自拟抑癌汤在锁肛痔(直肠癌)术后患者中的应用

目的 观察自拟抑癌汤在锁肛痔(直肠癌)术后患者中的应用效果,并分析其对患者凋亡相关因子、细胞外信号调节激酶(ERK)通路蛋白表达水平的影响。方法 选取2020年3月至2023年1月济源市第二人民医院收治的80例直肠癌术后患者为研究对象,按奇偶数分组法分为观察组和对照组,每组40例。对照组患者术后实施常规辅助化疗,观察组患者于此基础上予以自拟抑癌汤治疗,疗程3个月。疗程结束后比较两组患者的临床疗效、毒副反应,以及治疗前、治疗1、3个月后的中医证候积分、肿瘤标志物[糖类抗原199 (CA199)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原242 (CA242)]、凋亡相关因子[肿瘤抑制基因(p53)、细胞凋亡信号受体(Fas)、肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、细胞周期素E (cyclin E)]及ERK信号通路关键分子[丝裂原活化蛋白激酶(MEK)、细胞外信号调节激酶1/2 (ERK1/2)、Ras、Raf]变化。结果 治疗3个月后,观察组患者的总有效率为75.00%,略高于对照组的62.50%,但差异无统计学意义(P>0.05);治疗1、3个月后,观察组患者的各项中医证候积分明显低于对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05);治疗1个月和3个月后,观察组患者的血清CA199、CA242、CEA、cyclin E、MEK、ERK1/2、Ras、Raf水平均明显低于对照组,而血清p53、Fas、TNF-α水平均明显高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);两组患者治疗期间的各项毒副反应发生率比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 直肠癌术后患者联合应用自拟抑癌汤和辅助化疗具有一定临床疗效及安全性,其可改善患者的临床症状,抑制肿瘤生长,促进肿瘤凋亡,其作用机制可能与调节凋亡相关因子、ERK通路蛋白表达有关。

敲减lncRNA BAIAP2-AS1对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制

目的探讨敲减长链非编码RNA(lncRNA)BAIAP2反义RNA 1(BAIAP2-AS1)对胶质瘤细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其机制。方法体外传代培养胶质瘤细胞系A172、LN229、U251及正常人星形胶质细胞系NHA。取传3代、对数生长期细胞,采用RT-qPCR法检测各细胞中微小RNA-491-5p(miR-491-5p)、BAIAP2-AS1、O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)mRNA表达,选择lncRNA BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA相对表达量变化较显著的胶质瘤细胞进行后续实验。取上述胶质瘤细胞,随机分为空白对照组、BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1 shRNA+NC inhibitor组,BAIAP2-AS1 shRNA组、NC shRNA组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA、NC shRNA,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组、BAIAP2-AS1shRNA+NC inhibitor组分别转染BAIAP2-AS1 shRNA与miR-491-5p inhibitor、BAIAP2-AS1 shRNA与NC inhibitor,空白对照组不予转染。转染48 h,收集细胞,采用MTT法检测细胞活性,采用流式细胞术检测细胞凋亡率,采用细胞划痕实验检测细胞迁移率,采用RT-qPCR法检测BAIAP2-AS1、miR-491-5p、MGMT mRNA表达。采用StarBase在线数据库预测miR-491-5p与BAIAP2-AS1、MGMT的互补位点,并采用双荧光素酶报告基因实验验证其靶向调控关系。结果与NHA细胞比较,A172、LN229、U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低(P均<0.05)。以U251细胞lncRNA BAIAP2-AS1、MGMT mRNA相对表达量较高,miR-491-5p相对表达量较低,故以U251细胞进行后续实验。与空白组、NC shRNA组比较,BAIAP2-AS1 shRNA组细胞活性、细胞迁移率、BAIAP2-AS1、MGMT表达显著降低(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著升高(P均<0.05);与BAIAP2-AS1 shRNA组、BAIAP2-AS1 shRNA+inhibitor NC组比较,BAIAP2-AS1 shRNA+miR-491-5p inhibitor组细胞活性、细胞迁移率、MGMT表达显著增加(P均<0.05),细胞凋亡率及miR-491-5p表达显著降低(P均<0.05)。经StarBase在线数据库预测和双荧光素酶报告基因实验验证,BAIAP2-AS1可靶向调控miR-491-5p表达、miR-491-5p可靶向调控MGMT表达。结论敲减BAIAP2-AS1可通过调节miR-491-5p/MGMT轴抑制胶质瘤细胞增殖、迁移并促进其凋亡。

