三种细辛挥发性成分的比较研究

目的:分析比较同一产地华细辛、毛细辛和铜钱细辛的挥发性成分。方法:采用固相微萃取-气相色谱质谱联用技术提取三种细辛的挥发性成分并比较其组分与含量。结果:从华细辛、毛细辛和铜钱细辛中分别鉴定出59、99和85种挥发性成分,鉴定的总峰面积为82.75%～99.07%。三种细辛中检测到16种共有成分,且这些成分的含量不同。此外,三种细辛均含有独特的挥发性成分。结论:三种细辛挥发性成分在数量和含量上各有差异,为毛细辛和铜钱细辛能否替代华细辛入药提供参考依据。

高效液相色谱法测定华细辛不同部位马兜铃酸A含量

目的:检测细辛药材不同用药部位。肾毒性成分马兜铃酸 A 的含量。方法:高效液相色谱方法,采用 Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-1%冰醋酸水溶液(39:61)为流动相,流速为0.8 mL·min^(-1),检测波长为317 nm,分别测定细辛全草和根、芦头、叶柄、叶片、花5个部分马兜铃酸 A 的含量。结果:高效液相色谱方法的回收率为98.7%,马兜铃酸 A 进样量在5.2～68ng 范围内线性关系良好;细辛全草含马兜铃酸 A 16.2μg·g^(-1),根和芦头中含微量马兜铃酸 A,叶柄和叶片中有较多马兜铃酸 A,花中含量最高。结论:细辛地上部分和地下部分马兜铃酸 A 含量差别很大。

高效液相色谱法测定华细辛中马兜铃酸A含量

目的测定华细辛中马兜铃酸A的含量。方法建立高效液相色谱方法,采用Agilent Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm),以乙腈-1%冰醋酸水溶液(39:61)为流动相,流速为0.8mL·min^(-1),检测波长为317nm,分别测定20个华细辛样品中马兜铃酸A的含量。结果高效液相色谱法的回收率为98.9%,RSD为2.1%,标准曲线回归方程为y=2.40x+0.267, 在5.2～68ng内呈良好线性关系。结论华细辛中马兜铃酸A含量在6.8～45.4μg·g^(-1)。

水蒸气蒸馏法和超声辅助提取法提取华细辛挥发油的比较

采用气相色谱-质谱联用技术对水蒸气蒸馏法(SD)和超声辅助提取法(UAE)提取的华细辛挥发油化学成分分离分析。结果表明:鉴定出的24种化合物,主要有甲基丁香酚、3,5-二甲氧基甲苯、黄樟醚、十五烷、卡枯醇、3,4-(亚甲基二氧)苯丙酮、优葛缕酮、龙脑、2,4-二甲氧基-3-甲基苯丙酮、N-异丁基十二碳四烯酰胺、芝麻素。两种方法提取的挥发油成分相同,但是超声辅助提取法所得部分成分质量分数比水蒸气蒸馏法提取的高1.2～24倍,其中芝麻素和6-十八烯酸的质量分数分别相差24及21倍,表明超声辅助提取法对华细辛挥发油中热不稳定和非挥发性化合物有更好的提取效果。

华细辛气相色谱指纹图谱及药材含量测定研究

目的建立华细辛挥发油的气相色谱（GC）指纹图谱并采用内标法对α-蒎烯、莰烯和甲基丁香酚3种成分进行定量分析。方法采用水蒸气蒸馏法提取华细辛中的挥发油,利用毛细管气相色谱对其进行分析,采用DB-1石英毛细管柱（25 m×0.32 mm,0.25μm）,氢火焰离子化检测器,程序升温,流速为1m L·min^-1,进样量为1μL,分流比为10：1,内标物为丁香酚。结果获得了较为理想的华细辛GC指纹图谱,确定了19个共有峰,建立了华细辛指纹图谱的共有模式,10批样品相似度均〉0.95;α-蒎烯、莰烯和甲基丁香酚分别在0.024 0-0.768 0 mg·m L^-1、0.005 0-0.160 0 mg·m L^-1及0.066 0-2.112 0 mg·m L^-1线性关系良好,平均回收率分别为92.0%、95.6%和97.8%,RSD分别为3.7%、1.7%和2.4%。结论该方法建立的华细辛指纹图谱和3种成分的定量测定方法,可为华细辛药材的质量评价提供依据。

华细辛种质资源保护的研究

华细辛为正品细辛,是细辛的地道药材.由于过度采挖,野生资源锐减,保护华细辛种质资源迫在眉睫.选择华细辛最适宜生境种植区,确定华细辛种质标准和质量标准,建立规范化、科学化和标准化的种植标准操作规程,可达到有效成分的稳定.陕西省宁强县山区的生态环境适宜于野生华细辛生长,人工栽植已经成功,完善华细辛GAP基地建设,能有效地保护华细辛种质资源.

