Fas/FasL与氧自由基在肺纤维化大鼠细胞凋亡中的作用研究

目的探讨肺纤维化大鼠肺组织中Fas/FasL介导的细胞凋亡与氧自由基的关系。方法将32只大鼠分为3组:对照组(16只)、模型7d组(8只)及模型28d组(8只),测定博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织的细胞凋亡率、Fas/FasL表达和丙二醛(MDA)的含量。结果模型7d组肺组织细胞凋亡增加,Fas/FasL表达增高(P<0.01),28d组细胞凋亡、Fas/FasL表达升高更为明显;模型7d组肺组织中MDA含量明显增加(P<0.01),28d组MDA含量下降但仍高于对照组(P<0.05)。结论肺纤维化大鼠细胞凋亡和氧自由基增加;Fas/FasL系统与氧自由基在大鼠肺纤维化中起着重要作用。

阻断白介素-17对博来霉素诱导小鼠肺纤维化及肺组织Fas/FasL表达的影响

目的 :探讨阻断白介素-17(interleukin-17,IL-17)对博来霉素(bleomycin,BLM)诱导小鼠肺纤维化、细胞凋亡和肺组织Fas/FasL表达的影响。方法 :80只C57BL/6小鼠随机分为4组,分别为假手术组(SG)、BLM组(BG)、中和抗体组(NG)和抗体对照组(IG),经小鼠气管内一次性注入BLM诱导肺纤维化的形成,假手术组则给予等量生理盐水。NG和IG小鼠分别从造模前1天每隔3 d通过尾静脉给予抗鼠IL-17单克隆中和抗体或同型对照抗体,SG和BG则给予等量PBS。于造模后28d,处死各组小鼠,取肺组织,通过Masson染色及羟脯氨酸含量测定评价各组小鼠肺纤维化程度,用流式细胞仪和免疫组织化学法分别检测肺组织细胞凋亡和Fas/FasL的表达情况。结果:与BG和IG相比,NG小鼠肺纤维化程度明显减弱(P<0.01),羟脯氨酸含量显著下降(P<0.01),细胞凋亡率和Fas/FasL表达亦显著降低(P<0.01)。结论:内源性IL-17被阻断后,能显著改善BLM诱导的肺纤维化,降低细胞凋亡率和Fas/FasL表达,表明阻断IL-17对BLM诱导的小鼠纤维化改善与Fas/FasL凋亡通路有关。

肺气虚证模型大鼠肺组织细胞凋亡及Fas、FasL蛋白表达变化

目的 :探讨肺气虚证细胞凋亡机制。方法 :用两次气管内注入脂多糖 (LPS)及熏香烟 4周的复合刺激法复制肺气虚证大鼠模型 ,4周后对两组动物进行电镜观察和免疫组化检测。结果 :与对照组比较 ,模型组可见肺组织细胞凋亡明显增加 ,Fas、FasL蛋白在肺组织中的表达明显上调。结论 :Fas、FasL可能参与了肺气虚的发病及肺组织细胞凋亡的调控。

特发性肺纤维化患者支气管/肺泡上皮细胞凋亡和Fas/FasL基因表达

目的:检测细胞凋亡、Fas/FasL mRNA及其蛋白在特发性肺纤维化患者肺泡/支气管上皮细胞的表达,探讨细胞凋亡和促凋亡信号在此疾病中的意义。方法:应用末端原位杂交(TUNEL)、原位杂交、免疫组化技术,对12例特发性肺纤维化患者的肺活检组织(IPF组)及10例正常肺组织(对照组)检测了细胞凋亡、Fas/FasL mRNA及其蛋白表达的变化。结果:特发性肺纤维化组肺泡/支气管上皮细胞凋亡指数上调,明显高于对照组(P<0.01);IPF组肺泡/支气管上皮细胞中Fas/FasL mRNA及其蛋白表达上调,高于对照组(P<0.01);IPF组肺泡/支气管上皮细胞凋亡指数与其Fas/FasL mRNA及蛋白表达之间均无明显相关(P>0.05)。结论:肺纤维化时肺泡/支气管上皮细胞凋亡上调,Fas/FasL mRNA及其蛋白表达增强,在肺纤维化发生、发展中起重要作用。

