花生过敏原Ara h2与Ara h6的生物信息学比较研究

运用生物信息学技术比较Ara h2和Ara h6从一级结构到三级结构的异同．结果发现，Ara h2含有一段独有的序列（60～73），其中包括Ara h2三个主要IgE抗原表位中的两个．以Ara h6为模板进行同源建模获得了Ara h2的立体结构，与Arah6的结构叠加拟合后，该结构多出一段由蛋白环连接的反向平行β-折叠（58～72），其伸展结构同样包含上述两个IgE表位的蛋白序列．探讨从Ara h2和Ara h6的一级结构到三级结构产生免疫学活性差异的原因，为研究花生过敏机制及设计低致敏原疫苗奠定基础．

花生Ara h6基因的克隆、表达以及免疫活性鉴定

目的:克隆花生主要过敏原Arah6基因,诱导表达并纯化该蛋白,检测其免疫活性。方法:提取花生总RNA,设计特异性引物,RT-PCR克隆花生Arah6的基因,将测序正确的片段连入原核表达载体pET-28a上,并转入BL21(DE3)宿主表达菌中,IPTG诱导表达,通过Ni2+亲和层析柱纯化目的蛋白,Western-blotting检测该重组蛋白的免疫原性。结果:测序结果表明花生Arah6目的片段全长为438bp,编码145个氨基酸,与GenBank中蛋白序列100%相同。该基因诱导表达的产物纯化后经SDS-PAGE鉴定为17kDa。Western-blotting结果表明该蛋白与花生过敏病人混合血清中IgE结合,具有免疫原性。结论:成功克隆花生过敏原Arah6的基因,该基因表达的重组蛋白具有良好的免疫原性。

花生中致敏蛋白Ara h6的分离纯化实验研究

以天然花生为原料,冷榨去油并粉碎之后,通过浸提获得Ara h6粗蛋白液,再采用阴离子交换柱层析和分子筛凝胶过滤法进一步纯化,使用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳和飞行时间串联质谱对Ara h6蛋白进行鉴定。结果表明:分离纯化出的Ara h6蛋白纯度达到95%以上。

基于焦磷酸测序的花生过敏原基因Ara h6检测技术研究

应用焦磷酸测序技术建立了检测食品中花生过敏原基因Ara h6的快速检测方法,该检测方法对花生过敏原成分具有很好的特异性和重现性,测序结果在GenBank中进行同源性比对分析,表明目标序列能够作为鉴定花生过敏原成分很好的特征序列,为食品中的花生过敏原成分快速检测提供良好的技术支撑,保证了食品进出口和食用安全。