同型半胱氨酸抑制人血管内皮细胞精氨酸转运

目的 :观察同型半胱氨酸 (homocysteine,HCY )对人脐静脉内皮细胞左旋 精氨酸 一氧化氮 (L arginine NO)途径的影响及HCY致血管损伤的机制。方法 :将培养的人脐静脉内皮细胞随机分 4组 (每组n =6 ) ,加入HCY使终浓度分别为 0、0 .0 1、0 .1和 1mmol·L- 1 ,培养 12h后 ,检测内皮细胞存活率、乳酸脱氢酶 (lactatedehydro genase ,LDH)漏出及细胞L arginine转运、一氧化氮合酶 (nitricoxidesynthase,NOS)活性和亚硝酸盐 (NO2 )生成的变化。结果 :与对照组相比 ,0 .1mmol·L- 1 HCY增加LDH漏出 ,1mmol·L- 1 HCY降低细胞存活率 ,增加LDH漏出 ;0 .1、1mmol·L- 1 组NO生成显著降低 ,但仅在 1mmol·L- 1 组才降低NOS活性。HCY呈浓度依赖地降低内皮细胞L arginine转运 ,0 .0 1mmol·L- 1 HCY即明显抑制细胞L arginine转运速率 ,0 .1、1mmol·L- 1 HCY不仅显著降低细胞L arginine最大转运速率 ,而且增高米氏常数 ,降低了转运效率。 结论 :HCY损伤人血管内皮细胞L arginine NO途径 ,尤其是抑制细胞L arginine转运 ,这可能是HCY导致心血管疾病时心血管功能和结构损伤的重要机制之一。

C-型利钠利尿肽在球囊血管损伤中的作用

目的：在大鼠主动脉球囊剥脱模型上观察血浆和主动脉组织Ｃ型利钠利尿肽（Ｃｔｙｐｅ ｎａｔｒｉｕｒｅｔｉｃ ｐｅｐｔｉｄｅ，ＣＮＰ）的质量浓度和ｍＲＮＡ 表达的动态变化及外源性ＣＮＰ对大鼠球囊损伤后内膜生成的影响，以探讨ＣＮＰ在再狭窄中的作用。方法：放射免疫法测定ＣＮＰ质量浓度，ＲＴＰＣＲ 测定ＣＮＰｍＲＮＡ 的表达。结果：发现大鼠球囊损伤后血浆ＣＮＰ的质量浓度升高， 内膜剥脱后第３ 天、１０ 天、２１ 天，血浆ＣＮＰ 水平分别增高８０ ．７％ （ Ｐ＜ ０．０１） ，４３．５ ％ （Ｐ＜ ０．０５） 和２７ ．５％ （Ｐ＜ ０．０５），而主动脉组织ＣＮＰ含量在损伤后第３ 天下降４６ ．６％ （Ｐ＜ ０．０５） ，第１０ 天，２１ 天和２８ 天ＣＮＰ含量分别增加２ ．８ 倍（ Ｐ＜ ０ ．０１） 、１．６ 倍（ Ｐ＜ ０ ．０５） 和０ ．８２ 倍（Ｐ＜ ０．０５）。在血管损伤３ 天时ＣＮＰｍＲＮＡ 的表达减弱，而第１０ 天和第２１ 天ＣＮＰｍＲＮＡ 的表达明显增强。外源性ＣＮＰ显著抑制球囊损伤后第７ 天和２１ 天新生内膜的形成，内膜／中膜比值分别降低２３％ （Ｐ＜ ０．０５）和２０ ％ （Ｐ＜０ ．０５）。结论：ＣＮＰ参与血管球囊损伤后的修复过程，可能是机体?