COPD患者营养不良与T淋巴细胞凋亡及其表面Fas、FasL、Bcl-2表达的关系

目的探讨COPD患者营养不良对T淋巴细胞亚群CD4+、CD8+T细胞凋亡及其细胞表面Fas、FasL、Bcl-2抗原表达的影响。方法选取COPD稳定期患者30例,正常对照组20例,流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群细胞凋亡率、及其表面Fas、FasL、Bcl-2抗原表达水平,测定体质指数、三头肌皮皱厚度等指标评估营养状况。用单因素方差分析进行统计。结果 :1.COPD患者外周血中CD4+的凋亡及其表面Fas、FasL抗原表达均较对照组增加,营养不良组又高于营养正常组,而其表面Bcl-2的抗原表达降低。COPD稳定期患者血清CD4+凋亡及其表面CD4+Fas、CD4+FasL的表达均与体质指数负相关,而CD4+Bcl-2与体质指数则呈正相关。结论营养不良促进COPD患者CD4+T淋巴细胞的凋亡,可能是通过Fas/FasL,Bcl-2发挥作用。

兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas/FasL表达的变化

目的:观察兔肺动脉栓塞/再灌注损伤中肺泡细胞凋亡及其Fas及FasL蛋白表达的变化,探讨肺损伤的可能机制。方法:健康新西兰白兔30只,雌雄不拘,运用5F Berman球囊堵塞左下肺动脉,然后球囊放气,复制肺动脉栓塞缺血再灌注模型,随机分为5组(n=6):假手术组,肺动脉栓塞1 h组、肺动脉栓塞2 h组,肺动脉栓塞2 h再灌注1 h组、肺动脉栓塞2 h再灌注2 h组;另设6只正常未手术白兔为对照组。实验结束取肺组织,测定肺组织湿/干重比,采用流式细胞分析法检测肺组织细胞凋亡率,免疫组织化学法检测肺上皮细胞Fas及FasL蛋白表达的变化。结果:与对照组、假手术组相比,肺动脉栓塞1、2 h组兔肺组织细胞凋亡率明显增加,再灌注后凋亡细胞进一步增多,并随着再灌注时间延长而逐渐增多(P<0.05或0.01);Fas及FasL蛋白表达在肺动脉栓塞及再灌注后明显上调(P均<0.01)。肺泡上皮细胞凋亡指数与肺组织湿干比、Fas及FasL蛋白表达呈显著正相关(r分别为0.769,0.820,0.820;P<0.01)。结论:肺动脉栓塞缺血/再灌注可能通过激活Fas/FasL系统,诱导肺组织细胞凋亡,从而导致肺损伤的发生。

祛风活血丸对EAU大鼠模型Fas／FasL表达的影响

目的探讨祛风活血丸对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠血清Fas、FasL水平的影响。方法将70只Lewis大鼠随机分为空白组(A组),模型对照组(B组),阳性对照组(C组),以及祛风活血丸低、中、高剂量组(D、E、F组)。采用大鼠右后足垫注射含IRBP(光感受器间维生素A类结合蛋白)的PBS溶液+完全弗氏佐剂制作EAU模型,A组大鼠注射无菌生理盐水。造模后各组大鼠灌胃给药,A、B组予生理盐水,C组予熊胆开明片,D、E、F组分别予低、中、高剂量的祛风活血丸。观察大鼠眼部情况变化,并采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测给药后第7天、14天、21天、28天时各组大鼠的Fas、FasL血清浓度。结果 1.成功诱发Lewis大鼠的EAU模型,在免疫后不同时间发生临床可见的炎症,造模成功率91.7%(55/60),空白组大鼠无临床可见葡萄膜炎表现。2.空白组各时间点的Fas、FasL血清浓度始终位于较低水平,模型对照组各时间点的Fas、FasL水平均为最高,明显高于空白组(P<0.01),并有随时间延长逐渐下降的趋势。中、高剂量组各时间点的Fas、FasL水平较为接近,低于同期低剂量组及阳性对照组,与模型组比较下降更为明显(P<0.05)。结论Fas/FasL介导的细胞凋亡对EAU发病具有重要意义,祛风活血丸能使大鼠血清中Fas、Fas L含量明显降低。

冠心合剂对大鼠心肌梗死心功能、边缘区凋亡及对Fas、FasL蛋白表达的影响

目的观察不同剂量冠心合剂对大鼠急性心肌梗死边缘区细胞凋亡及探讨可能作用途径。方法取雄性SD大鼠80只,随机分为模型组、冠心合剂高剂量组[28 g/(kg.d)]、中剂量组[14 g/(kg.d)]、低剂量组[7 g/(kg.d)]和对照组。连续灌胃7 d后,结扎冠状动脉左前降支造成急性心肌梗死模型,对照组不结扎冠状动脉左前降支,手术后4.5 h留取心脏标本。检测心功能、梗死边缘区细胞凋亡以及Fas、FasL蛋白表达量。结果与模型组比较,冠心合剂组可明显提高梗死大鼠心功能、减少心肌细胞凋亡,并能减少Fas、FasL的蛋白表达量。其中冠心合剂大剂量组减少心肌细胞凋亡效果最明显。结论冠心合剂能够提高梗死大鼠心功能、保护缺血诱导的心肌细胞凋亡,其作用机制与降低Fas、FasL蛋白表达水平有关。

