盐度对毛蚶(Arca subcrenata Lischke)呼吸与代谢的影响

在实验室的条件下.研究盐度(16、24、32、40)对不同规格(A:(50.79±3.24)cm,B:(42.24±0.78)cm,C:(34.82±1.51)cm)的毛蚶(Arca subcrenata Lischke)耗氧率(R_0)(mg·g^(-1)·h^(-1))、排氨率(R_n)(μg·g^(-1)·h^(-1))的影响。实验表明:在实验盐度(16～40)范围内,毛蚶的耗氧率(R_0)和排氨率(R_n)与软组织干质量(0.27～1.81g)呈幂指数关系,符合公式R= aW^b,其单位体重的耗氧率和排氨率在盐度为32时达到最大,而后随着盐度的升高其值逐渐减小。

毛蚶(Arca subcrenata)体液来克丁的凝集作用

用甲状腺球蛋白琼脂糖４Ｂ亲和层析毛蚶（ Ａｒｃａ ｓｕｂｃｒｅｎａｔａ ）体液来克丁（ＡＳＬ）。试验了ＡＳＬ对９ 属３３ 株来自不同生境的细菌、安哥拉兔血细胞和人的Ａ，Ｂ，Ｏ 型血红细胞的凝集作用。结果表明ＡＳＬ对２４．２×１０－ ２的参试菌株具凝集活性（ＢＡ）。被凝者主要是来自南极及毛蚶和对虾体的细菌。对所试红细胞则显示了效价不一的凝集活动（ＨＡ）。ＡＳＬ的凝血活性受半乳糖、乳糖的一定抑制。文章讨论了ＡＳＬ在毛蚶的防御活动中可能起的作用。

毛蚶蛋白对益生菌抗生素胁迫的保护作用

长期摄入抗生素残留的水产品可引起肠道菌群稳态失调。该研究基于恩诺沙星对四种益生菌(两歧双歧杆菌BBi32、鼠李糖乳杆菌LGG、植物乳杆菌LP45和乳双歧杆菌Probio-M8)的抑菌作用,建立了抗生素胁迫的益生菌生长模型,评价了红三鱼、黄蚬和毛蚶蛋白粗提物及其不同分离纯化组分对益生菌抗生素胁迫的保护作用。在四种益生菌中,乳双歧杆菌Probio-M8对抗生素胁迫最为敏感,三种原料中毛蚶蛋白粗提物表现出对抗生素胁迫保护作用;毛蚶蛋白粗提物经过阴离子交换柱(SepharoseFastFlow)分离得到四个组分(Fr0、Fr1、Fr2和Fr3),其分子量分别为14.3~44.3 ku(Fr0)、20.1~29.0 ku(Fr1)、14.3~97.2 ku(Fr2)和<14.3 ku(Fr3),其中Fr0可更有效地提高Probio-M8菌液的OD600从0.80提升至1.56,Fr3可将其生长代时缩短至0.98 h。毛蚶蛋白可促进乳双歧杆菌在恩诺沙星胁迫下增殖的活性,表明毛蚶蛋白具有保护益生菌免受抗生素生长胁迫、促进益生菌增殖的功能,该研究为毛蚶蛋白对肠道稳态的调节功能提供理论依据,并提出了应对体内抗生素残留的应对方案。

毛蚶提取物的抗氧化活性分析

目的制备毛蚶提取物并分析其抗氧化活性。方法利用Superdex-75,Sephadex LH-20凝胶柱层析等方法从毛蚶中分离纯化具有抗氧化活性的组分P3,采用铁氰化钾,DPPH等方法测定P3的还原力及清除自由基能力,同时采用茚三酮法、蒽酮法、考马斯亮蓝结合法、薄层层析等方法对该组分进行了定性分析。结果与结论从毛蚶中分离得到了具有抗氧化活性的组分P3,经定性分析推测该活性组分为糖肽。

