花生仁含有丰富的营养物质,是常见的营养食品,但是花生仁内也含有很多致敏蛋白质,它们可以与过敏患者血清中的IgE抗体结合,引起IgE介导的过敏反应,最终导致机体生理功能的紊乱或组织损伤。Ara h 1(Arachishypogaea allergy 1)、Ara h 2...花生仁含有丰富的营养物质,是常见的营养食品,但是花生仁内也含有很多致敏蛋白质,它们可以与过敏患者血清中的IgE抗体结合,引起IgE介导的过敏反应,最终导致机体生理功能的紊乱或组织损伤。Ara h 1(Arachishypogaea allergy 1)、Ara h 2和Ara h 3被认为是主要的花生致敏原,其热稳定性强,不易被蛋白酶彻底消化。致敏原含有的IgE抗体结合表位是其引发机体过敏反应的物质基础。人类食用花生而引发的过敏症因其潜在的危险性、长期性而日益受到关注。本文对近几年来国内外在这三种主要致敏原的理化性质、结构特点、基因表达模式、免疫学特性和功能方面取得的研究成果进行了全面综述,并对其今后的研究方向提出了展望。展开更多
目的:研制低致敏复合乳酸菌发酵花生乳。方法:利用试剂盒测定不同品种花生中的粗蛋白含量及Ara h 1含量,选取Ara h 1含量最低的花生品种制作发酵乳;以接菌量、接菌种类、发酵时间及糖添加量为考察因素,Ara h 1含量为测定结果,采用响应...目的:研制低致敏复合乳酸菌发酵花生乳。方法:利用试剂盒测定不同品种花生中的粗蛋白含量及Ara h 1含量,选取Ara h 1含量最低的花生品种制作发酵乳;以接菌量、接菌种类、发酵时间及糖添加量为考察因素,Ara h 1含量为测定结果,采用响应面法优化致敏蛋白Ara h 1含量下降最多的发酵花生乳制备工艺;制作复合益生菌发酵花生乳,并对产品的口感、组织状态和风味进行感官评价。结果:当接菌量为4%、接种嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌、发酵4 h、糖添加量为6%时,发酵花生乳中的主要过敏原Ara h 1减少70%,含量为48μg/g,且感官评分达到80分。结论:经工艺优化获得了致敏蛋白Ara h 1含量低,凝乳效果好,口味怡人的复合益生菌发酵花生制品。展开更多
Ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一。目前提纯Ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高。本文中,将带有6×his标签的Ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)...Ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一。目前提纯Ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高。本文中,将带有6×his标签的Ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导使其表达目标蛋白。菌体裂解后使用Ni-NTA吸附、梯度洗脱对Ara h 1进行纯化。采用质谱及Western-blot鉴定纯化蛋白的种类及免疫活性。结果显示,质粒中目标基因的序列与NCBI数据库中Ara h 1的基因数据相符;300 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷22℃诱导菌液22 h时蛋白表达量最高;添加15 mmol/L十二烷基磺酸钠可将蛋白释放到上清液中,使用含50,100 mmol/L咪唑的洗脱液分别洗脱2次和1次后得到纯度较高且免疫原性良好的重组Ara h 1。展开更多
为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测...为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10000稀释和1∶8000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4~256 ng/mL,检测限为4.16 ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%~94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90 d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。展开更多
为研究烘焙对花生过敏原Ara h 1潜在致敏性的影响,采用高离液序列盐溶液从鲜花生和烘焙花生中提取总蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析烘焙前后蛋白条带变化情况,并对其中的花生主要过敏蛋白Ara h 1条带进行质谱和Swiss-M...为研究烘焙对花生过敏原Ara h 1潜在致敏性的影响,采用高离液序列盐溶液从鲜花生和烘焙花生中提取总蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析烘焙前后蛋白条带变化情况,并对其中的花生主要过敏蛋白Ara h 1条带进行质谱和Swiss-Model模型分析。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,烘焙花生蛋白出现了大分子聚合物条带以及较多弥散状蛋白条带,说明烘焙过程中蛋白质会发生聚集,同时也可能发生降解。对鲜花生Ara h 1条带的质谱分析结果显示,检测出70条肽段,覆盖率达到79.2%;而烘焙后其中40条肽段未能检出,但新增1条肽段,且覆盖率降至43.9%。全部71个肽段涉及到Ara h 1的18个过敏原线性表位,酶解后鲜花生中检出16个过敏原线性表位被破坏,烘焙花生中仅发现12个被破坏。结论:烘焙加工会破坏蛋白质高级结构,掩盖了部分酶切位点,减少了酶解对过敏原线性表位的破坏,这可能是导致烘焙加工后Ara h 1致敏性强于未加工样品的原因。展开更多
花生过敏由于其高致敏率和致敏严重性而引起了人们的广泛关注。Ara h 1是花生中的主要过敏原,属于Cupin超家族,通过抗原表位识别结合免疫球蛋白E引发花生过敏。本研究采用生物信息学分析花生主要过敏原Cupin超家族Ara h 1线性B细胞表位...花生过敏由于其高致敏率和致敏严重性而引起了人们的广泛关注。Ara h 1是花生中的主要过敏原,属于Cupin超家族,通过抗原表位识别结合免疫球蛋白E引发花生过敏。本研究采用生物信息学分析花生主要过敏原Cupin超家族Ara h 1线性B细胞表位氨基酸组成,及其与Ara h 1二级、三级结构之间关系,通过质谱分析Ara h 1氨基酸序列中的抗消化肽段,并分析抗消化肽段与预测线性B细胞表位的关系。结果表明,Ara h 1的线性B细胞表位富含亲水性氨基酸和带电氨基酸;其二级结构没有明显的分布规律,具有一定的回转折叠结构;分析Ara h 1三级结构发现,表位主要位于单体之间的疏水相互作用区域,部分表位埋入三聚体构象内部;Ara h 1抗消化序列与表位之间存在部分重叠。综上,质谱检测体外模拟胃肠道消化肽段并结合表位生物信息学分析可以作为鉴定Cupin超家族线性B细胞表位的新方法。展开更多
