Differentiation and Analysis of Nephrotoxicity Between Caulis Clematidis Armandii(Chuan Mu Tong)and Aristolochia Manshuriensis(Guan Mu Tong)

Mutong is a kind of medicine for promoting water circulation and drenching.There are many kinds of Aristolochia manshuriensis(Guan Mu Tong),which are commonly used in clinic,such as Mutong,Caulis Clematidis Armandii(Chuan Mu Tong)and Mutong.After the event of"Longdan Xiegan pill",the doctor made Chuanmu general taboo,or replaced it with other drugs,or did not dare to use it for a long time,which affected the clinical effect.This paper discusses the toxicity of Mutong.

木通所致大鼠急性肾损伤的实验观察

目的：观察木通所致大鼠急性肾损伤作用的功能变化及组织形态学特点。 方法：用木通水煎剂（６０ｇ／ｋｇ·ｄ －１） 给大鼠灌胃，建立大鼠急性肾损伤动物模型，检测有关肾功能指标，进行组织形态学观察。 结果：木通组大鼠的主要功能改变为：氮质血症、低渗尿、蛋白尿、糖尿、尿ＮＡＧ 酶升高。组织形态学改变主要表现为：急性肾小管坏死，以皮、髓交界区小管损伤为主。 结论：大剂量木通可导致大鼠急性肾功能衰竭。

中药关木通中总马兜铃酸的含量测定

目的：测定关木通中总马兜铃酸的含量，保证临床用药安全有 效。方法：紫外分光光度法，检测波长为310 nm。结果：20 批关木通样品中总马兜铃酸含 量为0.63%～2.84%。结论：各地所用商品关木通中总马兜铃酸含量差异较大，且与药材性 状具一定关系。

利用炮制技术去除关木通毒性成分的方法学研究

目的:根据马兜铃酸的化学性质,借鉴传统中药炮制经验,对去除马兜铃酸的炮制方法学进行研究。方法:以关木通为研究对象,马兜铃酸A为指标,采用正交试验等方法对关木通的碱制和醋制工艺进行优化。结果:确定了关木通的炮制工艺为以0.1mol·L-1碳酸氢钠多次浸泡后醋制的方法。炮制过程中温度对毒性成分的去除率影响较大。不同含量的关木通在实验室小试炮制中,毒性成分去除率在90%以上,10批中试毒性成分的去除率在80%以上,使马兜铃酸A的含量降低到0.35-0.60mg·g-1。马兜铃酸在药材中部分是盐的形式存在的。结论:该炮制新工艺能够选择性的去除关木通中的绝大部分毒性成分,达到了去毒的目的。

木通致大鼠肿瘤作用的实验研究

目的 :观察木通所致大鼠肿瘤的发生演变过程、生物学行为、病理学及免疫组化特征。方法 :用不同剂量木通水煎剂给大鼠灌胃建立急性肾损伤模型 ,进行组织形态学及免疫组化的动态观察。结果 :( 1)实验头 3个月组织形态学未见大鼠发生肿瘤及肾脏发生明显肿瘤样增生改变。 ( 2 )实验 6个月 3个剂量组肾脏肿瘤样增生发生率均为 10 0 0 %。其中 2例进行免疫组化研究 ,波形蛋白 (vimentin)、增殖细胞核抗原 (PCNA)均表达阳性 ,平滑肌肌动蛋白 (SMA)、p53均表达阴性。 ( 3)实验 6个月 3个剂量组肾脏肿瘤发生率分别为 4 2 8%、2 5 0 %及 0 ,包括 4例肾脏间叶性肿瘤及 1例肾母细胞瘤。其中 3例肾脏间叶性肿瘤免疫组化研究显示 ,vimentin、PCNA :肿瘤细胞均表达阳性。SMA、p53:分化成熟的肿瘤细胞表达阳性。 ( 4 )实验6个月 3个剂量组肾外肿瘤发生率分别为 14 3%、12 5%和 12 5% ,其中乳腺导管上皮肿瘤、甲状腺滤泡上皮肿瘤和皮肤附件上皮肿瘤各发生 1例。对照组未见肿瘤发生。结论 :大剂量木通具有致大鼠肿瘤作用。其中肾脏肿瘤发生率相对较高 ,组织学类型以肾脏间叶性肿瘤为主。分化成熟的肾脏间叶性肿瘤伴有vi mentin、SMA、p53和PCNA的阳性表达。肾外肿瘤发生率相对较低。