毛蚶多糖的分离纯化和免疫活性测定

目的从毛蚶体内分离纯化得到毛蚶多糖精品(polysaccharide from Arca subcrenata Lischke．简称ASLP),分析其纯度和单糖组成,同时考察免疫活性。方法经除蛋白、DEAE-52和sephadex-G50柱层析得多糖精品。糖醇乙酸酯法测定单糖组成。体外脾淋巴细胞增殖测定ASLP的免疫活性。结果从毛蚶体内提取到一种均一的多糖组分,其单糖组成只有葡萄糖,ASLP能够显著地促进脾淋巴细胞的增殖。结论从毛蚶中分离纯化得到一种均一的多糖组分,具有显著的体外免疫活性。

毛蚶超氧化物歧化酶的纯化、部分性质与修饰

经热变性 ,硫酸铵分级沉淀 ,微量铜离子溶液透析 ,Sephadex G- 10 0凝胶过滤和 DE- 52柱层析 ,从毛蚶中分离纯化铜锌超氧化物歧化酶 (Cu,Zn- SOD) ,并对其部分理化性质进行分析鉴定。实验结果获得该酶的比活力为 52 94 .1U/ mg,提纯倍数为 885.9,该酶对 KCN和 H2 O2 敏感 ,而 Tsuchihashi液对酶活性没影响 ,对热较稳定 ;紫外吸收峰在 2 6 0 nm处 ;聚丙烯酰胺凝胶电泳蛋白带与活性带相对应 ;该酶是由 2个相同亚基组成的二聚体 ,分子量为 2 8.8k D;每个亚基含有一原子铜和一原子锌。

毛蚶提取物生化性质初步分析

为了充分利用海洋生物毛蚶 ,研制开发新型医药保健品 ,对毛蚶提取物进行了蛋白含量、糖含量测定及紫外光谱分析、氨基酸组成分析、微量元素分析。结果表明样品蛋白质含量达60 % ,糖含量 1 2 .6% ,氨基酸组成丰富 ,微量元素中铁含量较高 。

毛蚶、魁蚶和泥蚶核糖体DNA转录间隔区的RFLP分析

对毛蚶、魁蚶和泥蚶核糖体DNA转录间隔区(ITS区)进行限制性片段长度多态性(RFLP)分析发现,6种限制性内切酶(HaeⅢ,HhaⅠ,HpaⅡ,RsaⅠ,Sse9Ⅰ和TaqⅠ)均能将泥蚶与毛蚶及魁蚶区别开来,但未发现毛蚶和魁蚶间特异性的RFLP标记。对酶切图谱进行的数理分析结果显示,毛蚶与魁蚶之间的净遗传距离Pnet值为0,而泥蚶与毛蚶、泥蚶与魁蚶之间的Pnet值均为0.0797;泥蚶群体内检测到5种酶切复合单倍型,核苷酸多样性指数π值为0.0008外,而毛蚶和魁蚶群体内为相同的1种复合单倍型,π值均为0。

生食蚶类细菌的生理生化特性研究

蚶类水产品中常有大量细菌存在,为确保生食蚶类的食用安全,研究了魁蚶、毛蚶、泥蚶体内的细菌种类、数量和生理生化特性,并用荧光微生物法对细菌进行了鉴定。研究结果显示,魁蚶、毛蚶、泥蚶中共有7株菌,分别为缺陷短波单胞菌、脑膜炎败血黄杆菌、弗氏枸椽酸杆菌、棒状杆菌属、短稳黄杆菌、溶藻弧菌、有毒威克斯菌,其中多数是条件致病菌,并对常用抗生素有抗性。

