FAU的碘化标记及其在小鼠体内的生物学分布

目的研究^(125)I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶(FIAU)的性质及在小鼠体内的生物学分布。方法利用 Iodogen 碘化标记法对氟脱氧呋喃糖尿嘧啶(FAU)进行标记,用 Sep-Pak C18反相色谱柱进行纯化;观察^(125)I-FIAU 的标记率、放化纯、体外稳定性及其在小鼠体内的生物学分布。结果以Iodogen 固相氧化法标记 FAU,得到^(125)I-FIAU,标记率为(63.12±5.01)%;产物经 Sep-Pak C18反相色谱柱纯化后放化纯为(98.60±0.52)%;^(125)I-FIAU 在 PBS 及人血清中37℃条件下稳定,24 h 后放化纯>95.04%。生物学分布实验表明:标记物从小鼠血液中清除迅速,用每克组织百分注射剂量率(%ID/g)表示,0.5 h 为(4.33±1.00)%ID/g,2 h 下降为(0.77±0.06)%ID/g,至24 h 时基本清除完毕;肾脏是其主要排泄器官。结论 Iodogen 固相氧化法可以进行 FAU 碘化标记,得到标记率、放化纯及稳定性较好的^(125)I-FIAU,该标记物主要经肾脏排泄。

2种剂量亚叶酸钙对氟脲嘧啶增效作用的体外比较研究

目的比较 2种剂量亚叶酸钙 (leucovorin)对 5 氟脲嘧啶 (5 fluorouracil,5 Fu)的增效作用。方法采用MTT法体外药敏试验测定亚叶酸钙 2 0mg/m2 和 2 0 0mg/m2 在以 5 Fu为主的 4种化疗方案中 30例胃癌细胞的药物敏感性 ,通过比较细胞抑制率 (cellinhibition ,CI)分析 2种剂量亚叶酸钙的体外增效作用 ,得出亚叶酸钙对 5 Fu增效作用的最佳剂量。结果亚叶酸钙 2 0 0mg/m2 用量在以 5 Fu为主的 4种联合化疗方案中的体外增效作用高于 2 0mg/m2 (P <0 .0 5 )。结论在以 5 Fu为主的 4种联合化疗方案中较大剂量 (2 0 0mg/m2 )亚叶酸钙更能增强其体外抗癌作用 。

酶法合成抗病毒药物阿糖腺苷

目的:为了开发一种生产阿糖腺苷的有效方法。方法:研究了以产气肠杆菌完整细胞为催化剂酶法合成阿糖腺苷,优化了菌体培养条件以及酶反应条件。结果:在培养基中添加0.5%葡萄糖,33℃下培养16h,既能得到较多菌体,又能使菌体的催化活性保持较高。酶反应在pH7.0、25mmol/L的磷酸钾缓冲液中进行,底物浓度为阿糖尿苷30mmol/L,腺嘌呤10mmol/L,加入10%湿菌体,在60℃下振荡反应48h,腺嘌呤转化率可达90%。结论:酶法合成阿糖腺苷可应用于大规模工业化生产。