激酶ULK1对急性T淋巴细胞白血病细胞凋亡作用的研究

目的 探讨ULK1对急性T淋巴细胞白血病细胞株CEM-C7凋亡的影响及与AMPKα/ULK1轴之间的关系。方法 通过予不同浓度ULK1激活剂LYN-1604(0、1.2、2μmol/L)、ULK1抑制剂MRT68921(0、1.2、2μmol/L)干预CEM-C7细胞24 h,流式细胞术检测各药物浓度对CEM-C7细胞株凋亡率的影响,筛选凋亡最明显的药物浓度进行后续实验,Edu及Soft agar实验检测其对CEM-C7细胞株增殖的影响,流式细胞术检测其对CEM-C7细胞株线粒体膜电位的影响,透射电镜观察其对CEM-C7细胞细胞核及线粒体超微结构变化的影响,Western blot检测激活和抑制ULK1后ULK1、p-ULK1(Ser317)、Caspase3、Cleaved-caspase3、Bcl-2、Bax、PCNA、AMPKα、p-AMPKα(Ser172)的表达情况。结果 ULK1抑制剂及激活剂分别干预CEM-C7细胞24 h以后,与对照组相比,ULK1抑制剂可明显促进CEM-C7细胞发生凋亡,抑制CEM-C7细胞增殖,使细胞线粒体的膜电位明显下降,差异均具有统计学意义(P<0.05);透射电镜可观察到明显的细胞凋亡现象;p-ULK1(Ser317)、p-AMPKα(Ser172)的蛋白水平表达下降,而ULK1激活剂对CEM-C7细胞株无明显影响。结论 ULK1可能通过AMPKα/ULK1轴影响其对CEM-C7细胞的凋亡功能。

针刺通过PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路抑制脑缺血-再灌注损伤大鼠的细胞凋亡

目的:利用大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,研究针刺对CIRI模型大鼠脑组织中Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K-Ⅲ)/Beclin-1通路的影响。方法:利用MCAO/R方法制备SD大鼠CIRI模型,分别给予针刺和(或)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行治疗。利用采用Garcia评分法检测大鼠神经功能,TTC染色法检测大鼠脑梗死面积,Western Blot法检测海马组织PI3K-Ⅲ、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:MCAO/R手术后大鼠神经功能评分降低(P<0.01),TTC染色观察到脑梗死,同时海马区PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达显著下调(P<0.01),脑皮质细胞凋亡增多(P<0.01)。针刺治疗不但提高了大鼠神经功能评分(P<0.01),并且减少了脑梗死面积(P<0.01);同时显著上调了海马组织中PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达(P<0.01),并减少了脑细胞凋亡(P<0.01)。3-MA阻断了针刺的治疗作用,而且使脑损伤更加严重。结论:针刺可改善CIRI大鼠神经功能并减轻神经损伤,其机制可能与激活PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路增加细胞自噬并减少细胞凋亡有关。