毛蚶多肽提取物的体外免疫活性

目的考察毛蚶多肽提取物(PEAS)的体外免疫活性。方法 MTT法测定PEAS对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响及对小鼠NK细胞杀伤活性的影响;中性红吞噬法测定PEAS对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响;流式细胞术测定PEAS所致小鼠脾淋巴细胞周期的变化;双抗体夹心ELISA法测定PEAS对主要细胞因子IFN-γ和IL-4分泌水平的影响。结果 PEAS能够显著促进小鼠脾淋巴细胞增殖(P<0.05或0.01),能够增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬中性红活性和小鼠NK细胞杀伤活性(P<0.05或0.01);PEAS能够促进脾淋巴细胞G0/G1期向DNA合成期(S期)转化;PEAS协同Con A作用,能够增加IFN-γ的分泌(P<0.05或0.01),并且能够抑制IL-4的分泌(P<0.05或0.01)。结论 PEAS体外可促进小鼠脾淋巴细胞、腹腔巨噬细与NK细胞的免疫功能,其机制可能与促进脾淋巴细胞DNA合成,增加IFN-γ的分泌量有关。

温度和规格对毛蚶耗氧率和排氨率的影响

在室内实验条件下研究了温度、规格对毛蚶的耗氧率和排氨率的影响．实验温度范围为１１～１７℃，各项测定均在停喂２ｄ后进行．结果显示，毛蚶耗氧率和排氨率与壳长呈负相关关系，而与温度呈正相关关系．并且在实验用毛蚶的壳长范围内其耗氧率和排氨率与壳长分别符合下列模式：Ｙ＝ＡＬｂ和Ｙ＝ａＸ＋ｂ．方差分析（ＡＮＯＶＡ）结果显示，温度对耗氧率和排氨率的影响极显著．

毛蚶中抗癌活性肽高效液相指纹图谱分析研究(英文)

应用RP-HPLC技术分析毛蚶中的抗癌活性肽。毛蚶活性肽的最优分离条件为:温度:30℃;波长:280nm;流速:1.0 ml/min;流动相A为80%乙腈(含0.1%TFA),流动相B为0.1%TFA水溶液,梯度洗脱。应用上述条件,成功地得到了10批样品的指纹图谱,并确定了14个共有峰。

毛蚶蛋白抗肿瘤活性研究

目的：分离得到毛蚶蛋白活性组分并研究其体外抗肿瘤机制及对免疫细胞的作用。方法：低温水提及硫酸铵沉淀法获取毛蚶蛋白活性组分；MTT法检测50、100、200和400μg/mL的毛蚶蛋白活性组分分别作用24、48和72 h后对人结直肠癌细胞HT-29、HCT116，人肝癌细胞HepG-2，人肺癌细胞A549的细胞毒活性；倒置相差显微镜下观察细胞活性及Giemsa染色观察毛蚶蛋白活性组分对肿瘤细胞及核形态变化的影响，流式细胞术检测毛蚶蛋白活性组分对人结直肠癌HT-29细胞周期及凋亡的影响；MTT法检测毛蚶蛋白活性组分对小鼠巨噬细胞RAW264.7生长的影响，中性红法测定其对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬能力的影响，Griess法检测其对小鼠巨噬细胞RAW264.7分泌NO的影响。结果：毛蚶蛋白活性组分对多种人肿瘤细胞系有抑制作用，且呈作用时间与剂量依赖性；流式细胞术结合Giemsa染色发现，其主要引起HT-29细胞G2-M期阻滞，多核细胞增加，并具一定的诱导细胞凋亡作用；在50-100μg/mL下能刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7生长，增强其吞噬能力及NO分泌活性。结论：毛蚶蛋白活性组分具有一定抗肿瘤活性，主要机制为引起肿瘤细胞G2-M期阻滞及诱导其凋亡，且具一定免疫激活作用。