Despite being known as resistant proteins, peanut allergens (Ara h 1 and Ara h 2) can be digested and cause allergic reactions. Making the allergens more resistant to digestion may aid in non-absorption and excretion ...Despite being known as resistant proteins, peanut allergens (Ara h 1 and Ara h 2) can be digested and cause allergic reactions. Making the allergens more resistant to digestion may aid in non-absorption and excretion of the allergens. Our objectives were to make Ara h 1 and Ara h 2 more resistant to digestion and test them in a model system using trypsin as the digestive enzyme. The resistant allergens were prepared by covalently attaching p-aminobenzamidine (pABA), a protease inhibitor, to peanut allergens in an extract or on a PVDF membrane using glutaraldehyde, and were then tested for resistance to trypsin digestion. SDS-PAGE and Western blot were performed to determine the allergenic capacity of the modified allergens. A control was prepared using glycine instead. Results showed that Ara h 2, when covalently attached with pABA, was more resistant to trypin digestion than the native allergen. Similarly, Ara h 1, prepared on a PVDF membrane and treated with pABA, displayed a resistance to trypsin digestion. Treatment of the allergens with glycine (a control) instead of pABA showed that the modified allergens were as digestible as native allergens. Blot assays showed that the pABA-treated allergens exhibited a lower allergenic capacity than native allergens. It was concluded that pABA, when attached to peanut allergen Ara h 1 or Ara h 2, inhibited digestion of the allergen by trypsin and reduced their allergenic capacity as well.展开更多
文摘花生仁含有丰富的营养物质,是常见的营养食品,但是花生仁内也含有很多致敏蛋白质,它们可以与过敏患者血清中的IgE抗体结合,引起IgE介导的过敏反应,最终导致机体生理功能的紊乱或组织损伤。Ara h 1(Arachishypogaea allergy 1)、Ara h 2和Ara h 3被认为是主要的花生致敏原,其热稳定性强,不易被蛋白酶彻底消化。致敏原含有的IgE抗体结合表位是其引发机体过敏反应的物质基础。人类食用花生而引发的过敏症因其潜在的危险性、长期性而日益受到关注。本文对近几年来国内外在这三种主要致敏原的理化性质、结构特点、基因表达模式、免疫学特性和功能方面取得的研究成果进行了全面综述,并对其今后的研究方向提出了展望。
文摘目的:研制低致敏复合乳酸菌发酵花生乳。方法:利用试剂盒测定不同品种花生中的粗蛋白含量及Ara h 1含量,选取Ara h 1含量最低的花生品种制作发酵乳;以接菌量、接菌种类、发酵时间及糖添加量为考察因素,Ara h 1含量为测定结果,采用响应面法优化致敏蛋白Ara h 1含量下降最多的发酵花生乳制备工艺;制作复合益生菌发酵花生乳,并对产品的口感、组织状态和风味进行感官评价。结果:当接菌量为4%、接种嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌、发酵4 h、糖添加量为6%时,发酵花生乳中的主要过敏原Ara h 1减少70%,含量为48μg/g,且感官评分达到80分。结论:经工艺优化获得了致敏蛋白Ara h 1含量低,凝乳效果好,口味怡人的复合益生菌发酵花生制品。
文摘Ara h 1是花生中含量最高的过敏原,也是致敏性较高的蛋白之一。目前提纯Ara h 1的方法大多涉及2至3步柱层析,步骤繁琐且成本较高。本文中,将带有6×his标签的Ara h 1基因与pET-32a表达载体融合,构建重组质粒并转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS,诱导使其表达目标蛋白。菌体裂解后使用Ni-NTA吸附、梯度洗脱对Ara h 1进行纯化。采用质谱及Western-blot鉴定纯化蛋白的种类及免疫活性。结果显示,质粒中目标基因的序列与NCBI数据库中Ara h 1的基因数据相符;300 mmol/L异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷22℃诱导菌液22 h时蛋白表达量最高;添加15 mmol/L十二烷基磺酸钠可将蛋白释放到上清液中,使用含50,100 mmol/L咪唑的洗脱液分别洗脱2次和1次后得到纯度较高且免疫原性良好的重组Ara h 1。