飞龙掌血通过调控大鼠M1/M2型小胶质细胞极化减轻脑缺血再灌注损伤

目的:观察飞龙掌血(Toddalia asiatica)对脑缺血再灌注损伤(cerebral ischemia-reperfusion injury,CIRI)大鼠的神经功能影响,进一步探讨药物对小胶质细胞M1/M2型极化、Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)/核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)通路的影响及机制。方法:使用改良线栓法来制备大鼠的CIRI模型,并将大鼠随机分为了模型组、飞龙掌血(1.08 g/kg)组、盐酸多奈哌齐(0.45 mg/kg)组及假手术组,每组各16只,在评估各组大鼠神经功能改变的基础上,采用HE和Nissl染色观察脑组织病理变化,使用TUNEL染色法检测脑神经元的凋亡,免疫组化法检测M1型小胶质细胞标志物离子钙结合衔接分子1(ionized calcium-binding adapter molecule 1,Iba1)和M2型小胶质细胞标志物精氨酸酶1(arginase 1,Arg1)以及TLR4的定位表达。通过Western blot检测海马区小胶质细胞极化蛋白以及与TLR4/MyD88/NF-κB通路相关的蛋白表达。结果:与假手术组比,模型组大鼠神经功能评分较高(P<0.01),同时海马CA1区和皮质区神经元排列松散紊乱,尼氏小体减少,脑神经元凋亡增多。M1型小胶质细胞标志物Iba1、M2型小胶质细胞标志物Arg1及TLR4阳性细胞的数量明显增多。此外,海马组织的TLR4、MyD88、p-NF-κB p65、NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制因子(NF-κB inhibitory factor,IκB)、Iba1、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和Arg1的蛋白表达升高(P<0.05),而IL-4和IL-10表达降低(P<0.01)。与模型组相比,飞龙掌血组和盐酸多奈哌齐组Arg1、IL-4和IL-10蛋白表达升高(P<0.05),其余指标均降低(P<0.05)。结论:飞龙掌血对CIRI大鼠具有神经保护作用,可能与调控小胶质细胞M1/M2型极化、抑制TLR4/MyD88/NF-κB介导的炎性通路有关。

肺癌组织中缺氧诱导因子-1α的表达及其与凋亡和增殖的关系

背景与目的:缺氧诱导因子-1(Hypoxiainduciblefactor-1,HIF-1)是调节肿瘤细胞适应缺氧的核转录因子。大量研究证实HIF-1在维持肿瘤细胞的能量代谢、新血管形成及转移起重要作用。但关于HIF-1与肿瘤细胞凋亡、增殖的关系鲜见报道,且结论存在较大差异。本研究旨在探讨缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)在肺癌组织中的表达及其与bcl-2、Bax及PCNA的关系。方法:采用免疫组化SP法检测60例肺癌组织中HIF-1、bcl-2、Bax蛋白及PCNA的表达。结果:60例肺癌组织中HIF-1α阳性表达率为28.3%。其中小细胞肺癌(SCLC)阳性率为66.7%显著高于非小细胞肺癌(NSCLC)的21.5%(P<0.01)。HIF-1α表达水平随临床分期的增高而增加(P<0.01)。bcl-2Bax,PCNA蛋白阳性率分别为31.7%(19/60),40.0%(24/60),76.7%(46/60)。bcl-2的表达与肿瘤细胞的分化程度显著相关(P<0.01)。HIF-1α蛋白表达与bcl-2呈负相关(P<0.01),与Bax蛋白之间显著正相关(P<0.01),但与PCNA无相关性(P>0.05)。结论:HIF-1α与肿瘤细胞凋亡密切相关,但与肿瘤细胞增殖无关。

白花前胡及前胡甲素对心肌缺血再灌注大鼠IL-6水平及Fas、bax、bcl-2蛋白表达的影响

目的:研究中药白花前胡及其有效成分对缺血再灌注心肌IL-6水平及凋亡相关蛋白表达的影响。方法:开胸麻醉大鼠左冠状动脉前降枝经30 min缺血及120 min再灌注;放射免疫法测定血清IL-6水平;免疫组化法和计算机图像分析系统检测心肌Fas,bax及bcl-2蛋白表达;苏木精-依红染色法于光镜下观察嗜中性白细胞浸润。结果:白花前胡粗提物及前胡甲素(Pd-Ia)在降压和不影响心率的情况下,减少IL-6水平及Fas,bax,bcl-2蛋白的表达,增加bcl-2/bax的比率。IL-6水平与Fas,bax,bcl-2蛋白表达之间呈密切的线性正相关,而嗜中性白细胞只有轻微浸润。结论:白花前胡及Pd-Ia在防治缺血后心肌细胞死亡上显现新靶位,原因可能与心肌缺血再灌注期间机体自身调控即早基因IL-6,Fas,bax,bcl-2的表达有关。