毛蚶抗癌活性蛋白对K562细胞增殖和凋亡的影响

目的考察毛蚶抗癌蛋白（ASAP）活性组分体外对人慢性粒细胞性白血病K562细胞的细胞毒作用,初步探讨其作用机制。方法 ASAP由毛蚶软体经常规低温水提和硫酸铵沉淀法制备;Bradford法测定ASAP样品的蛋白质浓度,计算蛋白质含量;倒置相差显微镜下观察ASAP作用后K562细胞形态变化,姬姆萨染色观察细胞和细胞核的变化;MTT法检测ASAP对K562细胞存活的影响;流式细胞术检测细胞凋亡和周期的变化;Western蛋白质印迹法检测细胞凋亡和细胞周期相关蛋白胱天蛋白酶原3（35 ku）,胱天蛋白酶3（17 ku）,程序性细胞死亡因子4（PDCD4）和P53的表达。结果 MTT实验结果表明,ASAP 50,100和200 mg·L^-1作用24-72 h对K562细胞增殖具有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性,24,48和72 h的浓度-效应相关系数分别为0.851,0.8977和0.8997（P〈0.01）。镜下观察发现,ASAP 200 mg·L^-1作用48 h,K562细胞出现变形或核碎裂等形态变化。流式细胞术结合姬姆萨染色显示,ASAP可浓度依赖性地引起K562细胞凋亡和G2/M期阻滞,其中ASAP 200 mg·L^-1处理48 h,K562细胞早期凋亡率为（32.8±0.1）%〔对照组（3.7±1.1）%〕（P〈0.01）,晚期凋亡率为（31.2±2.2）%〔对照组（9.9±0.8）%〕（P〈0.01）;G2/M期细胞为（55.2±1.7）%〔对照组（15.3±0.8）%〕（P〈0.01）。Western蛋白质印迹法实验结果显示,ASAP作用0-40 h,K562细胞中胱天蛋白酶原3（32 h时）明显下调（P〈0.01）,胱天蛋白酶3表达明显增加（P〈0.01）,而随着ASAP作用时间的延长,PDCD4和P53蛋白表达均下调（P〈0.01）。结论诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能是ASAP细胞毒作用的主要机制;ASAP诱导的细胞凋亡是胱天蛋白酶3通路依赖的,诱导K562细胞凋亡和G2/M期阻滞可能与PDCD4和P53蛋白表达下调相关。

毛蚶抗癌蛋白对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用

目的:从毛蚶软体部位中分离出具有一定抗癌活性的毛蚶蛋白组分,研究其对人乳腺癌细胞MCF-7的生长抑制作用。方法:以新鲜毛蚶软体部分为原材料,分离获得毛蚶抗癌蛋白组分(命名为NS);倒置相差显微镜观察不同浓度(50、100、200、400μg/mL)NS组分对MCF-7癌细胞生长的影响,将200μg/mL NS组分作用MCF-7细胞不同时间(12、24、48 h)后,Giemsa染色观察癌细胞及核形态的变化,流式细胞术检测NS组分对MCF-7细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot检测细胞周期及细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:与阴性对照组比较,各浓度NS组分对人乳腺癌MCF-7细胞生长均具有明显的抑制作用(P<0.05或P<0.01);倒置相差显微镜下可见200μg/mL NS组分作用MCF-7细胞12 h后,部分细胞收缩变圆、脱落,24、48 h后细胞脱落现象更加明显;Giemsa染色发现,NS组分处理12 h后细胞出现有丝分裂相增加,继而出现多核或核碎裂等现象;流式细胞术检测发现NS组分主要引起细胞G2-M期阻滞;NS处理组凋亡率均较对照组明显升高(P均<0.01),且随着药物作用时间的延长,细胞凋亡比例逐渐增加。Western blot检测发现NS组分作用MCF-7细胞后p53及procaspase-3蛋白表达量均上调。结论:毛蚶抗癌蛋白NS组分体外对人乳腺癌MCF-7细胞的细胞毒作用主要通过引起细胞发生G2-M期阻滞、诱导细胞凋亡实现的,期间伴随p53及procaspase-3蛋白表达上调。

毛蚶水解液对小鼠实验性肝损伤的保护作用

小鼠ig毛蚶水解液(Hydrolysate of Arca subcrenata,HA)10g/kg、20g/kg,对四氯化碳、硫代乙酰胺(TAA)和强的松龙引起的血清谷雨转氨酶(SGPT)活性升高均有明显的降低作用(P<0.01),且能缩短戊巴比妥钠诱导的正常小鼠和四氯化碳肝损伤小鼠的睡眠时间(P<0.05)。结果表明,HA对小鼠实验性肝损伤具有显著的保护作用。

