凡纳滨对虾ARMC8基因的克隆及表达

为了研究含Armadillo重复蛋白8在凡纳滨对虾抗病感染过程中所起的免疫作用,本实验采用RACE-PCR技术首次克隆得到凡纳滨对虾ARMC8基因(LvARMC8,Gen Bank注册号:KX058562)的c DNA序列全长,并利用在线软件进行生物信息学分析;采用实时荧光定量PCR(Rt-PCR)技术对LvARMC8基因在凡纳滨对虾不同组织及感染白斑综合征病毒和副溶血弧菌过程中的表达变化特征进行分析。结果显示,LvARMC8基因全长为2917bp,其中开放阅读框长2046 bp,编码681个氨基酸,5′非编码区长49 bp,3′非编码区长822 bp。预测分析显示LvARMC8编码的蛋白质含有6个ARM结构域。同源性分析发现,LvARMC8基因与内华达古白蚁ARMC8基因的相似度最高,为71%。系统进化分析结果显示,LvARMC8和多种无脊椎动物ARMC8聚为一支,其中与昆虫类动物赤拟谷盗、致倦库蚊和柑橘凤蝶的亲缘关系最近。Rt-PCR分析发现,LvARMC8基因在凡纳滨对虾多个组织中均能检测出,在表皮中表达量最高,眼柄中表达量最低。WSSV感染后12 h,LvARMC8基因在凡纳滨对虾血液中的表达量显著降低,但48 h后显著升高,72 h达到最高水平。除副溶血弧菌感染后24 h外的时间点,LvARMC8基因在凡纳滨对虾血液中的表达量均显著升高。研究表明,LvARMC8基因可能参与凡纳滨对虾抗病免疫应答途径。

Amer1/WTX与APC相互作用的新结合位点鉴定

Amer1(APC membrane recruitment protein 1)又称为WTX(Wilms’tumor X),是首个发现位于X染色体上的抑癌基因.由于其定位的特殊性,Amer1近年来成为研究的热点之一.研究表明,Amer1作为骨架蛋白在细胞内与多种蛋白(APC,β-catenin,Axin等)直接结合,在Wnt信号通路中发挥着重要功能.据报道Amer1/WTX含有3个肿瘤抑制蛋白质APC(adenomatous polyposis coli,APC)的结合位点,对于APC在细胞膜上的定位过程中发挥着重要的作用.但是,通过序列比对发现,Amer1可能存在第4个被忽略的APC的结合位点,定位于A1和A2之间.为了验证该片段能否与APC结合,分别构建了GST-Amer1(365-375)和His-APC(407-775)两种重组蛋白.通过GSTpull down,证明了这两个片段存在相互作用,并进一步通过ITC(isothermal titration calorimetry)实验测定了两者结合的亲和力.本研究结果不仅在体外证实了Amer1第4个APC结合位点的存在,也为APC和Amer1/WTX复合物的结构和功能的研究打下了良好的基础.

纤维素合酶的组成以及蛋白间的相互作用

活细胞成像技术极大地加深了人们对纤维素沉积分子机制的理解。微管细胞骨架参与影响了纤维素合酶复合物的正常分布及其组织和动力学特征。随着纤维素合酶互动蛋白1(CSI1)的最新研究发现,纤维素微纤丝和微管间的关系十分紧密。CSI1是首个与纤维素合酶复合物相关联的非CESA蛋白,这给人们今后研究纤维素合酶开辟了许多新的机会。文中综述了纤维素合酶复合物(CSCs)的组成及纤维素蛋白间的相互作用。

X连锁犰狳重复蛋白3在甲状腺乳头状癌组织的表达及其临床意义

目的探讨甲状腺乳头状癌中X连锁犰狳重复蛋白3(ALEX3)的表达及意义。方法收集郑州大学第一附属医院2018年6月至2018年9月60例甲状腺乳头状癌患者(男10例,女50例)手术新鲜癌组织及正常甲状腺组织,应用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)技术和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测甲状腺乳头状癌组织及配对正常甲状腺组织中ALEX3 mRNA和蛋白的表达,以ALEX3表达水平的中位值作为截断值,将60例甲状腺癌乳头状癌患者分为ALEX3高表达组和ALEX3低表达组。采用t检验分析甲状腺乳头状癌组织和正常甲状腺组织ALEX3表达量差异,采用χ^2检验分析ALEX3 mRNA表达水平与甲状腺癌患者临床病理学特征的相关性。结果ALEX3 mRNA在甲状腺乳头状癌组织相对表达量(2.125±0.755)显著高于正常甲状腺组织(1.156±0.426,t=8.663,P<0.05),差异有统计学意义,其表达水平与TNM分期和淋巴结转移密切相关(χ^2=5.963、15.152,P<0.05)。ALEX3蛋白在甲状腺乳头状癌组织相对表达量(0.332±0.145)明显高于正常甲状腺组织(0.204±0.132,t=2.252,P<0.05),差异有统计学意义。结论ALEX3在甲状腺乳头状癌组织中显著高表达,可能在其发生、发展中起重要作用。

ARMc8在非小细胞肺癌的表达及意义

目的探讨ARM重复蛋白8(ARMc8)在非小细胞肺癌(NSCLC)中的表达,分析其与临床病理学特点及预后的关系。方法采用免疫组化SP法检测153例NSCLC中ARMc8的表达和定位,Western blot检测ARMc8在正常支气管上皮细胞HBE和肺癌细胞A549、H1299和SPC中的表达情况。结果 NSCLC和癌旁肺组织中2ARMc8的阳性率分别为70.59%(108/153)和12.42%(19/153),两组相比具有显著性差异(χ=106.612,<0.001)。ARMc8在肺癌细胞中的表达水平显著高于HBE细胞(<0.01);ARMc8的高表达与患者的TNM分期(=0.021),淋巴结转移(=0.002)和预后(<0.001)密切相关;COX分析表明ARMc8阳性表达是影响NSCLC患者预后的独立危险因素(=0.014和=0.015)。结论 ARMc8促进NSCLC恶性进展和不良预后,是潜在的治疗靶点和预后判定指标。

结肠腺癌组织中ARMCX1的表达及临床意义

目的探讨结肠腺癌组织中ARM重复X连锁蛋白1(ARMCX1)的表达及临床意义。方法收集65例结肠腺癌患者癌组织(研究组)及其癌旁正常结肠黏膜组织(对照组),应用免疫组化染色和Western blot检测两组ARMCX1蛋白的表达,应用实时荧光定量PCR检测两组ARMCX1 mRNA的表达。分析结肠腺癌组织ARMCX1阳性表达与临床病理特征的相关性。随访5年,观察结肠癌患者生存情况。结果研究组ARMCX1阳性表达率高于对照组(53.8%vs.9.2%)(P<0.05)。研究组ARMCX1蛋白和mRNA表达高于对照组(1.15±0.21 vs.0.69±0.19和0.85±0.12 vs.0.72±0.14)(P<0.05)。发生脉管和神经累犯以及有淋巴结转移的结肠腺癌患者癌组织ARMCX1阳性表达率高于未发生者(P<0.05)。增殖指数≥25%的结肠腺癌患者癌组织ARMCX1阳性表达率高于增殖指数<25%者(P<0.05)。随访期间,存活20例,死亡42例,失访3例;死亡患者术后的生存时间为8~60(35.3±8.9)个月。与结肠腺癌组织ARMCX1阴性表达患者相比,阳性表达患者5年生存率低(P<0.05)。结论ARMCX1在结肠腺癌组织中表达增高,可能对病变形成和进展有促进作用。