北细辛汉城细辛及华细辛中总马兜铃酸含量测定

目的:测定北细辛、汉城细辛和华细辛中总马兜铃酸的含量,为其临床安全用药提供实验依据。方法:以马兜铃酸A为对照,采用紫外分光光度法,检测波长为390 nm。结果:马兜铃酸A浓度在3.0~30.0μg·mL^(-1)范围内与吸收度呈良好线性关系,Y=19.844X+0.0272(r=0.9996),平均回收率为97.84%,RSD为0.97%。三种细辛中总马兜铃酸的含量为0.17%~0.35%,以汉城细辛最低,华细辛最高。结论:本方法操作简便,重复性好,精密度高,可用于细辛中总马兜铃酸的含量测定。

北细辛、华细辛、汉城细辛的急性毒性评价

目的:考察2010版中国药典中三种细辛散剂、水煎剂、挥发油的小鼠急性毒性,为临床安全合理用药提供急性毒理学依据。方法:采用Bliss法、最大给药量测定法。结果:北细辛:散剂LD50为4.8g/kg、水煎剂最大给药量为240g/kg、挥发油LD50为2.53mL/kg;华细辛:散剂LD50为7.5g/kg、水煎剂LD50为100.8g/kg、挥发油LD50为3.13mL/kg;汉城细辛:散剂最大给药量为31.2g/kg、水煎剂LD50为48.7g/kg、挥发油LD50为1.92mL/kg。结论:药典规定的三种细辛的不同制备方法和药用部位的小鼠急性毒性不同。

湖北产四种商品细辛的鉴别

对湖北产四种商品细辛的性状及显微特征进行了比较研究 ,并将其主要区别点列表说明 ,为湖北地区细辛的生产、销售及临床应用提供参考。

北细辛、华细辛驯化栽培技术要点

目的 :驯化栽培北细辛、华细辛。方法 :原山坡地环境下集中播种或移栽。结果 :保持了药材质量、增加产量。结论 :野生细辛可栽培驯化以增加产量。

细辛中金属元素含量与其功效的关系研究

通过测定细辛不同部位中十种金属元素的含量,分析金属元素与其功效的关系。采用HNO3-HCl O4（4∶1）的湿法消化法处理样品,以火焰原子吸收光谱法和氢化物原子吸收光谱法两种方法同时测定。结果表明：十种金属元素的标准曲线线性关系良好,加标回收率在90.6%~110.9%之间,精密度良好。细辛地下部分Ca、Fe含量明显高于地上部分。细辛具有祛风散寒、通窍止痛功效与其含有丰富的Ca、Fe和Mg金属元素有密切关系,为进一步开发细辛药用价值提供实验依据。

秦巴山区华细辛遗传多样性与挥发油成分分析

目的:分析秦巴山区7个不同产地华细辛的挥发性成分与遗传多样性差异。方法:ISSR法分析不同产地华细辛的遗传多样性;顶空固相微萃取-气相色谱-质谱技术分析不同产地华细辛挥发性成分的相对含量,水蒸气蒸馏-气相色谱法定量分析3种主要成分含量。结果:筛选出的6条ISSR引物共扩增出57条带,其中89.47%呈多态性,聚类分析将7个产地华细辛分为两个大类群。6个不同产地野生华细辛挥发性成分组成及含量各有差异,除含有一些相同组分外,不同产地的华细辛其根茎叶特定器官均含有一些独特成分。此外,一些成分只能在遗传距离较近的华细辛特定器官中检测到。结论:秦巴山区华细辛遗传多样性与地理距离和气候关系不密切,一些挥发油成分的积累与其遗传特性可能密切相关。