三种蚶DNA含量和种间亲缘关系的探讨

根据流式细胞仪对泥蚶、毛蚶、魁蚶血细胞测出的 DNA相对含量 (相对鳖血细胞 )和前人对该三种蚶染色体核型的研究结果 ,分析和探讨了它们的种间亲缘关系。认为 :三者在进化程度上虽然属相近的三个种 ,但相比之下泥蚶最高级 ,毛蚶与魁蚶之间更亲近 ;结果也从细胞生物学理论上验证了佩尔森纳 (Benson,1892 )贝类分类法将泥蚶归属为泥蚶科中的泥蚶属 。

毛蚶壳微晶人工骨治疗骨缺损的实验研究

目的用毛蚶壳微晶人工骨引导新骨生成修复骨缺损。方法将24只家兔项骨制备Φ=1.5～2.0cm大小两个孔,一孔植入人工骨,另一孔为空白对照组,通过拍X线片及做病理切片,观察骨缺损的修复情况并对材料做出评价。结果材料植入早期可见异物巨细胞反应、泡沫细胞增生。3个月以后在植入物周围有新骨形成,最终植入物被新骨替代。而对照侧可见少量的骨组织,大部分仍为纤维组织。X线表现:早期植入物与骨腔边缘之间有密度减低的圆状阴影,颗粒状物清晰可见;中期植入颗粒间界限轻度模糊,后期植入物与骨腔边缘已融合,呈白色致密影像。对照侧仍可见密度减低骨腔阴影。结论毛蚶壳微晶人工骨有较好的生物相容性及生物降解性,可以引导和促进骨组织再生,为一种前景广阔的新的骨代用品。

毛蚶体内金属硫蛋白提取工艺优化

旨在建立一种金属硫蛋白(metallothionein,MT)的高效提取工艺。采用了Zn2+诱导毛蚶机体产生金属硫蛋白,比较诱导前后毛蚶体内MT含量的变化。探究毛蚶中金属硫蛋白的提取方法并优化提取因素,选用Tris-HCl缓冲液为提取剂。在单因素实验的基础上,选取对MT提取含量影响较大的因素包括提取液p H、提取液浓度、液料比、提取温度等进行试验。以MT提取含量作为响应值,根据Box-Behnken实验原理,在四因素三水平的基础上进行毛蚶金属硫蛋白提取工艺响应面优化分析。结果表明,最佳提取工艺参数为:液料比6∶1 m L/g,提取液pH为8.45,提取温度35℃,缓冲液浓度0.18 mol/L。在此参数条件下,MT提取量为0.695 mg/g,与模型的预测值基本相符。因此,本研究建立了从毛蚶中高效提取MT的工艺。

几种无脊椎动物心肌超微结构的比较观察

用透射电镜观察了软体动物中的毛蚶（Ａｒｃａ（Ａｎａｄａｒａ）ｓｕｂｃｒｅｎａｔａｌｉｓｃｈｋｅ）以及节肢动物门中的痕掌沙蟹（Ｏｃｙｐｏｄｅｓｔｉｍｐｓｏｎｉｏｒｔｍａｎｎ）、锯齿溪蟹（Ｐｏｔａｍｏｎｄｅｎｔｉｃｕｌａｔｕｓ）、螯虾（Ｐｒｏｃａｍｂａｒｕｓｃｌａｒｋｉ）四种无脊椎动物心肌纤维的超微结构。毛蚶的心肌呈平滑肌样，另三种甲壳动物的心肌都是横纹肌，但仍存在超微结构上的差别。本文从心肌组织结构上提供了节肢动物比软体动物高等的依据，并进一步讨论了无脊椎动物的心肌从平滑肌过渡到横纹肌是在软体动物到节肢动物的进化过程中完成的。