高碘对豚鼠脑和甲状腺细胞凋亡影响的实验研究

目的 研究高碘对豚鼠脑和甲状腺细胞凋亡的影响。方法 用高碘水喂养豚鼠复制出高碘甲状腺肿模型 ,采用光镜及透射电镜形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞术 ,分两期观察不同浓度高碘水对大脑皮质、海马和甲状腺细胞凋亡的影响。结果 1高碘可以诱发豚鼠大脑皮质、海马和甲状腺细胞凋亡 ,呈现凋亡形态学及生化特征性改变。2高碘所诱发的大脑皮质、海马和甲状腺组织的细胞凋亡率高低与摄碘量和碘作用时间的长短有关。结论 1高碘可以诱发大脑皮质、海马和甲状腺细胞凋亡。2高碘通过诱发大脑皮质、海马和甲状腺细胞凋亡的发生而对甲状腺及中枢神经系统造成损伤 。

丹参酮抗肿瘤作用及其机理的研究

丹参酮是从活血化瘀中药丹参中提取的脂溶性有效成分,临床主要用于治疗心血管疾病。近年研究表明,丹参酮对多种肿瘤细胞具有细胞毒作用,并可诱导肿瘤细胞分化和凋亡,抑制肿瘤细胞侵袭和转移;其作用机理可能与抑制癌细胞DNA合成,影响肿瘤细胞增殖、分化和凋亡相关的多种基因表达,抑制癌细胞端粒酶活性,改变肿瘤细胞表面抗原表达等有关。

姜黄素对皮层神经元氧化损伤的保护作用

目的 观察姜黄素对第三丁基过氧化氢 (tert butylhy droperoxide,t BHP ,tBHP)诱导的大鼠皮层神经元氧化损伤的影响 ,探讨可能的机制。方法 培养胚胎鼠皮层神经元 ,MTT法测定细胞活力 ,DNA断裂评价细胞凋亡 ,流式细胞术测定线粒体膜电位和细胞内活性氧水平 ,分光光度法测定细胞内谷胱甘肽 (GSH)水平 ,Westernblot法测定Bcl 2和Bax蛋白和胞浆细胞色素C以及活化型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(caspase 3)和多聚 (ADP 核糖 )聚合酶 [poly (ADP ribose)poly merase,PARP]水平。结果 姜黄素 (2 5～ 2 0 μmol·L-1)可有效减少tBHP对神经元的氧化损伤和tBHP引起的细胞内GSH水平降低 ,降低细胞内的活性氧水平 ,增加线粒体膜电位和细胞内GSH以及Bcl 2蛋白水平 ,减少线粒体内细胞色素C向胞浆释放和Bax蛋白表达水平 ,最终明显减少cas pase 3和PARP活化和tBHP引起的神经元凋亡。结论 姜黄素可减弱tBHP对原代皮层神经元的氧化损伤作用 ,其作用可能与降低细胞内的活性氧水平 。

维生素E在体内外具有抗氧化作用

目的探讨维生素E在体内外的应激损伤。方法体外实验:人肝RBL细胞系根据H_2O_2损伤及损伤前后给予维生素E分为4组,对照组(C)、H_2O_2损伤组(Ec)、H_2O_2损伤前(Eb)及后(Ea)给维生素E组;体内实验:将20只清洁级雄性Wistar大鼠分为对照组和大及小剂量维生素E组,每天进行一次35和15 mg/kg溶液2 m L灌胃,连续3 d。体外实验应用MTT和TUNEL法检测细胞存活率和凋亡率,免疫印迹和免疫组化方法检测细胞中NF-κB、Hsp-70、Bcl-2、Bax及caspase-3的表达水平;体内实验应用生化法检测3和6 d后血浆内T-AOC、SOD、GSH和MDA的水平。结果 H_2O_2损伤组(Ec)细胞凋亡率增加(P<0.01),细胞内Bax、Hsp-70、NF-κB及caspase-3显著升高(P<0.01),而Bcl-2显著下降(P<0.01),维生素E干预后能显著缓解上述变化(P<0.01),H_2O_2损伤前干预效果优于后干预。灌胃后3 d血浆中T-AOC、SOD、GSH的水平增高,MDA降低(P<0.01),6 d后其相关指标变化更加显著(P<0.05)。结论维生素E可通过调节人肝RBL细胞相关蛋白表达水平和Wistar大鼠血浆中抗氧化酶体系而发挥抗氧化作用。

