桑白皮多糖介导Nrf2/ARE通路减轻慢性低氧环境大鼠心肌损伤的作用

目的 探讨桑白皮多糖对慢性低氧环境所致的大鼠心肌损伤的影响,并观察其介导转录因子NF-E2相关因子(Nrf)2/抗氧化反应元件(ARE)通路的机制。方法 60只7~9周龄SD大鼠采用随机数字表分为对照组、模型组、阿托伐他汀组、桑白皮多糖低、中、高剂量组。除对照组外,其余各组均置于常压低氧舱内构建心肌损伤大鼠模型,对照组呼吸室内空气。自低氧第1天起,阿托伐他汀组给予20 mg/kg阿托伐他汀腹腔注射给药,桑白皮多糖低、中、高剂量组分别给予0.1、0.2、0.4μg/ml桑白皮多糖腹腔注射给药;对照组和模型组仅腹腔注射生理盐水。给药后24 h,苏木素-伊红(HE)染色观察各组心肌组织病变情况;原位末端标记法(TUNEL)检测各组心肌细胞凋亡率;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清血浆肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)水平;检测心肌组织Nrf2、血红素加氧酶(HO)-1、B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA及蛋白、p-Nrf2表达。结果 模型组心肌严重损伤,阿托伐他汀组和桑白皮多糖各剂量组均减轻;与对照组比较,模型组细胞凋亡率、CK、LDH活性和MDA水平、Bax mRNA和蛋白表达和p-Nrf2均明显上升,SOD活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2 mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.05);与模型组比较,阿托伐他汀组和桑白皮多糖各剂量组细胞凋亡率、CK、LDH活性和MDA水平、Bax mRNA和蛋白表达明显下降,SOD活性、Nrf2、HO-1、Bcl-2 mRNA和蛋白、p-Nrf2表达明显升高(P<0.05);桑白皮多糖对上述指标的作用与剂量有关。结论 桑白皮多糖可减轻慢性低氧环境大鼠心肌损伤,可能与激活Nrf2/ARE通路相关。

T2DM患者血清sTWEAK、sCD40L水平与糖尿病微血管并发症的相关性分析

目的 探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清可溶性肿瘤坏死因子(TNF)样凋亡弱诱导因子(sTWEAK)、可溶性CD40配体(sCD40L)水平与糖尿病微血管并发症(DMA)的相关性。方法 选取2021年3月-2023年3月航天中心医院收治的150例T2DM患者为研究对象,根据患者是否合并DMA分为DMA组(n=69)及T2DM组(n=81)。检测并比较两组患者血清sTWEAK、sCD40L水平及临床资料,采用Logistic回归分析影响T2DM并发微血管病变的危险因素,绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析sTWEAK、sCD40L对T2DM并发微血管病变的预测价值。结果 DMA组患者血清sTWEAK、sCD40L水平均高于T2DM组(P<0.05);DMA组的病程、FPG及HbA1c、sTWEAK、sCD40L水平均高于T2DM,差异均有统计学意义(P<0.05);Logistic分析结果显示病程长、HbA1c高水平、sTWEAK高水平及sCD40L高水平均是导致T2DM并发微血管病变的独立危险因素(P<0.05)。ROC结果显示,血清sTWEAK、sCD40L单独及联合预测T2DM并发微血管病变的AUC(95%CI)分别为0.714(0.635~0.785)、0.744(0.666~0.812)、0.859(0.792~0.910),二者联合的预测效能优于单独检测(Z=2.626、2.395,P<0.05)。结论 血清sTWEAK、 sCD40L在DMA患者中均异常升高,与DMA关系密切,sTWEAK、sCD40L联合对于T2DM并发微血管病变的预测价值较高。

