乌天麻Gastrodianin基因的鉴定及其在天麻发育进程中的表达

基于相似性克隆策略和RT-PCR,从兰科植物乌天麻(Gastrodia elataf.glauca)球茎克隆得到两个新的天麻抗真菌蛋白基因,命名为gastrodianin-4A(ga4A)和gastrodianin-4B(ga4B),并首次用Northern杂交研究了该基因在植物不同部位的转录表达。结果表明,天麻个体的不同部位只转录表达同一种Gastrodianin基因,纯化自球茎的Gastrodianin蛋白质的肽质量指纹谱与推导的Ga4A和Ga4B成熟蛋白的氨基酸序列相吻合;Northern杂交证明天麻的地上器官Gastrodianin基因转录表达量远远高于地下球茎,而次生球茎皮层组织的表达量比中柱和整个营繁茎的都高一些。天麻球茎Gastrodianin的外周表达模式可能是天麻在地下抵御蜜环菌(Armillaria mellea Karst)入侵球茎皮层内部的防卫机制之一,但该基因在天麻地上部分的高丰度表达暗示Gastrodianin可能蕴藏其它生理功能。

伴栽天麻蜜环菌最佳原种培养基筛选

【目的】为筛选出伴栽天麻蜜环菌最佳原种培养基,以提高天麻产量。【方法】通过对4种伴栽天麻蜜环菌原种培养基进行比较试验。【结果】发现以枝条培养基接种后菌丝复活时间最短,平均为4.33 d,菌索生长速度为9.00mm/d,菌索长势最好,菌索长满袋时间最短,为26.33d,杂菌污染率最低为8%,培养效果优于其他3种培养基;木屑培养基、黄豆培养基和玉米粒培养基在接种后菌丝和菌索生长情况、杂菌污染率等差异均较小。【结论】综合各种因素,伴栽天麻蜜环菌最佳原种培养基为枝条培养基。

贵州蜜环菌资源的分子标记与遗传多样性分析

【目的】探明蜜环菌菌株间的遗传差异,为蜜环菌的优良资源筛选及后续研究奠定基础。【方法】收集19份贵州省天麻主产区毕节市的蜜环菌资源,筛选对贵州蜜环菌基因组DNA进行有效扩增的引物,通过生物信息学分析各蜜环菌菌株间的遗传多样性。【结果】从3对引物中筛选出对蜜环菌基因组DNA进行有效扩增的引物2对。19株蜜环菌以2#引物扩增的序列,碱基片段长度为574-667 bp,GC含量为51.79%-54.27%,A含量和T含量分别为25.21%-22.15%和22.01%-24.62%;以3#引物扩增的序列,碱基片段长度为828-925 bp,GC含量为43.01%-45.00%,A含量和T含量分别为23.82%-33.57%和23.62%-33.06%。通过序列比对、GC含量分析与聚类分析发现,贵州天麻主产区毕节市野生蜜环菌资源大部分为Armillaria gallica,少部分为Armillaria mellea。2对引物扩增所得序列的聚类结果有区别,但表现出与环境关系不密切。【结论】贵州天麻主产区各蜜环菌菌株间有一定的遗传差异,以Armillaria gallica居多。

天麻多糖与蜜环菌多糖抗眩晕症作用研究

目的研究天麻多糖(GEP)与蜜环菌多糖(AMP)抗眩晕症效果。方法由机械旋转使小鼠产生眩晕后,通过迷宫实验与跳台实验测定各组眩晕小鼠逃避电击所用时间,并观察眩晕小鼠的进食量。结果GEP与AMP活性相似,均能显著缩短眩晕小鼠逃避电击所用的时间(P<0.01),增加眩晕后小鼠的进食量。结论GEP与AMP对机械旋转所致眩晕症均具有一定疗效。

贵州8种树材对天麻蜜环菌生长的影响

为寻找更多适合天麻生产上培养蜜环菌的树材,选取桉树、天竺桂和女贞等8种贵州常见树材的枝或干作菌材接种蜜环菌,观察培养蜜环菌在生长过程中的接菌时间、色泽变化、顶端分生能力、菌索直径及其密集程度等,并对各菌材所培育出的蜜环菌菌索进行HPLC指纹图谱比较分析。结果表明:8种树材10d左右均可长出蜜环菌菌索,其色泽基本一致,幼嫩时呈黄白色或浅黄色,成熟后呈棕色,老化之前尖端都有白色的生长点,老化后呈黄褐色、深褐色或黑褐色,菌索顶端分生组织在老化前分裂能力较强;8种树材中,马尾松作为蜜环菌菌种接种菌材的菌索直径最大,天竺桂菌材最小;菌索数量,滇鼠刺菌材最多,天竺桂菌材最少;马尾松易腐烂、虫蛀。不同菌材培养的蜜环菌菌索的HPLC指纹图谱有一定的差异。8种树材中,滇鼠刺、女贞和天竺桂较适合作为培育蜜环菌的菌材。