关木通肾毒性的代谢组学研究

目的研究经关木通染毒后大鼠尿液的代谢表型改变及其与组织病理和尿液、血浆生化指标的相关性,探讨代谢组学在中药毒理学研究中的应用。方法关木通分4个剂量组:36、32、28、24 g/kg,W istar大鼠连续ig给药6 d,12 h后收集尿样,测定1H-NM R谱,并进行血浆生化指标和肾脏组织病理学检查。结果染毒后,大鼠肾脏出现不同程度的炎症坏死,尿样中氧化三甲胺、柠檬酸、牛磺酸、肌酐、甜菜碱等代谢物均有不同程度的下降,而醋酸、丙氨酸则显著上升。主成分分析表明,给药组与对照组的代谢谱有明显差异,能够被区分开,而造成组间差异的主要影响因素是醋酸和氧化三甲胺的变化。不同剂量条件下,各组动物的代谢谱也各不相同,与肾脏病理和血浆生化改变相一致。结论关木通能够对肾脏造成损害,且大鼠尿液的代谢物谱与关木通毒性作用强度密切相关,代谢组学分析方法在毒理学研究中有着广泛的应用前景。

慢性马兜铃酸肾病动物模型的建立及牛磺酸对其早期保护作用

目的:建立大鼠慢性马兜铃酸肾病模型,初步观察牛磺酸对其保护作用。方法:雄性 SD 大鼠分为3组,观察12周。模型组给关木通浸膏水溶液间断灌胃;治疗组在饮水中补充1%牛磺酸;对照组仅给自来水灌胃。第1、4、8和12周每组各处死6只,测体重,取血、尿和肾脏标本做相关检查。结果:模型组各周体重显著低于对照组(P<0.05或 P<0.01),血肌酐与体重比值(SCr/BW)和24h 尿蛋白定量显著高于对照组(P<0.01)。治疗组第1、4周 SCr/BW 和24h 尿蛋白定量显著低于模型组(P<0.01),模型组与治疗组体重比较差异无显著性(P>0.05)。光镜下见模型组和治疗组逐渐出现肾小管变性、萎缩及间质纤维化,第4周起纤维化面积显著高于对照组(P<0.01),而两组间比较差异无显著性(P>0.05)。电镜下见模型组和治疗组肾小管上皮细胞凋亡,微绒毛脱落,线粒体肿胀,溶酶体及吞噬泡增多;第4周起肾间质出现胶原纤维,并逐渐增多。对照组无明显病变。结论:建立了关木通致大鼠慢性马兜铃酸肾病模型;牛磺酸对该模型早期肾损伤可能发挥一定的保护作用。

以关木通为例探讨不同入药形式对中药中有毒成分含量的影响

目的:以关木通为例,探讨中药不同入药形式对其毒性成分含量的影响。方法:以3.7mmol·L-1磷酸缓冲液(pH2.55)-乙腈为流动相,260nm为检测波长,采用RP-HPLC-DAD方法测定以粉末、水煎液2种形式入药的关木通中马兜铃酸Ⅰ、马兜铃酸Ⅱ、马兜铃酸Ⅳa的含量情况。结果:关木通水煎液中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ,Ⅳa的煎出率分别为药材粉末中含量的53.4%,75.5%,61.9%;而在水煎后的药渣中马兜铃酸Ⅰ,Ⅱ和Ⅳa的残余量分别相当于粉末中含量的22.3%,15.7%和30.3%;3种马兜铃酸其余的约10%-25%可能在水煎过程中被破坏了;马兜铃酸Ⅰ在水煎液中仍为主要的马兜铃酸类成分。结论:不同入药形式对关木通中的毒性成分含量有很大的影响;应根据毒性成分的性质而选择合适的入药形式,以此来减少中药毒性成分对人体的损害。