脓毒症大鼠Fas-L、Caspase-3和NF-κB的表达与肝细胞凋亡的关系

目的 探讨脓毒症时Fas L、Caspase 3、NF κB在肝细胞凋亡信号转导中的作用。方法 Wistar大鼠 3 0只随机分为观察组和对照组 ,观察组 2 4只采用盲肠结扎穿孔术 (CLP)致脓毒症模型 ,以术后 2h、3h、4h、5h时限分为 4组 ,对照组 6只 ,不行CLP术。各组均测定肝脏组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达及肝细胞凋亡的情况 ,同时测定肝脏功能的变化。结果 CLP术后肝组织Fas L、Caspase 3、NF κB蛋白表达升高与对照组相比有显著差异 ;3h组的Fas L、Caspase 3的含量达高峰 ,4h组的NF κB的含量达高峰 ;血浆中丙氨酸转氨酶 (ALT)、乳酸脱氢酶 (LDH)呈异常改变 ,CLP术后血浆中ALT、LDH增加 ,与对照组相比有显著差异 (P <0 .0 1) ,ALT呈进行性增加 ,LDH以 4h组最显著。肝组织细胞凋亡指数呈进行性增加。结论 由CLP所致的脓毒症过程中 ,肝组织Fas L、Caspase 3蛋白表达升高 ,激活促细胞凋亡的程序 ;NF κB蛋白表达亦升高 ,NF κB活性增强 。

羟氯喹对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响

目的观察羟氯喹(hydroxychloroquine,HCQ)对人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及凋亡的影响。方法采用MTT法及克隆形成抑制实验观察HCQ对人乳腺癌MDAMB-435细胞的增殖抑制作用;采用倒置显微镜观察HCQ处理后细胞形态学变化;采用Hoechst 33258荧光染色检测HCQ对人乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡的作用;采用PI单染流式细胞术检测细胞晚期凋亡水平;采用线粒体膜电位检测试剂盒(JC-1)观察HCQ处理人乳腺癌MDA-MB-435细胞后线粒体膜电位的转变。结果不同浓度的HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435细胞24、48、72 h后,均能明显抑制细胞增殖;在倒置显微镜下可观察到HCQ作用于乳腺癌MDAMB-435细胞后细胞逐渐萎缩变圆,细胞密度变小,失去正常细胞形态;HCQ能明显抑制MDA-MB-435细胞克隆形成;Hoechst 33258荧光染色结果显示,HCQ可以诱导乳腺癌MDA-MB-435细胞凋亡;PI结果显示,20、40、60μmol·L-1HCQ处理细胞24 h后,晚期凋亡率分别为7.1%、15.9%、35.3%(P<0.05);HCQ作用于乳腺癌MDA-MB-435后JC-1从红色荧光到绿色荧光转变(P<0.05)。结论 HCQ可以明显抑制人乳腺癌MDA-MB-435细胞增殖及诱导凋亡。

MK801对大鼠全脑缺血／再灌注ASK1信号通路影响以及神经元的保护

目的探讨MK801(dizocilpine,地佐环平)对全脑缺血/再灌注后神经型一氧化氮合成酶(nNOS)介导的凋亡信号调节激酶1(apoptosis signal-regulating kinase 1,ASK1)信号通路及海马CA1区细胞凋亡的影响。方法采用四动脉结扎法构建大鼠全脑缺血模型。SD大鼠腹腔注射MK801(30mg·kg-1)。通过"生物素转化法"(Biotin-Swich method)检测蛋白质的S-亚硝基化。然后运用免疫印迹、免疫共沉淀和免疫组织化学等方法对蛋白质的磷酸化以及蛋白质之间的相互作用进行研究;应用焦油紫染色的方法检测脑缺血/再灌注后海马CA1区的细胞凋亡情况。结果脑缺血/再灌注引起了ASK1的S-亚硝基化;MK801明显地抑制了脑缺血/再灌注诱导的ASK1的S-亚硝基化的增加;MK801明显降低了Thr845的磷酸化水平、增加了Ser83位的磷酸化水平,从而降低了ASK1的活性;MK801引起ASK1下游MKK4/7-JNK信号通路及下游凋亡的核通路也产生了相应的变化。结论 MK801能够抑制SD大鼠全脑缺血/再灌注引起ASK1的S-亚硝基化,进而影响ASK1凋亡信号通路,对神经元损伤起到保护作用。