AIFM2和MFN2与代谢相关脂肪性肝病患者胰岛素抵抗及进展性肝纤维化相关性的分析

目的探讨线粒体相关凋亡诱导因子2(AIFM2)和线粒体融合素2(MFN2)与代谢相关脂肪性肝病(MAFLD)患者胰岛素抵抗及进展性肝纤维化的相关性。方法选择2020年12月至2022年12月在如皋市人民医院就诊的120例MAFLD患者作为研究对象(设为观察组),另选择同期于该院体检的120名健康体检者纳入研究(设为对照组)。收集2组的一般资料,采集空腹静脉血,测定空腹血糖(FPG)、空腹胰岛素(FINS)、Ⅳ型胶原(CⅣ)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)水平,以及血清AIFM2和MFN2表达水平。应用非酒精性脂肪性肝病纤维化评分(NFS)评估受试者的肝纤维化程度,将NFS≥0.676者纳入进展性肝纤维化组(n=31),将NFS<0.676者纳入非进展性肝纤维化组(n=89)。采用Pearson相关性分析探讨MAFLD患者的血清AIFM2和MFN2表达水平与胰岛素抵抗及肝纤维化指标的关系。采用多因素logistic回归模型分析MAFLD患者发生进展性肝纤维化的危险因素。结果与对照组相比,观察组的平均BMI和平均腰臀比(WHR)均较大,血清AIFM2和MFN2表达水平均较低,血清CⅣ、PCⅢ、LN和HA水平均较高,FPG、FINS水平及稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)均较高,差异均有统计学意义(P均<0.05)。Pearson相关性分析结果显示,MAFLD患者的血清AIFM2和MFN2表达水平均与HOMA-IR呈显著负相关(P均<0.05),血清AIFM2和MFN2表达水平均与血清CⅣ、PCⅢ、LN和HA水平呈显著负相关(P均<0.05)。进展性肝纤维化组的血清AIFM2和MFN2表达水平均显著低于非进展性肝纤维化组,差异均有统计学意义(P均<0.05)。多因素logistic回归模型分析结果显示,WHR、BMI、HOMA-IR、血清AIFM2和MFN2均是MAFLD患者发生进展性肝纤维化的独立危险因素(P均<0.05)。结论MAFLD患者的血清AIFM2和MFN2均呈低表达,且两者均与胰岛素抵抗和进展性肝纤维化密切相关,监测上述指标可为临床诊疗提供有效信息,对改善预后及预防并发症均具有重要意义。

2型糖尿病患者血清PTX3、sTWEAK水平与非酒精性脂肪性肝病的关系研究

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者血清正五聚蛋白3(PTX3)、可溶性肿瘤坏死因子样凋亡弱诱导因子(sTWEAK)水平与非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的关系。方法选取北部战区总医院152例新诊断为T2DM的患者为研究对象,根据是否合并NAFLD将患者分为NAFLD组(92例)和非NAFLD组(60例);根据肝脏超声检查结果,将NAFLD患者分为轻度组、中度组和重度组。另选取35例健康人作为对照(对照组)。采用酶联免疫吸附试验检测血清PTX3、sTWEAK水平。采用Pearson相关分析T2DM患者PTX3和sTWEAK水平与总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、空腹血糖(FPG)、糖化血红蛋白(HbA1c)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)的关系。采用多因素Logistic回归分析T2DM合并NAFLD的影响因素;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析PTX3、sTWEAK对NAFLD的预测价值,计算曲线下面积(AUC)。比较轻度组、中度组、重度组血清PTX3、sTWEAK水平。结果与对照组比较,NAFLD组和非NAFLD组血清PTX3、sTWEAK水平较高(P<0.05)。与非NAFLD组比较,NAFLD组血清PTX3、sTWEAK水平较高(P<0.05)。体质量指数(BMI,OR=3.387)、TG(OR=1.958)、HOMA-IR(OR=3.040)、PTX3(OR=4.836)、sTWEAK(OR=4.133)是T2DM合并NAFLD的影响因素(P<0.05)。T2DM患者血清PTX3水平分别与BMI、LDL-C、FPG、HbA1c、HOMA-IR呈正相关(P<0.05),而与HDL-C呈负相关(P<0.05)。血清sTWEAK水平分别与LDL-C、FPG、HOMA-IR呈正相关(P<0.05)。血清PTX3、sTWEAK预测T2DM患者发生NAFLD的AUC分别为0.873和0.821,二者联合可将AUC提高至0.915。轻度组、中度组、重度组血清PTX3和sTWEAK水平比较,差异有统计学意义(P<0.05),病情越重,患者血清PTX3和sTWEAK水平越高。结论PTX3、sTWEAK是T2DM患者发生NAFLD的影响因素,并且血清PTX3、sTWEAK水平越高,NAFLD病情越重。