关木通药材中马兜铃酸A的药动学研究

目的采用高效液相色谱法测定血浆中马兜铃酸A的浓度,研究小鼠灌胃给予关木通提取液后体内马兜铃酸A的药动学特点.方法采用DiamonsilTMC18色谱柱(250mm ×4.6mm,5μm),以甲醇-水-冰乙酸(72:27:1)为流动相,流速1.0mL·min-1,检测波长315nm.小鼠按马兜铃酸A 4.0mg·kg-1灌胃给予关木通提取液后,经HPLC法测定血浆药物浓度.结果马兜铃酸A在0.1098～3.66mg·L-1的浓度范围内线性关系良好(r=0.9998,n=7),最低检测浓度为0.0183mg·L-1.马兜铃酸A高、中、低3种不同浓度的平均回收率及相对标准偏差分别为97.07%(1.0%),97.10%(1.1%)和99.36%(0.8%),该法的日内和日间精密度RSD值均小于9.3%.小鼠给药后,药动学房室模型为一室模型,主要药动学参数T1/2(ka),T1/2(ke),Tmax,AUC,Cmax,CL/F(s),V/F(c)分别为:3.94,16.29,10.65min,188.88(mg/L)·min,2.84mg/L,0.038mg/kg/min/(mg/L),0.89(mg/kg)/(mg/L).结论本实验建立了关木通药材中马兜铃酸A血药浓度的HPLC测定方法,阐明了马兜铃酸A的药动学特征.

中药关木通中的抗肿瘤成分研究

目的:研究关木通(AristolochiamanshuriensisKom)的化学成分及其生物活性。方法:用色谱法和光谱解析方法对关木通乙酸乙酯和甲醇提取物化学成分进行分离和结构鉴定。结果:共得7个马兜铃菲类化合物:马兜铃次酸Ⅱ(1),马兜铃酸Ⅰ(2)、Ⅱ(3)、Ⅳ(4)、Ⅲa(5)、Ⅳa(6),马兜铃内酰胺Ⅲa(7)。结论:化合物1为新的天然产物,化合物7为首次从关木通中获得。

长期小剂量应用关木通对部分肾切除大鼠肾脏的影响

目的 :了解长期小剂量应用关木通是否可加重慢性肾衰竭大鼠肾脏损害。方法 :采用 5 /6肾切除方法复制大鼠慢性肾衰竭模型 ,第 1组给予与药典剂量相当 (1g/kg)的关木通煎剂 ,第 2组给予关木通3g/kg ,第 3组给予相同量的自来水 ,均每天灌胃 1次 ,共 8周 ,观察血清肌酐、尿素氮、尿蛋白含量以及肾脏形态变化。结果 :8周后 ,第 2组血清肌酐、尿素氮和尿蛋白排泄量显著高于第 3组〔分别为 (16 5 0± 15 6 )和 (10 9 8± 10 0 ) μmol/L ,(2 7 8± 3 6 )和 (18 7± 2 5 )mmol/L ,(6 8 2± 10 1)和 (44 6± 8 5 )mg/2 4h ,P值均 <0 0 5〕 ,肾间质病变和肾小球硬化程度也较重。结论 :慢性肾衰竭大鼠对小剂量关木通的肾脏毒性作用的易感性增加 。