Fas-FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8在老年慢性阻塞性肺疾病发病机理中的作用

目的探讨Fas/FasL和TNF-α介导的细胞凋亡及IL-8的分泌在老年慢性阻塞性肺疾病(COPD)发病机制中的作用。方法对40例老年COPD患者发作期与缓解期及30例健康老人(对照组)外周血可溶性Fas、TNF-α及IL-8水平的观察。结果发现COPD外周血中可溶性Fas、TNF-α及IL-8均高于健康对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01)。结论Fas和TNF-α介导老年COPD患者的免疫细胞凋亡,Fas/FasL刺激IL-8的分泌,在老年COPD发病及其发生发展进程中起重要作用。

Fas信号转导与肺间质纤维化

Fas为Ⅰ型跨膜蛋白,属于肿瘤坏死因子受体(TNFR)/神经生长因子受体(NGFR)超家族,Fas与其配体FasL或竞争性抗体相交联而诱导细胞凋亡,Fas信号转导及调节机制在维持机体自身平衡及许多疾病的发生中发挥着重要作用。近年来的研究证实,Fas信号转导及调节机制在肺间质纤维化中也起关键作用,对这一机制的认识可能为肺间质纤维化的治疗开辟新的方向。

实验性肺纤维化细胞凋亡及Fas/FasL基因变化

目的 检测肺纤维化时细胞凋亡及Fas/FasL基因的变化,探讨细胞凋亡和基因变化在肺间质纤维化中的意义。方法 将 40只大鼠分为肺纤维化组及正常对照组,每组 20只,应用末端原位杂交(TUNEL)、原位杂交、免疫组化技术检测博莱霉素致肺间质纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、Fas/FasLmRNA水平及蛋白表达的变化。结果 肺纤维化组大鼠肺组织中细胞凋亡指数为 55.3±12.2,对照组为 4 7±1 0,两组比较差异有统计学意义(t=13.06,P<0 .01),Fas及FasLmRNA肺纤维化组为(175.8±21.6, 5.2±1.6),正常对照组为 (26.6±1.9, 0.5±0.4),两组比较差异有统计学意义 (t分别为 21.7, 8.79;P均<0.01),肺纤维化组Fas、FasL蛋白表达分别为 956±96, 285±76,正常对照组分别为 491±96, 100±18,两组比较差异有统计学意义 (t=5.03, 12.81;P<0.01)。结论 肺间质纤维化时肺组织细胞凋亡上调,Fas/FasL基因上调蛋白表达增强,在肺纤维化发生、发展中起到重要的作用。

补肺健脾方对COPD大鼠骨骼肌Fas、FasL、Bcl-2及Bax表达的影响

目的:观察补肺健脾方对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠骨骼肌细胞Fas、FasL、Bcl-2、Bax表达的影响。方法:SD大鼠48只随机分为对照组、模型组、补肺健脾组和氨茶碱组,每组12只。采用香烟暴露联合细菌感染法制备COPD稳定期大鼠模型。自第9周起,对照组和模型组均给予0.9%氯化钠溶液灌胃,其余2组分别给予补肺健脾方及氨茶碱治疗,第20周结束时取材。采用荧光定量PCR和Western blot技术观察股四头肌、肱二头肌、肋间肌和比目鱼肌Fas、FasL、Bcl-2、Bax mRNA和蛋白表达。结果:模型组4种肌肉Fas、FasL、Bax mRNA和蛋白表达均较对照组显著升高(P<0.01),Bcl-2表达均较对照组显著降低(P<0.01)。补肺健脾组和氨茶碱组Fas、FasL、Bax mRNA和蛋白表达均较模型组显著降低,Bcl-2表达升高(P<0.01),补肺健脾组较氨茶碱组为优(P<0.05,P<0.01)。结论:补肺健脾方可通过显著下调Fas、FasL和Bax表达,上调Bcl-2,改善COPD大鼠骨骼肌凋亡。

