可明显降低糖尿病ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化的形成,其机制可能与其改善糖脂代谢,抑制NF-κBp65/CylinD1信号通路有关。