凋亡诱导因子2在乳腺癌中的表达及其相关作用

目的 利用生物信息学方法分析凋亡诱导因子2(apoptosis-inducing factor 2,AIFM2)在乳腺癌患者肿瘤组织中的表达及作用机制。方法 检索GEPIA、Kaplan-Meier Plotter、UALCAN数据库中AIFM2的研究信息,分析该基因在乳腺癌中的表达。利用Kaplan-Meier方法分析AIFM2的表达与乳腺癌患者生存及临床病理因素间的关系。同时应用LinkedOmic数据库筛选与AIFM2共同表达的基因,并对靶标基因进行基因本体(Gene Ontology,GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)富集分析,并通过肿瘤免疫评估资源(tumor immune estimate resource,TIMER)数据库探究AIFM2表达与肿瘤组织中免疫细胞浸润的相关性。结果 GEPIA数据库分析发现AIFM2基因在乳腺癌组织中的表达显著低于癌旁组织(P<0.05);Kaplan-Meier Plotter数据库生存分析显示AIFM2基因高表达患者组的无复发生存期、总生存期、远处无转移生存期均显著高于低表达患者组(P<0.05);UALCAN数据库分析显示乳腺癌中AIFM2基因在不同人种、分子分型、组织类型表达水平不同(P<0.05);在不同年龄、性别、分期、TP53突变、围闭经期状态和淋巴结转移中表达水平无差异(P>0.05);LinkedOmic数据库对AIFM2的共表达基因进行GO和KEGG富集分析发现AIFM2可能参与乳腺癌免疫反应的调节;TIMER数据库分析显示乳腺癌中AIFM2的表达水平与CD4^(+)T细胞、中性粒细胞、树突状细胞的浸润正相关(P<0.05);在乳腺癌中低水平的浸润性CD4^(+)T细胞、CD8^(+)T细胞、中性粒细胞和树突状细胞与较差的存活率显著相关(P<0.05)。结论 在乳腺癌中AIFM2的表达与肿瘤组织中免疫细胞浸润有关。AIFM2基因可能成为潜在的乳腺癌免疫治疗靶点。

心肌梗死介入治疗后sTRAIL-R2表达与颈动脉斑块细胞凋亡及炎症反应的相关性

目的探究心肌梗死患者介入治疗后可溶性肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体2(sTRAIL-R2)表达与颈动脉斑块细胞凋亡及炎症反应的相关性。方法选择2021年1月至2022年5月该院收治的心肌梗死行介入治疗后患者102例作为研究对象,对其行颈动脉内膜切除术获取颈动脉斑块片段,根据sTRAIL-R2表达水平分为sTRAIL-R2高表达组和sTRAIL-R2低表达组。检测患者斑块组织Bax、半胱天冬氨酸蛋白酶(Caspase)-8、Caspase-3活性,CD45、CD68表达水平及白细胞介素(IL)-6、IL-10、C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子(TNF)-α和IL-1β水平,检测患者斑块组织细胞凋亡相关蛋白表达并分析sTRAIL-R2表达水平与患者斑块组织细胞凋亡、炎症反应的相关性。结果sTRAIL-R2高表达组患者斑块组织Caspase-8、Caspase-3活性,Bax、Caspase-3蛋白表达水平,CD45、CD68阳性细胞检出数,IL-6、IL-10、CRP、TNF-α、IL-1β水平均高于sTRAIL-R2低表达组,B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白表达水平低于sTRAIL-R2低表达组,差异均有统计学意义(P<0.05)。sTRAIL-R2表达水平与Caspase-8、Caspase-3活性,CD45、CD68、IL-6、IL-10、CRP、TNF-α、IL-1β水平与Bax、Caspase-3蛋白表达水平均呈正相关,与Bcl-2蛋白表达水平呈负相关(P<0.05)。结论sTRAIL-R2高表达可引起颈动脉粥样硬化斑块组织Caspase-8、Caspase-3活性升高,细胞凋亡相关蛋白表达水平上调,并引起斑块炎症反应加剧,可能导致易损斑块出现。