大鼠局灶性脑缺血后─氧化氮合酶活性与细胞凋亡关系

目的：了解局灶性脑缺血再灌注过程中一氧化氮合酶（ＮＯＳ ）变化与脑细胞凋亡的关系，探索阻断脑细胞凋亡的时间窗。方法：用线栓 法建立局灶性脑缺血模型，大脑中动脉阻塞（ＭＣＡＯ）的时间分别为１５、３０、６０、９０、１２０ ｍｉｎ ，再灌注２４ ｈ。用还原型尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸脱氢酶（ＮＡＤＰＨ－ｄ）组化法，检测局灶性脑 缺血再灌注后缺血中心区（顶叶皮层和尾壳核）ＮＯＳ活性变化。用苏木精－伊红和ＴＵＮＥＬ染色法 检测缺血中心区脑细胞凋亡情况。结果：ＮＯＳ阳性神经元数于３０ ｍｉｎ时增多 最显著，９０～１２０ ｍｉｎ时急剧减少。各组凋亡细胞数随缺血时间延长而增多。结 论：局灶性脑缺血再灌注过程中神经型ＮＯＳ（ｎＮＯＳ）对缺血早期的脑损伤尤其是细胞 凋亡起主要作用。

金银花对大鼠体内和体外RBL细胞的抗氧化保护作用及其机制

目的:从细胞和分子水平探讨金银花(HS)对机体内外的抗氧化作用及其机制,为金银花的临床应用提供理论依据。方法:体外培养的人肝RBL细胞与0.25g·L-1的金银花共培养前或后加H2O2(氧化剂),应用MTT和TUNEL实验检测细胞生存率和凋亡率,免疫组织化学/免疫印迹检测NF-κB、HSP-70、Bcl-2、Bax及Caspase-3表达水平,检测细胞内抗氧化酶体系的水平。建立金银花大、小剂量灌胃的大鼠动物模型,检测血浆抗氧化酶体系的总抗氧化能力(T-AOC)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱苷肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱苷肽(GSH)、丙二醛(MDA)的水平。结果:金银花对RBL细胞的抗氧化和抗凋亡作用中,前保护(先加金银花,后加H2O2)高于后保护(先加H2O2,后加金银花)的效应;下调NF-κB和HSP-70的表达和Bcl-2/Bax比值,且前保护组凋亡率低于后保护组;同时也上调细胞内抗氧化酶体系的水平。金银花灌胃1～2h后,大鼠血浆中T-AOC、GSH-Px、GSH、SOD含量较灌胃前显著增高(P<0.05),而MDA含量明显减低(P<0.05)。结论:金银花可通过上调体内抗氧化酶体系并下调NF-kB信号传导途径呈现抗氧化、抗凋亡的保护作用。

糖尿病大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白的表达及APP17肽的作用

目的 探讨糖尿病 (DM )大鼠海马神经元存活和凋亡相关蛋白神经生长因子α(NGF)、I抗磷脂酰肌醇 3激酶 (PI 3K)、有丝分裂原活化蛋白激酶 (MAPK)、凋亡诱导因子 (AIF)、细胞色素C和磷酸化 MAPK的表达以及APP17肽的作用。 方法 用链脲佐菌素腹腔注射诱发DM模型 ,并皮下注射APP17肽对DM大鼠进行治疗。 12周后 ,6只大鼠取脑组织行NGF、PI 3K、MAPK和AIF、细胞色素C抗体的免疫组化染色 ;6只取新鲜海马组织匀浆 ,以免疫沉淀并Western印迹方法检测PI 3K及磷酸化MAPK抗体的表达。 结果 DM组大鼠海马CA1区NGF、PI 3K、MAPK表达减少(P <0 0 1) ,AIF、细胞色素C阳性神经细胞增多 (P <0 0 1) ;APP17肽治疗 (DP)组与DM组比较 ,AIF(P <0 0 5 ) ,NGF、PI 3K、MAPK和细胞色素C的表达差异有显著意义 (P <0 0 1) ,接近正常对照(NC)组。Western印迹法显示DM组PI 3K比NC组降低 ,p MAPK的表达 3组无明显区别 ;DP组与DM组比较PI3 K表达增高。 结论 DM大鼠海马神经细胞存在功能异常 ,神经存活和凋亡蛋白的异常改变可能参与DM脑病的发生发展 ;

