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溶藻弧菌asp基因在大肠杆菌中表达活性研究及条件优化 被引量:3
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作者 蔡双虎 鲁义善 +3 位作者 吴灶和 简纪常 汤菊芬 黄郁葱 《广东海洋大学学报》 CAS 2008年第3期45-49,共5页
为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,... 为进一步研究溶藻弧菌碱性丝氨酸蛋白酶(ASP)蛋白生物学活性和功能,将构建的pET23d-asp在大肠杆菌BL21(DE3)中表达,对表达产物进行纯化分析,并优化表达条件。结果表明:在咪唑洗脱缓冲液浓度为100 mmol/L时,表达的可溶性ASP被大量洗脱,纯化的ASP相对分子质量约为42 000,具有蛋白活性;在诱导温度28℃、异丙基-β-D硫代半乳糖苷(Isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside,IPTG)浓度1 mmol/L及诱导时间16 h时,表达的活性ASP蛋白最多。 展开更多
关键词 溶藻弧菌 asp基因 基因构建 基因表达 表达条件 大肠杆菌
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基于INTERNET的水稻基因数据库信息系统 被引量:14
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作者 鄂志国 庄杰云 +2 位作者 曹永生 钱前 王磊 《中国水稻科学》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期670-672,共3页
水稻基因数据库系统是在建的国家作物科学数据共享中心的一个重要模块,也是国家水稻数据中心的一个重要子系统。功能上,该子系统提供了有关水稻基因各方面的数据信息,包括基因序列、基因产物、基因功能、参考文献等;系统设计上,基于ASP.... 水稻基因数据库系统是在建的国家作物科学数据共享中心的一个重要模块,也是国家水稻数据中心的一个重要子系统。功能上,该子系统提供了有关水稻基因各方面的数据信息,包括基因序列、基因产物、基因功能、参考文献等;系统设计上,基于ASP.NET的程序骨架使得系统在网络上运行时更快捷、更安全、更易维护。用户可通过因特网(http://gene.ricedata.cn/)对数据库进行检索操作。 展开更多
关键词 水稻 基因 数据库 asp.NET
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藏鸡和隐性白羽鸡GH基因的SNP检测及其与生长性状间的关联分析 被引量:25
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作者 李长春 傅田 +6 位作者 强巴央宗 唐晓惠 朱猛进 樊斌 熊统安 李奎 刘榜 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第11期2327-2332,共6页
利用改良等位基因特异性PCR(Modified Allele Specific PCR,M-ASP)结合PCR-RFLP以及直接测序方法对藏鸡和隐性白羽鸡生长激素(Growth Hormone,GH)基因内含子4(Intron4)的一个位点进行了SNP检测,并进行了该基因与藏鸡生长性状的关联分析... 利用改良等位基因特异性PCR(Modified Allele Specific PCR,M-ASP)结合PCR-RFLP以及直接测序方法对藏鸡和隐性白羽鸡生长激素(Growth Hormone,GH)基因内含子4(Intron4)的一个位点进行了SNP检测,并进行了该基因与藏鸡生长性状的关联分析。检测结果显示,GH基因Intron4的这个位点同时具有M-ASP和SacI-RFLP多态。测序结果表明,该位点发生了C→G的碱基突变,产生了CC、CG和GG三种基因型。两个等位基因和三种基因型在两鸡种中的分布基本一致。其中,基因型CC和等位基因C的频率最高。χ2检验结果表明,基因型频率或者等位基因频率在两鸡种之间没有显著差异(P>0.05),而分别在两鸡种内部却存在显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)差异。方差分析结果表明,基因型与藏鸡的2周龄体重等12个生长性状有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)关联;基因型CC与藏鸡的7周龄体重存在显著关联(P<0.05)。这暗示了GH基因是影响藏鸡生长的主效基因或者它与主效基因相关,而该位点的碱基突变可以作为筛选藏鸡高的7周龄体重的分子标记。 展开更多
关键词 藏鸡和隐性白羽鸡 SNP M-asp GH基因Intron4 生长性状 关联分析
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RGD-rAAV2提高卵巢癌细胞体外基因转导效率的研究 被引量:1
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作者 方光光 王迪 +1 位作者 唐良振 石文芳 《华中科技大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期209-212,共4页
目的进一步证实精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-重组腺相关病毒2(RGD-rAAV2)基因表达系统靶向卵巢肿瘤的能力。方法用流式细胞仪(FACS)检测6种卵巢癌细胞株的硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)、整合素(integrin)αvβ3和integrinαvβ5的表达;以及野生... 目的进一步证实精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-重组腺相关病毒2(RGD-rAAV2)基因表达系统靶向卵巢肿瘤的能力。方法用流式细胞仪(FACS)检测6种卵巢癌细胞株的硫酸肝素蛋白多糖(HSPG)、整合素(integrin)αvβ3和integrinαvβ5的表达;以及野生型腺相关病毒2(wt-AAV2)对上述卵巢癌细胞感染并介导基因转导的能力;通过配体竞争结合实验进一步验证突变体RGD-rAAV2基因转导的特异性。结果wt-AAV2感染不同卵巢癌细胞的能力各有不同;卵巢癌细胞表达HSPG水平差异很大,而80%卵巢癌细胞表达integrinαvβ3或(和)integrinαvβ5;RGD-rAAV2病毒载体可以有效地感染对wt-rAAV2耐受的卵巢癌细胞SKOV-3ip并介导基因的表达,该效果是非HSPG依赖性的。结论RGD-rAAV2病毒载体具有较高的卵巢肿瘤靶向性,为卵巢癌基因靶向治疗提供了一种新的策略。 展开更多