NADH通过SIRT1/Nrf2通路缓解小鼠抗结核药物性肝损伤及凋亡

目的探究烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)通过SIRT1/Nrf2通路调控小鼠抗结核药物性肝损伤和凋亡的机制。方法将24只6周龄SPF级雄性小鼠按体质量随机分成4组:ADLI组[90 mg/(kg·d)异烟肼+135 mg/(kg·d)利福平+315 mg/(kg·d)吡嗪酰胺灌胃]、对照组[与抗结核药物性肝损伤(ADLI)组等体积生理盐水灌胃]、NADH组(对照组基础上应用30 mg/kg NADH灌胃)和NADH干预组(ADLI组基础上应用30 mg/kg NADH灌胃),每组6只,连续灌胃7 d,收集血清和肝组织。qRT-PCR法和Western blot法分别检测SIRT1/Nrf2通路中的沉默信息调节因子1(SIRT1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)和凋亡相关指标B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、人胱天蛋白酶3(caspase-3)的mRNA和蛋白表达情况;HE染色法观察小鼠肝脏组织形态;称取小鼠肝脏质量,将其质量除以体质量获得肝脏指数;微板法检测肝损伤指标谷氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)的水平。结果与对照组相比,ADLI组SIRT1和Nrf2蛋白、mRNA表达水平下降(P<0.05);肝组织结构紊乱,细胞明显肿胀、边界不清;小鼠体质量下降,肝指数上升;抗凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平降低,凋亡因子Bax、caspase-3 mRNA和蛋白表达增强;肝损伤指标ALT、AST、LDH水平升高(P<0.05)。而与ADLI组相比,NADH干预后,SIRT1、Nrf2的mRNA和蛋白表达升高;肝组织结构清晰,细胞呈多边形;抗凋亡因子Bcl-2 mRNA和蛋白表达升高,凋亡因子Bax、caspase-3 mRNA和蛋白水平降低;小鼠体质量上升,肝指数下降;肝损伤指标ALT、AST、LDH表达降低(P<0.05)。结论NADH可能通过调控SIRT1/Nrf2通路缓解小鼠抗结核药物性肝损伤和细胞凋亡。

关节腔积液中沉默信息调节因子2相关酶1和肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子表达与膝骨关节炎的相关性分析

目的:分析关节腔积液中沉默信息调节因子2相关酶1(silencing information regulator 2 related enzyme 1,SIRT1),肿瘤坏死因子样弱凋亡诱导因子(tumor necrosis factor-like weak inducer of apoptosis,TWEAK)表达与膝骨关节炎的相关性。方法:选择2019年2月至2021年8月收治的103例膝骨关节患者(膝骨关节炎组),男40例,女63例,年龄(62.02±6.09)岁。根据改良Mankin评分将患者分为轻度组(Mankin评分1~4分,31例)、中度组(Mankin评分5~8分,40例)和重度组(Mankin评分≥9分,32例),另选择105例体检志愿者为对照组,男46例,女59例,年龄(62.11±6.34)岁。膝骨关节炎组检测关节腔积液和血清中SIRT1、TWEAK水平,对照组仅检测血清SIRT1、TWEAK水平。分析SIRT1、TWEAK与膝骨关节炎发生和病情的关系。结果:膝骨关节炎组关节腔积液TWEAK,血清TWEAK、C反应蛋白(C-reactive protein,CRP)、白细胞介素-6(interleukin,IL-6)、IL-1β、白细胞计数、红细胞沉降率(erythrocyte sedimentation rate,ESR)高于对照组(P<0.05),关节腔积液SIRT1、血清SIRT1低于对照组(P<0.05)。重度组关节腔积液中TWEAK水平高于中度组和轻度组(P<0.05),SIRT1低于中度组和轻度组(P<0.05)。关节腔积液中SIRT1水平与血清SIRT1水平呈正相关(P<0.05),与CRP、IL-6、IL-1β、白细胞计数、改良Mankin评分、ESR呈负相关(P<0.05);关节腔积液中TWEAK水平与血清TWEAK水平呈正相关(P<0.05),与CRP、IL-6、IL-1β、白细胞计数、改良Mankin评分、ESR呈正相关(P<0.05)。身体质量指数、从事重体力工作、关节腔积液TWEAK是膝骨关节炎发生的危险因素(P<0.05),关节腔积液SIRT1是膝骨关节炎发生的保护因素(P<0.05)。关节腔积液SIRT1、TWEAK诊断膝骨关节炎的曲线下面积(area undre curve,AUC)为0.641、0.653,联合关节腔积液SIRT1、TWEAK诊断膝骨关节炎的AUC为0.879,高于单独SIRT1、TWEAK(z=6.105、6.225,P<0.05)。结论:膝骨关节炎患者关节腔积液中SIRT1水平降低,TWEAK水平增高,低SIRT1和高TWEAK与膝骨关节炎发病以及病情加重均有关。