基于流式细胞术的华细辛基因组C值测定

目的建立华细辛Asarum sieboldii Miq.基因组C值的流式细胞术测定方法,估测华细辛基因组大小。方法对8种常用的细胞核解离液进行筛选,根据筛选结果,采用OTTO细胞核解离液,以华细辛幼嫩叶片为材料,以本氏烟草Nicotiana benthamiana Karel Domin为内参植物,运用流式细胞术对华细辛基因组C值进行了测定。结果华细辛基因组C值为(5.197±0.157)pg,估测华细辛基因组大小为5.083 Gb。结论该研究建立了流式细胞术测定华细辛基因组C值的方法,所得数据可为华细辛基因组学和进化生物学研究提供有益的参考。

通化县域内细辛植物资源调查研究

随着医药科学技术的发展,细辛的应用越来越广泛,这使细辛植物资源大量的消耗.为了更好的了解细辛的生长情况、地理分布、储备及生态环境,本研究通过文献查阅、实地调查、以及走访通化县居民的方法进行调查,并且针对目前该区域内细辛植物资源的状况,提出了细辛植物资源的开发、利用与保护对策。

细辛叶绿体基因组结构特征与系统进化分析

目的以细辛药材为材料,采用高通量测序和生物信息学技术组装完整的叶绿体基因组序列,明确其结构特征、系统发育位置。方法基于Illumina测序平台对细辛叶绿体基因组序列进行结构特征分析;同时,采用最大似然法(maximum likelihood,ML)构建马兜铃科的系统发育关系。结果华细辛和辽细辛叶绿体基因组全长为160521~160555 bp,表现出典型的四分体结构,且两者叶绿体基因组GC含量均为38.5%。细辛叶绿体基因组包含128个基因,其中85个蛋白质编码基因,34个t RNA基因,8个r RNA基因。此外,系统发育分析结果显示,基于完整的叶绿体基因组和蛋白编码数据集构建的拓扑树一致,细辛属物种和马蹄香属物种形成一个支持率的单系分支。结论细辛叶绿体基因组测序、组装、结构特征分析,发现其大小介于Asarum bracteolata和A.sieboldii var.seoulense之间,IR区存在rpl16、rps19、ycf1、rpl23等基因扩张,研究结果丰富了细辛属植物遗传资源,为该属物种分子鉴定、系统发育以及野生资源保护与开发利用等研究提供理论基础。

华细辛AFLP反应体系的建立和优化

目的建立优化的华细辛Asarum sieboldiiAFLP反应体系,为华细辛遗传多样性的研究提供技术支持。方法以华细辛叶片为材料,对基因组DNA提取、酶切连接、PCR扩增等操作过程中各关键因素进行分析,筛选最适条件,建立完善的AFLP反应体系。结果建立了优化的华细辛AFLP分析体系:在基因组DNA提取时,提取液中添加巯基乙醇、样品温浴时间为30 min;Tru1Ⅰ和PstⅠ的酶切时间分别为3 h;在扩增反应中,Mg2+终浓度为1.5 mmol/L、TaqDNA聚合酶用量为0.2μL。结论本反应体系可获得良好的AFLP分析结果,可用于华细辛遗传多样性研究。

基于转录组分析华细辛甲基丁香酚生物合成途径的相关基因

目的获得华细辛Asarum sieboldii转录组数据库和差异表达基因,识别华细辛甲基丁香酚生物合成相关基因。方法以华细辛地下部分(根)和地上部分(叶片)2个样本作为供试材料,采用Illumina Hiseq 4000进行转录组测序,并从头拼接,对Unigene进行功能注释和差异性分析。结果共获得12.25 Gb数据,拼接得到129 003个Unigene,可归类于52个GO分类,涉及363条KEGG代谢通路。分析发现,共有439个差异表达基因,其中上调基因占38.3%,下调基因占61.7%,差异较大;136个Unigene与苯丙素类次生代谢途径相关,其中44个Unigene参与甲基丁香酚的生物合成过程。结论本研究得到大量华细辛转录本信息,所发掘的与甲基丁香酚生物合成相关的Unigene为相关基因的分离、功能验证及其表达调控机制的阐明提供了重要依据。