2株优良天麻共生蜜环菌生长条件筛选

筛选出2株昭通本地天麻共生蜜环菌(SNA03、SNA04)菌索生长的最佳条件。采用单因素试验和正交试验法进行筛选,以生物量为考察指标。2株菌菌索生长的最适温度为25℃,暗培养下菌索生长速度最快;单糖(葡萄糖)为2菌株生长的最佳碳源,有机氮中的酵母膏和蛋白胨为最佳氮源,最适无机元素为K2SO4(SNA03)和KH2PO4(SNA04),最适维生素为VB2;最佳营养条件组合为葡萄糖∶酵母膏∶K2SO4(SNA03)或KH2PO4(SNA04)∶VB2=15g·L-1∶3g·L-1∶2g·L-1∶0.005g·L-)1,氮源(酵母膏)是影响菌索生长的最主要因素。来自昭通的2株天麻共生蜜环菌对营养和环境条件的要求基本一致。最佳生长条件的确定,对昭通蜜环菌快速工业化制种及天麻的大规模生产将起到一定的推动作用。

不同来源蜜环菌对天麻产量影响的研究

目的 研究不同来源的 11个蜜环菌菌株对天麻产量的影响。方法 有性繁殖 ,采用菌枝加新材的播种方法 ,一年半收获。结果 蜜环菌 A9、A1 0 伴栽的天麻产量最高 ,为 16 .14和 15 .2 3 kg/m2 。结论 不同来源蜜环菌对天麻产量具有不同的作用。

乙型蜜环菌对不同品种天麻产量及天麻素含量的影响

将同一生物学类型的乙型蜜环菌[(Armillariamellea(VahlexFr.)Earst)]接种到不同品种的天麻(Gas trodiaelataBl.)上进行栽培试验,测定天麻的生物产量和天麻素含量。发现不同天麻 蜜环菌组合对在天麻产量及天麻素含量上有显著性差异。

不同蜜环菌对天麻生物产量及天麻素含量的影响

将不同生物学类型的蜜环菌[Armillaria mellea(Vahl ex Fr.)Earst]接种到同一品种的天麻(Gastrodia elata Bl.)上进行栽培试验,测定天麻的生物产量和天麻素含量。发现不同蜜环菌——天麻组合对在天麻生物产量及天麻素含量上有显著性差异。

组织培养中天麻与蜜环菌共生机理的研究

[目的]探讨组织培养中天麻与蜜环菌的共生机理。[方法]通过用蜜环菌(Arimillia mellea)的胞内提取物、胞外提取物及活蜜环菌对天麻进行培养,分析天麻(Gastrodia elata Blume)培养前后重量变化,研究这3种添加物对天麻生长的影响作用,探讨蜜环菌与天麻在细胞培养体系中的共生机理。[结果]蜜环菌胞内提取液对天麻生长呈一定的抑制作用;蜜环菌胞外提取液对天麻生长起到了促进作用,但不如活体蜜环菌的作用大。[结论]活体蜜环菌对天麻生长的影响更大。

蜜环菌菌种分离新法——天麻组织分离法

报道了一蜜环菌菌种分离方法——天麻组织分离法,并对此法与常用分离法——菌索分离法进行比较试验。结果发现,天麻组织分离法分离成功率高(78％),远高于常用的菌索分离法(16％),且前者操作简便、难度低,所得菌种生活活力、生长形态均优于后法。

紫萁小菇等天麻种子萌发菌分离方法的研究

1979～1981年间,从天麻种子发芽的原球茎中,共分离到紫箕小菇等12种可供给天麻种子萌发营养的菌株,证明在自然条件下.天麻有性繁殖阶段,必须同化紫萁小菇等萌发菌获得营养才能发芽。

天麻原球茎生长发育与紫萁小菇及蜜环菌的关系

蜜环菌(Armillaria mellea Fr.)以菌索形态侵染天麻(Gastrodia elata Bl.)种子发芽的原球茎及营养繁殖茎,首先在皮层最内一层细胞形成菌丝通道和菌丝流,然后向内侵入大型细胞、向外侵入皮层细胞。天麻在有性繁殖阶段,靠消化侵入种胚的紫萁小菇等萌发菌获得营养而发芽,无性繁殖阶段,营养繁殖茎消化蜜环菌才能正常生长。

云南昭通天麻共生蜜环菌优良菌株筛选

研究了自云南昭通本地分离获得的4株天麻共生蜜环菌的生长特性,并与1株外地优良天麻共生蜜环菌京-234进行对比。结果显示:各菌株间存在明显差异,菌索平均生长速度依次为京-234>SNA04>SNA02>SNA03>SNA01;菌丝萌发速度、菌索分枝状况、荧光强度及暗培养18 d后菌索生物量等生长特性表现最好的为SNA04,其次为京-234,SNA01和SNA02较差。4株昭通天麻共生蜜环菌中,菌株SNA04性状最优,SNA03菌株次之。