2-DG增强TRAIL诱导白血病细胞HL-60凋亡的作用

本研究旨在探讨2-脱氧葡萄糖(2-DG)增强HL-60细胞对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)敏感性的作用及其可能机制。采用MTT法检测不同浓度2-DG、TRAIL对HL-60细胞增殖的影响。选择低于半数抑制浓度(IC50)的10 mmol/L的2-DG和100 ng/ml的TRAIL单独或联合处理细胞,用PI单染流式细胞术检测细胞凋亡,Western blot检测RIP1、GRP78、PARP蛋白的表达,试剂盒检测caspase-3的活性变化。结果表明,2-DG(10mmol/L)与TRAIL(100 ng/ml)联合作用于HL-60细胞48 h的凋亡率为(45.1±4.3)%,较单用2-DG、TRAIL的凋亡率明显提高(P<0.01),同时二者联合应用能增强GRP78蛋白的表达及caspase-3的活性,下调RIP1蛋白的表达。结论:2-DG能增强TRAIL诱导HL-60细胞的凋亡的敏感性,其机制可能是通过引起过度的内质网应激反应、下调RIP1蛋白的表达以及增加caspase-3的活性。

藤黄酸联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人结肠癌HT-29细胞凋亡的效果和机制

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)能选择性地杀伤肿瘤细胞,但多种肿瘤对其耐药。该研究旨在探讨藤黄酸(gambognic acid,GA)与TRAIL联合对人结肠癌HT-29细胞裸鼠移植瘤生长的影响及GA联合TRAIL抗结肠癌的作用机制。方法:建立人结肠癌HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤模型,测定TRAIL和(或)GA对裸鼠移植瘤的影响,采用H-E染色观察肿瘤组织形态结构改变,TUNEL法检测细胞凋亡状况;HT-29细胞经过siRNA干扰Nrf2表达后,通过AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测细胞凋亡情况,流式细胞术检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)含量,RT-PCR法检测Nrf2、Bcl-2、Bax和DR5 mRNA的表达水平。结果:联合应用GA显著促进了TRAIL对裸鼠皮下移植瘤的生长抑制(抑瘤率达67.0%)和诱导凋亡作用,下调了组织中Nrf2、Bcl-2的表达,增强了Bax和DR5的表达;与阴性对照siRNA相比,Nrf2干扰能明显上调TRAIL诱导HT-29细胞的凋亡率,提高ROS含量,下调Nrf2和Bcl-2表达,上调Bax和DR5表达。结论:GA可能是通过下调Nrf2表达,使ROS水平升高而激活线粒体凋亡途径与死亡受体途径,从而逆转人结肠癌HT-29细胞体内外对TRAIL的耐药性。

阿司匹林增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡

目的:研究阿司匹林能否增强肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)诱导的HepG-2细胞凋亡,并初步探讨其作用机制。方法:HepG-2细胞放入含15%胎牛血清的DMEM培养液中培养,改良苯酚-品红染色观察细胞形态变化,MTT法检测细胞增殖程度,TUNEL法检测细胞凋亡指数,RT-PCR检测细胞中survivinmRNA的表达水平,FCM检测细胞凋亡率和细胞周期。结果:不同浓度的阿司匹林联合TRAIL实验组细胞增殖抑制率明显高于空白对照组及TRAIL和阿司匹林单独用药组,且细胞凋亡指数也明显提高,凋亡率与阿司匹林的浓度呈现剂量依赖关系,联合用药组凋亡相关基因survivin的表达与空白对照组和TRAIL和阿司匹林单用组相比明显下调。结论:阿司匹林能够增强TRAIL诱导的HepG-2细胞凋亡,其作用机制可能与survivin基因的表达下调有关。