顺铂处理卵巢癌细胞系OVCAR3引起Survivin表达差异的研究

的 探讨顺铂(DDP)处理卵巢癌细胞系时Sur-vivin表达是否有变化,进而探讨Survivin表达与肿瘤细胞耐药之间的关系及其在肿瘤细胞获得性耐药及细胞凋亡耐受所起的重要作用。方法 以卵巢癌细胞系OVCAR3为材料,用MTT比色法检测细胞活性,流式细胞术检测细胞凋亡。RT-PCR检测Survivin mRNA表达差异,Western blot检测Survivin蛋白表达变化。结果 顺铂抑制卵巢癌细胞生长,具有时间和浓度依赖效应,即随时间延长和浓度增加,细胞生长抑制越强,细胞凋亡率也有同样的趋势,最高达31.6％。1mg·L^(-1)DDP处理卵巢癌细胞,Survivin mRNA及蛋白表达随作用时间的增长,分别在8 h和12 h达最高,随后又降低。结论 抗凋亡蛋白Survivin在卵巢癌细胞系中呈高表达,顺铂处理卵巢癌细胞,Survivin mRNA表达随作用时间延长而增加,这可能是卵巢癌细胞对化疗药物产生耐药性的重要因素之一。

前列腺素E_1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨PGE1对缺氧复氧乳鼠心肌细胞凋亡的影响及其作用机制。方法 用原代培养的乳鼠心肌细胞建立缺氧 3 0min复氧 40min损伤模型 ,DNA琼脂糖凝胶电泳和原位末端标记技术 (TUNEL)检测缺氧复氧乳鼠心肌细胞的凋亡 ,原位杂交法检测bcl 2、baxmRNA的含量。结果 模型组乳鼠心肌细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈明显的梯状图谱 ,TUNEL法检测到较多的阳性标记 ,PGE1各给药组随剂量的增加 ,电泳中的DNA梯状条带逐渐减弱 ,PGE1(0 12 7μmol·L- 1)组心肌细胞的凋亡率 (6 80 %± 1 99% )与模型组 (11 40 %± 2 3 2 % )相比差异有统计学意义 (P <0 0 1) ;模型组与正常组相比bcl 2mRNA的含量下降、baxmRNA的含量增加 ,PGE1各给药组与模型组相比能明显的上调bcl 2mRNA的含量、下调baxmRNA的含量。结论 离体培养的乳鼠心肌细胞建立的缺氧复氧损伤模型可诱导心肌细胞的凋亡。PGE1可明显抑制这种凋亡的发生 ,其机制可能与促进bcl 2mRNA的表达。

胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响

目的探讨胡黄连苷Ⅱ对脑缺血损伤后神经细胞凋亡和超微结构的影响。方法成年健康♂Wistar大鼠60只,应用线栓法建立大鼠脑缺血模型,经腹腔注射胡黄连苷Ⅱ(20 mg·kg-1)干预治疗,改良神经功能评分(m NSS)评价动物神经行为功能,氯化三苯基四氮唑染色观察脑梗死体积,HE染色和透射电镜观察脑组织病理和超微结构,原位末端标记法检测细胞凋亡,免疫组织化学和Western blot检测p-ERK1/2表达水平。结果大鼠脑缺血损伤后表现出神经功能障碍和脑梗死病灶,皮质区神经元和血脑屏障结构损伤较重,皮质区凋亡细胞数量和p-ERK1/2蛋白表达较对照组明显增多(P<0.05)。治疗组大鼠mN SS评分和脑梗死体积较模型组明显降低(P<0.05),皮质区神经元和血脑屏障损伤减轻,凋亡细胞与p-ERK1/2表达水平较模型组明显降低(P<0.05)。结论胡黄连苷Ⅱ可能抑制神经细胞凋亡,改善缺血区脑组织的形态结构,促进大鼠神经行为功能恢复。