关木通致肾损伤大鼠血和尿中尾加压素Ⅱ含量的变化

目的:观察关木通引起大鼠肾损伤时血和尿中尾加压素Ⅱ(UⅡ)含量的变化。方法:雄性Wistar大鼠随机分为对照组(5只)和给药组(25只)。大鼠灌胃给予关木通水煎剂后0、3、7、15、25 d和停药10 d时采血并留取24 h尿液,分别检测血肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、尿视黄醇结合蛋白(RBP)、尿N-乙酰-β-氨基葡萄糖苷酶(NAG)水平及血浆、尿UⅡ含量;观察上述时间点肾脏组织病理学改变。结果:①给予关木通后不同时间血肌酐、尿素氮及24 h尿蛋白含量与对照组比较无明显升高;与对照组比较,尿NAG于给药15 d后明显升高(P<0.05),给药25 d后NAG及RBP含量均增加(P<0.01),停药10 d两者含量与25 d时比较未见明显下降。②与对照组比较,血UⅡ含量在给予关木通15 d即明显升高(P<0.05),25 d达峰值(P<0.01),停药10 d仍持续在较高水平(P<0.01);尿UⅡ含量于给药25 d时较对照组明显升高(P<0.05),停药10 d时仍在较高水平(P<0.05)。③给药3 d后HE染色可见局部肾小管上皮细胞变性、坏死和崩解,并随给药时间的延长逐渐加重,停药10 d病变较25 d时有所减轻。结论:关木通所致肾损伤可引起血、尿UⅡ含量明显升高,提示UⅡ在关木通所致肾损伤的发生发展中可能有一定的作用。

龙胆泻肝丸肾毒性的实验研究

目的通过观察、检测龙胆泻肝丸中马兜铃酸含量 ,与对大鼠急性肾功能损伤和形态学的影响 ,探讨龙胆泻肝丸降低肾毒性的作用。方法用含相当生药关木通 3g、6 g、12 g/ (kg·d)的龙胆泻肝丸水煎液给大鼠连续灌胃 7天 ,检测各组大鼠体质量、肾功能及肾组织形态学变化 ;并用RP HPLC测定龙胆泻肝丸、关木通水煎液马兜铃酸含量。结果①龙胆泻肝丸水煎液组马兜铃酸含量明显低于关木通水煎液组 (P <0 .0 1)。②龙胆泻肝丸有减低关木通肾毒性作用。结论龙胆泻肝丸有降低关木通肾毒性作用 。

前列地尔防治大鼠马兜铃酸肾病纤维化

目的:观察前列地尔对马兜铃酸肾病(AAN)纤维化的防治作用。方法:Wistar大鼠25只,随机分3组,对照组(n=5)予灌服饮用水10mL·kg-1·d-1,模型组及治疗组(均n=10)均予关木通水煎剂20g·kg-1·d-1,共计12wk。治疗组8wk后同时予尾静脉注射前列地尔4μg·kg-1·d-1,共2wk。12wk时观察各组大鼠尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)、肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、结缔组织生长因子(CTGF)和纤连蛋白(FN)的变化。结果:模型组大鼠BUN,Cr较对照组和治疗组明显升高(P<0.01);模型组中TGF-β1,CTGF和FN光密度明显高于对照组和治疗组(P<0.05);治疗组大鼠肾脏病理显示肾损害较模型组明显减轻。结论:前列地尔能使AAN大鼠肾组织TGF-β1,CTGF和FN表达下降,减轻马兜铃酸肾病纤维化程度。

关木通两种提取液对V_(79)细胞DNA的损伤作用

目的 探讨关木通对DNA的损伤作用。方法 应用单细胞凝胶电泳技术 (彗星实验 )研究中药关木通的两种提取液对中国仓鼠肺成纤维细胞 (V79)的DNA损伤情况。结果 关木通的两种提取液在一定浓度下均能导致V79细胞产生彗星现象 ,并且存在剂量—反应关系。