131I-FIAU／TK报告基因系统监测大鼠脑梗死模型中移植细胞的研究

目的检测经不同途径移植骨髓间充质干细胞后大鼠脑梗死模型中131I一氟一碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU）的生物分布及脑组织中胸苷激酶（TK）基因的表达，为核素报告基因显像无创性监测细胞移植治疗脑梗死提供实验依据。方法制备携带TK一内部核糖体连接位点一脑源性神经生长因子（IRES—BDNF）基因的腺病毒重组体Ad5一TK—IRES—BDNF一增强型绿色荧光蛋白（EGFP）；线栓法制作大鼠脑梗死模型；将转基因的干细胞分别通过脑实质、侧脑室、颈动脉和尾静脉注射人大鼠脑梗死模型中，以正常大鼠为对照组；Iodogen固相氧化法标记氟·阿糖呋喃基尿嘧啶（FAU）后进行生物分布研究，计算％ID／g；采用实时定量PCR和Westernblot定量分析TK基因的表达；数据分析采用独立样本t检验、单因素方差分析及Pearson相关分析。结果原位移植组梗死侧脑组织中的％ID／g为0．124±0．013，明显高于侧脑室移植组（0．052±0．004）、颈动脉移植组（0．061±0．002）、尾静脉移植组（0．059±0．005）和对照组（0．005±0．001），差异有统计学意义（t=2．913～5．652，P均〈0．05），其他移植细胞组组间差异无统计学意义（￡=0．694—1．448，P均〉0．05）。所有移植细胞组内两侧脑组织％ID／g的差异有统计学意义（f=9．004～15．734，P均〈0．05），而对照组两侧间差异无统计学意义（t=1．511，P=0．182）。此外，原位移植组梗死侧脑组织中TK基因的表达高于其他各组，差异有统计学意义（t=7．482～12．371，P均〈0．05）；且脑组织TK基因表达的相对量与％ID／g呈正相关（r=0．971，P〈0．001）；脑组织内TK／[3一actin的比值与％ID／g呈正相关（r=0．899，P：0．002）。结论原位注射是治疗脑梗死的最佳细胞移植途径；选择适当示踪剂，可利用PET或SPECT进行无创性活体监测细胞移植治疗脑梗死的效果。

I型内含子核酶介导靶向CEA双报告基因显像的体外研究

目的构建靶向CEA的以I型内含子核酶为载体核心介导的生物发光一核素双报告基因显像系统。方法采用基因工程技术构建靶向CEA的I型内含子核酶及核酶-荧光素酶-胸苷激酶（Rib53-Fluc-tk）报告质粒，采用细胞生物发光等方法检测核酶反式剪接产物的表达；以Iodogen固相氧化法合成131I-氟-碘阿糖呋喃基尿嘧啶（FIAU），行细胞摄取实验。采用两样本t检验、方差分析及最小显著差异（LSD）t检验进行统计分析。结果Rib53一Fluc—tk测序正确；乳腺癌细胞MCF-7的荧光素酶比值增高，可达O．64±0．10（n=4）；MCF-7细胞转染Rib53-Fluc—tk后的反式剪接产物条带大小为520bp，测序结果正确；pCDNA3．1-CEA及Rib53-Fluc-tk共转人胚。肾细胞293T，可探测到生物发光信号。131I—FIAU的标记率为（64．02±4．79）％（n=3），放化纯为（95．96±1．07）％（n=3），标记产物在人血清中24h的稳定性高。293T单独转染Rib53-Fluc-tk，细胞摄取率仅为（0．31±0．01）％（n=4）；293T共转染pCDNA3．1-CEA、Rib53-Fluc-tk质粒，细胞摄取率增加至（1．40±0．06）％（n=4），F=1007．29，t=136．34，P〈0．01。结论成功构建了I型内含子核酶为核心介导的靶向CEA的双报告基因系统，并对CEAmRNA进行了生物发光以及细胞摄取的检测，为改善传统报告基因显像的特异性奠定了体外实验的基础。

高效液相色谱法同时测定人全血中阿糖胞苷及其代谢物阿糖尿苷的浓度

目的建立同时测定人全血中阿糖胞苷及其代谢产物阿糖尿苷的高效液相色谱法。方法用蛋白沉淀法处理全血样品。色谱柱:Cosmosil Cholester(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol·L^(-1)磷酸盐缓冲液=3∶97,柱温:25℃,流速:1.0 m L·min^(-1),检测波长:280 nm。结果标准曲线方程:阿糖胞苷为y=16417.59x-14511.01(r=0.998 5),在1.55~198.00μg·m L^(-1)线性关系良好;阿糖尿苷为y=4468.72x-1521.15(r=0.997 8),在1.34~171.00μg·m L^(-1)线性关系良好。阿糖胞苷的最低检测浓度为0.47μg·m L^(-1),提取回收率74.84%~87.74%;阿糖尿苷最低检测限为0.40μg·m L^(-1),回收率77.76%~88.92%,日内精密度RSD均≤15%,高、中浓度点日间RSD均≤15%,低浓度日间RSD<20%。结论本方法快速、准确、灵敏,可用于测定人全血中阿糖胞苷及其代谢产物阿糖尿苷的浓度。