色素上皮衍生因子对氧诱导视网膜神经节细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的探讨色素上皮衍生因子(pigment epithelium-derived factor,PEDF)对氧诱导缺血性视网膜病变(oxygen-induced ischemic retinopathy,OIR)小鼠视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡的抑制作用及其可能的机制。方法选择7 d龄C57BL/6J小鼠140只,随机分为正常对照组、OIR模型组、PBS治疗对照组和PEDF药物治疗组。选择右眼为实验眼,将除正常对照组外的所有小鼠建立OIR模型。PEDF药物治疗组分别于小鼠12 d龄和14 d龄给予两次玻璃体内注射PEDF(2μg·μL-1)各1μL,PBS治疗对照组玻璃体内注射等量的PBS(10 mmol·L-1,pH 7.4)。于17 d龄处死小鼠,各组随机抽取5只,摘除右眼球,采用TUNEL法检测视网膜细胞凋亡情况以及免疫荧光染色法检测Bcl-2蛋白在小鼠视网膜中的表达情况;其余小鼠过量麻醉处死后取出视网膜,采用Western blot检测Bcl-2蛋白以及Real-time RT-PCR检测bcl-2 mRNA的表达。结果视网膜细胞的凋亡主要在RGC层,OIR模型组小鼠RGC层细胞凋亡率为(55.044±14.538)%,明显高于正常对照组的(3.317±1.657)%,差异有统计学意义(P<0.01);PBS治疗对照组细胞凋亡率为(55.852±4.490)%,明显高于PEDF药物治疗组的(5.897±2.079)%,差异有统计学意义(P<0.01);正常对照组与PEDF药物治疗组细胞凋亡率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光显示,OIR模型组与PBS治疗对照组Bcl-2蛋白阳性染色较正常对照组明显减少,PEDF药物治疗组阳性染色较PBS治疗对照组增多。Western blot以及RT-PCR结果显示,OIR模型组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量显著下降,分别为0.386 9±0.071 3和0.694 2±0.235 2,与正常对照组的0.778 7±0.097 4和1.000 0比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PEDF药物治疗组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量分别为0.610 1±0.109 5和0.818 3±0.308 0,与PBS治疗对照组的0.284 8±0.153 6和0.481 0±0.100 8比较,差异均有统计学意义(均为P<0.05);PEDF药物治疗组Bcl-2蛋白和mRNA的表达量较正常对照组低,但差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 OIR可引起视网膜细胞凋亡,尤其RGC的凋亡;PEDF可抑制凋亡并诱导视网膜Bcl-2表达上调,提示Bcl-2表达水平上调可能是PEDF发挥神经保护作用的机制之一。

低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响及其机制探讨

目的观察低氧对人喉鳞癌Hep-2细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将体外培养的人喉鳞癌细胞分为常氧组、低氧组。流式细胞仪检测细胞凋亡率,RT-PCR及Western blot法分别检测各组细胞低氧诱导因子α(HIF-1α)、赖氨酰氧化酶(LOX)mRNA及蛋白。结果常氧组细胞凋亡率13.86%±0.12%、低氧组5.13%±0.67%,P<0.05。与常氧组比较,低氧组细胞中HIF-1α、LOX蛋白及其mRNA表达增加(P均<0.05),且二者表达呈正相关(r均为0.862,P均<0.05)。结论低氧可抑制Hep-2细胞凋亡,该作用可能与其上调细胞中HIF-1α、LOX表达有关。

AIF、Bax和Bcl-2在中子及γ射线照射致肠道损伤中的表达

目的探讨AIF、Bax和Bcl-2在中子及γ射线照射致肠道损伤中的表达变化及意义。方法290只BALB/c雄性小鼠,随机分为对照组(24只)、2.5Gy中子照射组(80只)、4.0Gy中子照射组(60只)、5.5Gyγ射线照射组(72只)及12.0Gyγ射线照射组(54只),分别采用5.5和12.0Gyγ射线以及2.5和4.0Gy的中子照射,并于照射后6h,1、2、3、5、10d活杀,取空肠组织,用免疫组织化学和图像分析技术定量分析AIF、Bax及Bcl-2蛋白的表达变化。结果对照组小鼠空肠绒毛及隐窝上皮细胞质AIF呈强阳性,Bax和Bcl-2呈弱阳性。中子和γ射线照射后6h～1d,隐窝细胞核中AIF呈强阳性,表达明显增加(P<0.01);4.0Gy中子照射后Bax强阳性持续至照射后3d,表达明显增加(P<0.01)。5.5、12.0Gyγ射线及2.5Gy中子照射后6h～5d,Bcl-2于上述部位呈强阳性,表达明显增加(P<0.01)。4.0Gy中子照射后6h～3d,Bcl-2于上述部位呈弱阳性,表达无改变(P>0.05)。结论中子及γ射线照射后空肠隐窝上皮细胞核中AIF表达增加,参与了肠上皮细胞凋亡的过程。中子照射时的Bax表达强于γ射线照射时,γ射线照射时的Bcl-2表达强于中子照射时,二者变化规律不同,提示中子和γ射线致肠道损伤具有不同的分子机制。