反相高效液相色谱法测定关木通水煎剂中马兜铃酸A含量

目的 :建立反相高效液相色谱法测定关木通水煎剂中马兜铃酸A的含量。方法 :色谱柱 :SpherisorbODS2(4 6mm×250mm ,5μm ) ;流动相 :甲醇 -水 -冰醋酸 (72∶27∶1) ;流速 :1 0ml/min ;检测波长 :250nm。结果 :马兜铃酸A在0 0128μg～0 4096μg范围内线性关系良好 ,回归方程 :Y=4553 7 +5388319 3X ,r=0 9999 ;平均回收率为97 33 % ,RSD为2 34 %。结论 :本方法简便、灵敏、准确。

关木通肾毒害及其防治

关木通肾毒害及其防治研究为当前国内外中药安全性研究领域的热点问题 ,通过对国内外报道的 34例关木通肾毒害病例及其防治进行综述认为 :1)历代木通品种及其药性毒性尚需本草学考证和生药学比较加以澄清 ;2 )亟待确立关木通临床安全服用的原则和方法 ;3)关木通肾毒性的真正原因和确切机制有待揭示 ;4)

关木通复方肾毒性的临床前瞻性观察

[目的 ]通过前瞻性临床观察 ,判断关木通复方 (当归四逆加吴茱萸生姜汤颗粒剂KM -38旧方 )是否有肾毒性 ,以便指导临床安全用药。 [方法 ]监测经辨证在药典剂量 ( <6g)下短期 ( <6 0d)服用关木通复方 (当归四逆加吴茱萸生姜汤颗粒剂KM -38旧方 )的病人 ,于服药前后体重、血压、血红蛋白及肾功能特别是尿中低分子量蛋白的变化。 [结果 ]服药前后患者体重、血压、血红蛋白及肾功能等各项指标均未见明显异常 (P >0 .0 5 )。 [结论 ]关木通的肾毒性可能与超量、长期、不辨证服用有关。

反相高效液相色谱法测定关木通及配伍中药中马兜铃酸A

为了全面、系统、深入地研究有毒中药关木通，采用乙腈-酸水系统，用反相高效液相色谱法分析关木通及其配伍中药中马兜铃酸A的含量，与文献方法相比，缩短了测定时间，并从总体上降低了分析成本。色谱条件是：C18柱，流速：1mL／min。检测波长：250nm。流动相：乙腈：（水＋冰醋酸）=58：42。该法精密度高，稳定性好，线性范围为0．07～0．42μg，回归方程为Y=5．0×10^6X-32827，相关系数r=0．9999，加样回收率为99．12％。实验结果表明，关木通与生地、当归、大黄、生甘草等中药配伍后，AAⅠ含量均有不同程度的降低，其中以关木通配伍生地组和大黄组最为明显，分别降低了57％和56％。

关木通不同炮制品中马兜铃酸A的含量测定及其对大鼠肾功能的急性损伤试验

目的:通过研究,探讨能显著降低关木通中马兜铃酸含量,减轻其肾毒性的炮制方法与炮制机理。方法:采用传统的炮制工艺对关木通药材进行炮制,制得29种炮制品,连同生品共30种样品,通过高效液相色谱法测定了各样品中马兜铃酸A的含量;通过大鼠急性肾损伤试验,考察了代表性样品对动物肾功能的影响。结果:石灰水煮、石灰水蒸、甘草汁煮、黑豆汁煮、小苏打水煮及滑石粉炒6种样品中马兜铃酸A的含量均有显著降低(降低幅度30%以上),其他炮制品中马兜铃酸A的含量也有一定程度的降低,但降低幅度差异较大。毒理试验结果表明,与生品相比,上述6种炮制品均能显著减轻对动物肾功能的损害,减轻程度与其中的马兜铃酸A含量似有一定的相关性。结论:以关木通为代表的含马兜铃酸中药可以通过适宜的炮制方法降低其马兜铃酸的含量,减轻其对动物肾功能的损害。