17-β雌二醇对原代人脐静脉内皮细胞一氧化氮合酶基因表达的影响

目的：阐明雌二醇对内皮细胞一氧化氮（ＮＯ）生成及一氧化氮合酶（ｃＮＯＳ）基因表达的影响。方法：观察雌二醇作用于原代人脐静脉内皮细胞（ＨＵＶＥＣ）一定时间（１～２４ｈ）后的ＮＯ产量，采用Ｇｒｅｉｓ反应测定代谢产物ＮＯ－２的量及Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交技术分析雌二醇作用于ＨＵＶＥＣ１８ｈｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达。结果：１００、３０、１０及１ｎｍｏｌ·Ｌ－１的雌二醇作用下，ＨＵＶＥＣ分别于１、４、１２及１８ｈ起，ＮＯ－２产量有明显增高。０．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１雌二醇作用２４ｈ内，ＮＯ－２产量与对照组比较差异无统计学意义。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交结果表明：１～１００ｎｍｏｌ·Ｌ－１雌二醇可明显促进ｃＮＯＳｍＲＮＡ的表达；而０．１ｎｍｏｌ·Ｌ－１雌二醇无此效应。结论：雌二醇可促进ＨＵＶＥＣＮＯ的生成及ｃＮＯＳ基因的表达，可能为雌激素保护作用的重要机制，雌二醇作用的阈浓度可能在０．

血管内皮生长因子真核表达质粒在心肌细胞和神经细胞中的表达

目的 :探讨pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒对心肌细胞和神经细胞的转染及表达。方法 :pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒的构建 ,Lipofectin瞬时转染大鼠原代培养心肌细胞和人神经母细胞瘤细胞SH SY 5Y。采用RT PCR ,ELISA等方法检测VEGF基因在心肌细胞和SH SY 5Y细胞中的表达。MTT法检测转染后细胞上清中VEGF的生物学活性。结果 :转染 pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒的心肌细胞和SH SY 5Y细胞中VEGFmRNA水平明显升高 ,ELISA检测到VEGF蛋白表达水平也远高于转空载质粒和未转染对照组 ,并且转染的心肌细胞和神经细胞上清具有促进内皮细胞增殖的生物学活性。结论 :pcD2 /hVEGF12 1真核表达质粒能转染心肌细胞和神经组织来源的细胞系 ,并获得高水平的表达 ,而且表达出的VEGF蛋白具有生物学活性。

NO与(O_2)~同时生成对离体兔肺动脉反应性影响的初步研究

目的：检测ＮＯ与Ｏ－·２共同或分别作用对兔肺动脉反应性变化的影响。方法：将制备的离体兔肺动脉环分为ＮＯ组，Ｏ－·２组，ＮＯ＋Ｏ－·２组和溶剂对照（ＮＳ）组。用离体血管环技术观察肺动脉对乙酰胆碱（ＡＣｈ）、Ｃａ２＋载体Ａ２３１８７和苯肾上腺素（ＰＥ）的反应性变化。结果：肺动脉对ＡＣｈ的舒张反应（ｇｔｅｎｓｉｏｎ／ｍｇｄｗ）和舒张反应百分率（％），在Ｏ－·２组明显降低（Ｐ＜０．０１，与ＮＳ组比较）；在ＮＯ＋Ｏ－·２组显著高于Ｏ－·２组（Ｐ＜０．０５），但与ＮＳ组也有明显差异（Ｐ＜０．０５）；在ＮＯ组肺动脉的舒张反应接近ＮＳ组，与Ｏ－·２组有明显差异（Ｐ＜０．０５）。对Ａ２３１８７的舒张反应（用占预收缩的百分比表示），在ＮＳ、ＮＯ＋Ｏ－·２和Ｏ－·２组分别为７３．６７％，６４．８６％和５９．２６％。各组肺动脉对ＰＥ的收缩反应大致相同。Ｌ－精氨酸预孵育后，对ＰＥ的收缩反应在ＮＯ＋Ｏ－·２组收缩降低，为预孵育前收缩的５３．８９％；而在Ｏ－·２组无明显变化。结论：Ｏ－·２损害了肺动脉的内皮依赖和受体依赖性舒张反应；ＮＯ同时生成时可部分逆转Ｏ－·２的损伤作用；Ｏ－·２似通过清除内源性ＮＯ或直接累及ｅｃＮＯＳ，而发挥其损伤?