实验性颅脑损伤鼠垂体前叶HIF-1α、Bcl-2/Bax的表达和细胞凋亡的研究

目的:探讨颅脑损伤后垂体前叶细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、Bcl-2和Bax的表达及细胞凋亡情况。方法:采用Feeney自由落体方法制作大鼠颅脑损伤模型,分别于建模后24、72 h和7 d灌注固定取材,同时设立对照组,免疫组化染色法检测HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达,TUNEL染色法检测细胞凋亡。结果:垂体前叶组织于伤后24 h HIF-1α、Bcl-2和Bax蛋白的表达即有升高,72 h达到高峰,一直持续到伤后7 d,与对照组相比较差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL染色显示凋亡细胞明显增多,且凋亡指数与HIF-1α的表达和Bcl-2/Bax的比值成规律性变化。结论:颅脑损伤后垂体前叶组织HIF-1α、Bc1-2、Bax蛋白的表达增加而诱发细胞凋亡,是颅脑损伤后垂体前叶功能紊乱的重要原因。

缺氧对骨肉瘤细胞系MG-63HIF-1α、p53、bcl-2及细胞凋亡的影响

目的了解缺氧环境对骨肉瘤MG-63细胞缺氧诱导因子HIF-1α、p53、bcl-2的表达及细胞凋亡的影响。方法建立骨肉瘤细胞体外缺氧模型,观察不同缺氧时间段(8、16、24h)HIF-1α、p53、bcl-2的表达和细胞凋亡的情况。半定量RT-PCR方法检测HIF-1α、p53、bcl-2的表达水平;免疫组化(SP法)和免疫印迹(WesternBlot)检测HIF-1α、p53、bcl-2蛋白表达情况;流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果缺氧处理后,HIF-1α转录水平未见明显改变,蛋白表达水平随缺氧时间延长明显增强;而p53、bcl-2mR-NA及蛋白表达水平均显著增强,两者间存在一定的相关性;细胞凋亡率却未见明显增加。结论在缺氧条件下,不能通过以HIF-1α为中介的p53依赖途径来诱导骨肉瘤MG-63细胞的凋亡,其机制可能与缺氧诱导野生型p53的突变或缺失使HIF-1α和bcl-2的过表达有关。

膀胱癌组织HIF-1α与Survivin、Bcl-2表达的关系和意义

目的探讨膀胱癌组织中低氧诱导因子-1α(HIF-1α)、生存素(Survivin)、Bcl-2的表达关系和临床意义。方法对68例膀胱移行细胞癌组织和20例正常膀胱组织石蜡标本进行免疫组化(SP)染色,检测HIF-1α与Survivin、Bcl-2的表达情况。结果膀胱癌组织中HIF-1α、Survivin、Bcl-2与正常膀胱组织相比均明显增强(P<0.05);3种蛋白质表达随病理分级、分期的升高而升高(P<0.05);复发膀胱癌组织中HIF-1α、Survivin表达较初发膀胱癌组织增强(P<0.05);相关分析显示,HIF-1α与Survivin、HIF-1α与Bcl-2表达均存在正相关关系(r=0.4486,0.3428,0.2016,P<0.05)。结论 HIF-1α在膀胱癌组织中表达增强,且随肿瘤进展表达进一步升高;其机制在于HIF-1α可能通过调节Survivin、Bcl-2表达而增强膀胱癌细胞的抗凋亡能力促进膀胱癌进展。