文摘为建立用于花生致敏蛋白Ara h 1快速、灵敏、特异检测的双抗体夹心ELISA法,以Ara h 1鼠源单抗(mAb)为捕获抗体,以Ara h 1兔源多抗(pAb)为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度建立方法,并对方法的灵敏度、特异性、准确度、稳定性等检测特性进行鉴定。结果表明,双抗体夹心ELISA法的mAb和pAb最佳工作浓度分别为1∶10000稀释和1∶8000稀释;ELISA标准曲线线性范围为4~256 ng/mL,检测限为4.16 ng/mL;样品添加回收试验的平均回收率为85.9%~94.5%,且该方法与其他常见致敏蛋白无交叉反应;并能在4℃条件下避光密封保存90 d内保持检测结果稳定。说明所建立的双抗体夹心ELISA法灵敏特异、准确稳定,能够用于花生致敏蛋白Ara h 1的快速筛查。
文摘为研究烘焙对花生过敏原Ara h 1潜在致敏性的影响,采用高离液序列盐溶液从鲜花生和烘焙花生中提取总蛋白,通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析烘焙前后蛋白条带变化情况,并对其中的花生主要过敏蛋白Ara h 1条带进行质谱和Swiss-Model模型分析。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结果显示,烘焙花生蛋白出现了大分子聚合物条带以及较多弥散状蛋白条带,说明烘焙过程中蛋白质会发生聚集,同时也可能发生降解。对鲜花生Ara h 1条带的质谱分析结果显示,检测出70条肽段,覆盖率达到79.2%;而烘焙后其中40条肽段未能检出,但新增1条肽段,且覆盖率降至43.9%。全部71个肽段涉及到Ara h 1的18个过敏原线性表位,酶解后鲜花生中检出16个过敏原线性表位被破坏,烘焙花生中仅发现12个被破坏。结论:烘焙加工会破坏蛋白质高级结构,掩盖了部分酶切位点,减少了酶解对过敏原线性表位的破坏,这可能是导致烘焙加工后Ara h 1致敏性强于未加工样品的原因。
文摘花生过敏由于其高致敏率和致敏严重性而引起了人们的广泛关注。Ara h 1是花生中的主要过敏原,属于Cupin超家族,通过抗原表位识别结合免疫球蛋白E引发花生过敏。本研究采用生物信息学分析花生主要过敏原Cupin超家族Ara h 1线性B细胞表位氨基酸组成,及其与Ara h 1二级、三级结构之间关系,通过质谱分析Ara h 1氨基酸序列中的抗消化肽段,并分析抗消化肽段与预测线性B细胞表位的关系。结果表明,Ara h 1的线性B细胞表位富含亲水性氨基酸和带电氨基酸;其二级结构没有明显的分布规律,具有一定的回转折叠结构;分析Ara h 1三级结构发现,表位主要位于单体之间的疏水相互作用区域,部分表位埋入三聚体构象内部;Ara h 1抗消化序列与表位之间存在部分重叠。综上,质谱检测体外模拟胃肠道消化肽段并结合表位生物信息学分析可以作为鉴定Cupin超家族线性B细胞表位的新方法。
文摘Despite being known as resistant proteins, peanut allergens (Ara h 1 and Ara h 2) can be digested and cause allergic reactions. Making the allergens more resistant to digestion may aid in non-absorption and excretion of the allergens. Our objectives were to make Ara h 1 and Ara h 2 more resistant to digestion and test them in a model system using trypsin as the digestive enzyme. The resistant allergens were prepared by covalently attaching p-aminobenzamidine (pABA), a protease inhibitor, to peanut allergens in an extract or on a PVDF membrane using glutaraldehyde, and were then tested for resistance to trypsin digestion. SDS-PAGE and Western blot were performed to determine the allergenic capacity of the modified allergens. A control was prepared using glycine instead. Results showed that Ara h 2, when covalently attached with pABA, was more resistant to trypin digestion than the native allergen. Similarly, Ara h 1, prepared on a PVDF membrane and treated with pABA, displayed a resistance to trypsin digestion. Treatment of the allergens with glycine (a control) instead of pABA showed that the modified allergens were as digestible as native allergens. Blot assays showed that the pABA-treated allergens exhibited a lower allergenic capacity than native allergens. It was concluded that pABA, when attached to peanut allergen Ara h 1 or Ara h 2, inhibited digestion of the allergen by trypsin and reduced their allergenic capacity as well.