天麻中抗真菌蛋白质的诱导和积累

前曾报告从天麻（ＧａｓｔｒｏｄｉａｅｌａｔａＢｌ，）中分离出一种对木霉菌丝生长有强抑制作用的蛋白质，命名为天麻抗真菌蛋白，简称ＧＡＦＰ，也称为Ｇａｓｔｒｏｄｉａｎｉｎ。对不同天麻材料来源的ＧＡＦＰ分析表明：ＧＡＦＰ的相对分子量为１４ｋＤ，等电点可能不同，变动范围８．１—９．３。体外抑菌试验证明ＧＡＦＰ对腐生性真菌如木霉和密环菌等有强抑制活性，半抑制浓度ＩＣ０．５为０．０８ｍｇ／ｍＬ；对寄生性真菌如棉花枯萎病和稻瘟病作用很弱。对球茎生长期中７个阶段ＧＡＦＰ的含量测定和ＧＡＦＰ免疫荧光组织定位观察证明：１．ＧＡＦＰ是营养茎被密环菌侵染诱导而后大量合成的，合成部位可能是大型细胞。２．ＧＡＦＰ由营养茎输送到顶生球茎，积累于皮层细胞中，是皮层细胞的主要蛋白成分。３．营养基衰败后，顶生球茎ＧＡＦＰ的总量下降不多，直至抽苔时转移到花茎中。结果说明ＧＡＦＰ是天麻的一种重要功能蛋白质，是使顶生球茎处于拒菌状态的主要物质。

蜜环菌研究进展

近年来天麻共生蜜环菌Armillariamellea作为一种新兴的药用真菌受到较广泛的关注,研究主要集中在蜜环菌发酵产物中活性成分、功能及在功能食品中的开发应用,而对其分类及分子系统学研究有待深入。本文概述了蜜环菌属真菌的系统学研究概况以及天麻共生蜜环菌研究的历史与现状。

天麻蜜环菌研究综述

综述了天麻蜜环菌的培养研究进展,分析了天麻与蜜环菌的共生关系,并探讨了蜜环菌对天麻产量的影响。

天麻生长过程中可溶性蛋白和多糖的累积规律

以不同来源的蜜环菌 [(Armillariamellea(Vahl.exFr.)Qu啨ｌ.) ]4个菌株分别伴栽红天麻 (GastrodiaelataBl.f.elata)、乌天麻 (GastrodiaelataBl.f.glaucaS .Chow)以及红乌杂交天麻 ,对天麻生长发育过程中可溶性蛋白和多糖含量的变化规律进行了初步研究。结果表明 ,随着天麻的生长 ,菌株M1 、M2 、M3和M4 伴栽的红天麻、乌天麻以及红乌杂交天麻中 ,其可溶性蛋白含量均在逐步增加 ;在同一生长期内 ,4个菌株伴栽的红乌杂交天麻中可溶性蛋白含量大于红天麻和乌天麻。由菌株M1 、M2 、M3和M4 伴栽的红天麻、乌天麻以及红乌杂交天麻 ,其多糖含量呈现先升高后下降的趋势 ;在同一生长期中 ,4个菌株伴栽的红天麻的多糖含量大于乌天麻和红乌杂交天麻。

蜜环菌液对天麻试管快繁的影响

试验以天麻种子萌发形成的小米麻为材料,利用正交设计研究了天麻外植体消毒方法和激素、蜜环菌液在天麻组织培养中的作用。结果表明,小米麻的最佳消毒程序为75%乙醇处理20 s+1%氯化汞浸泡5 min;最有利于小米麻分化增殖的培养基是MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.4 mg/L+蜜环菌液100 g/L。试验发现,蜜环菌液对天麻的组织培养具有良好的促进效果。

天麻营繁茎被蜜环菌侵染过程中细胞结构的变化

目的 研究天麻营繁茎被蜜环菌侵染后细胞结构的变化，及天麻整个生长期的营养来源。方法 作天麻营繁茎连续纵切片结合横切片观察；在天麻生长期切断其与菌材连接的蜜环菌索，测量新生麻生长情况。结果 蜜环菌索侵入天麻营繁茎后，分成多个分枝的菌丝通道，菌丝突破通道形成菌丝流，向外侵入皮层细胞形成菌丝结，向内直接侵入大型细胞被天麻消化作为营养；切断天麻与菌材连接的蜜环菌索，新生麻就停止生长。结论 蜜环菌索侵入天麻营繁茎后，菌丝结、突破菌丝通道的菌丝流，及大型细胞等三层细胞层呈片状环周包围了整个营繁茎，菌丝通道是天麻整个生长期营养的补给线。