五味子乙素对HK-2细胞缺氧损伤的保护作用

目的探讨五味子乙素(Sch B)对氯化钴(Co Cl2)诱导的人类近端肾小管上皮(HK-2)细胞缺氧损伤的保护作用及其可能机制。方法取离体培养HK-2细胞,随机分为4组。对照(C)组:细胞未经任何处理。Co Cl2组(化学乏氧组):加入600μmol/L的Co Cl2处理24 h。Sch B预保护(Co Cl2+Sch B)组:分别加入终浓度为1μmol/L和10μmol/L Sch B预处理2 h后,其余操作同CoCl2组。Sch B组:分别加入终浓度1μmol/L和10μmol/L Sch B处理2h。CCK-8试剂盒检测各组细胞活性;Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;Western Blot检测各组缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)蛋白表达;RT-PCR检测各组HIF-1α和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达。结果与对照组相比,CoCl2组细胞活性明显降低,细胞凋亡率、HIF-1α蛋白表达量和iNOS mRNA表达量显著增加,HIF-1αm RNA表达量差异无统计学意义;Sch B预保护组较CoCl2组细胞活性显著增加,细胞凋亡率、HIF-1α蛋白表达量、HIF-1α及iNOSmRNA表达量均显著减少;Sch B组与对照组细胞活性、细胞凋亡率差异无统计学意义,Sch B组几乎不表达HIF-1α蛋白。结论 Sch B可能通过抑制HIF-1α蛋白和iNOSmRNA的表达减少HK-2细胞的凋亡,从而对HK-2细胞缺氧损伤起保护作用。

卵丘细胞上AIFM2和FDX1的表达及其与小鼠卵母细胞成熟的关系

目的检测小鼠卵母细胞体外、体内成熟过程中卵丘细胞(CCs)上线粒体相关凋亡因子2(AIFM2)和铁氧化还原蛋白1(FDX1)的表达,探讨其在卵母细胞成熟中的作用。方法从3周龄ICR雌性小鼠获取体内成熟卵丘-卵母细胞复合体(IVV-COCs)以及GV期卵丘-卵母细胞复合体(GV-COCs),并将GV期体外培养至MⅡ期卵丘-卵母细胞复合体(IVMCOCs)。收集对应的CCs,分成GV-CCs、IVM-CCs和IVV-CCs 3组。实时定量逆转录聚合酶链反应检测AIFM2和FDX1mRNA水平的表达,以GAPDH为参照;激光共聚焦免疫荧光技术观察COCs的AIFM2和FDX1的亚细胞定位。结果IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2mRNA相对表达量[分别为(0.72±0.01)和(0.67±0.02)]显著高于GV-CCs组[(0.10±0.06)](P<0.01);同样,IVM-CCs和IVV-CCs的FDX1mRNA相对表达量[分别为(1.58±0.35)和(1.82±0.34)]也显著高于GV-CCs组[(0.10±0.03)](P<0.01);而IVM-CCs和IVV-CCs的AIFM2和FDX1表达水平均无显著性差异(P>0.05)。免疫荧光显示,AIFM2和FDX1主要定位于CCs胞质中,在GV-COCs中各层均有表达,且GV期卵母细胞中也有表达;IVMCOCs和IVV-COCs中表达阳性的细胞数目较GV期增加。结论卵母细胞成熟后,其CCs上AIFM2和FDX1的表达升高,表明AIFM2和FDX1参与了卵母细胞成熟过程,有望作为预测卵母细胞成熟的生物标记物。

柠檬苦素调控Tiam1基因表达影响人体血管瘤内皮细胞VEGF/VEGFR2通路及诱导其凋亡的机制研究

目的:研究柠檬苦素Toonaciliatin A对血管瘤内皮细胞(HemEC)增殖、凋亡的影响及潜在作用机制。方法:胶原蛋白酶A分离HemEC细胞,MTT法测定不同浓度Toonaciliatin A对HemEC细胞生存率的影响,流式细胞术测定HemEC细胞凋亡率,Western blot检测蛋白表达,qRT-PCR检测RNA的表达。结果:Toonaciliatin A能够抑制HemEC增殖,促进HemEC细胞凋亡;Toonaciliatin A抑制Tiam1蛋白表达,过表达Tiam1逆转了Toonaciliatin A对HemEC的抑制作用;Toonaciliatin A能够抑制VEGF和VEGFR2蛋白表达,过表达Tiam1逆转了Toonaciliatin A对VEGF和VEGFR2蛋白表达的抑制作用。结论:柠檬苦素类似物Toonaciliatin A通过靶向Tiam1基因抑制VEGF/VEGFR2通路抑制HemEC细胞增殖,促进细胞凋亡。