肺缺血-再灌注损伤时Fas/FasL蛋白表达的变化及葛根素干预

目的探讨肺缺血-再灌注损伤(PIRI)时Fas/FasL蛋白表达的变化及葛根素(Pue)的干预。方法采用在体兔单肺原位PIRI模型。实验兔90只,随机分为假手术对照组(sham,30只)、PIRI组(30只)和Pue组(30只)。每组又分为再灌注1,3,5 h 3个亚组,每个亚组10只,分别于再灌注1,3,5 h 3个时间点取左肺组织,观察Fas/FasL蛋白的表达、凋亡指数(AI)、肺损伤组织学定量评价指标(IQA)及光镜、电镜下的组织形态学改变。结果PIRI 1、3、5 h,Pue组Fas/FasL mRNA在肺小动脉内(外)膜、肺小静脉内膜、肺泡上皮及肺支气管上皮呈弱阳性表达,明显低于同一时间点PIRI组(P<0.05);AI和IQA值显著低于PIRI组(P<0.01和P<0.05);肺组织形态学异常改变不同程度减轻。结论Pue可下调肺组织Fas/FasL蛋白的表达而减轻细胞凋亡,对PIRI发挥积极的防治作用。

COPD患者血清IL-18和sFas/sFasL的水平及意义

目的 研究慢性阻塞性肺疾病 (COPD)患者血清白细胞介素 18(IL -18)和可溶性Fas/可溶性Fas配体 (sFas/sFasL)的变化及相关性 ,探讨它们在COPD发病机制中的作用及意义。方法 用ELISA法检测 3 6例COPD急性加重期患者、2 0例健康对照者血清IL -18和sFas/sFasL的水平。结果 COPD患者血清sFasL及IL -18水平显著低于健康对照组 ,而sFas与对照组比较无显著性差异。结论 COPD急性加重期sFasL水平低下 ,提示COPD患者存在细胞凋亡水平下降 ,而IL -18水平下降可能提示其抗感染免疫不足 。

灯盏花素对实验性肺纤维化大鼠的干预作用

目的探讨灯盏花素对博莱霉素致肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡、Fas/FasL表达以及氧自由基的影响。方法48只大鼠随机分为对照组(16只)、模型组(16只)以及灯盏花素组(16只),气管内注入博莱霉素复制大鼠肺纤维化模型,次日灯盏花素组每日腹腔内注射灯盏花素注射液10mg.kg-1,于d7及d28每组分别处死8只大鼠,运用流式细胞仪测定肺纤维化大鼠肺组织细胞凋亡率、Fas/FasL表达,用TAB法测定肺组织匀浆丙二醛含量以及肺组织匀浆羟脯氨酸含量。结果炎症期和纤维化期大鼠肺组织细胞凋亡率增加,Fas/FasL表达增多,丙二醛及羟脯氨酸含量增高(P<0.01),而灯盏花素能明显降低肺组织的凋亡率,降低丙二醛及羟脯氨酸含量,下调Fas/Fasl的阳性表达。结论灯盏花素能减慢肺间质纤维化的进程,对肺间质纤维化有一定的保护作用。

胰岛素样生长因子对COPD大鼠膈肌凋亡的保护作用及对肺功能的影响

目的探讨重组的人胰岛素样生长因子1(rhIGF-1)对COPD大鼠膈肌凋亡的保护作用,并观察其对肺功能的影响。方法45只雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和干预组,每组15只。模型组和干预组大鼠置于烟雾浓度为5%的密闭熏箱内(每天30 min,共28 d),第1 d和第14 d向气管内注射脂多糖200μg。干预组大鼠同时每日皮下注射rhIGF-1(60μg/100 g)1次,持续28 d。对照组不予特殊处理。第1、14、28 d各组随机取5只大鼠处死,测定各组离体膈肌的重量、细胞凋亡率、膈肌中Fas基因及蛋白表达水平。第28 d处死前测定各组大鼠的肺功能。结果28 d后模型组和干预组大鼠分钟呼气量(VE)、最大呼气流速(PEF)、深吸气量(IC)、第0.3 s用力呼气容积(FEV0.3)及膈肌质量均较对照组下降(P<0.05)。干预组膈肌质量、IC及VE值高于模型组(P均<0.05),PEF和FEV0.3与模型组比较无显著差异(P>0.05)。第14和28 d,干预组膈肌细胞凋亡率、Fas基因及蛋白表达均低于模型组(P均<0.05),仍高于对照组(P均<0.05)。结论Fas/FasL介导的凋亡途径参与了膈肌凋亡的发生,rhIGF-1可能通过干预Fas/FasL途径减少膈肌凋亡,在一定程度上改善COPD大鼠的VE和IC值。