关键词 卵巢癌 精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸 腺相关病毒 基因转导
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Two sequence alterations,a 136 bp InDel and an A/C polymorphic site,in the S5 locus are associated with spikelet fertility of indica-japonica hybrid in rice 被引量:1
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作者 Qing Ji Jufei Lu +4 位作者 Qing Chao Yan Zhang Meijing Zhang Minghong Gu Mingliang Xu 《Journal of Genetics and Genomics》 SCIE CAS CSCD 2010年第1期57-68,共12页
The rice indica/japonica hybrid shows strong heterosis.However,such inter-subspecific hybrid can't be directly used in rice production due to its low spikelet fertility.The S5 locus was proved to be associated with f... The rice indica/japonica hybrid shows strong heterosis.However,such inter-subspecific hybrid can't be directly used in rice production due to its low spikelet fertility.The S5 locus was proved to be associated with fertility of indica/japonica hybrid and its S5n allele from wide-compatibility variety (WCV) is capable to overcome fertility barrier.In the present study,we reported the causal sites in the S5 locus responsible for compatibility of indica/japonica hybrid.Fine-mapping of the S5 locus using the 11 test-cross families pinpoints a candidate S5 locus encoding aspartic protease (Asp).Intragenic recombination within the Asp gene happened in a number of recombinants,resulting in chimeric S5j-S5n alleles.Just like S5n,the chimeric S5j-S5n allele displayed higher spikelet fertility when combined with the S5i allele.In the complementary test,however,the S5n allele from WCVs failed to enhance fertilities of the indica/japonica hybrids.Compared to both indica and japonica varieties,all nine WCVs from different resources are characterized with a 136 bp deletion in the Asp N-terminus,which probably renders the S5n allele non-functional.Furthermore,an A/C polymorphic site is detected 1,233 bp downstream of the Asp start codon.The heterozygous A/C site of the Asp gene in indica/japonica hybrid is believed to be the casual factor to cause partial sterility.The functional makers based on the two polymorphic sites will be broadly used in developing wide-compatibility rice varieties. 展开更多
关键词 RICE wide-compatibility indica/japonica hybrid asp gene
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DDX43基因与肿瘤 被引量:2
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作者 陈芹 林江 钱军 《国际肿瘤学杂志》 CAS 2015年第2期115-117,共3页
DEAD盒多肽43(DDX43)基因在肿瘤细胞恶性增殖、肿瘤细胞耐药及肿瘤免疫治疗方面发挥着重要作用。DDX43基因在多种实体瘤和某些血液系统恶性肿瘤中表达增高。DDX43基因启动子低甲基化出现于慢性髓系白血病、急性髓系白血病和骨髓增生... DEAD盒多肽43(DDX43)基因在肿瘤细胞恶性增殖、肿瘤细胞耐药及肿瘤免疫治疗方面发挥着重要作用。DDX43基因在多种实体瘤和某些血液系统恶性肿瘤中表达增高。DDX43基因启动子低甲基化出现于慢性髓系白血病、急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征,并且与DDX43高表达和疾病的预后相关。 展开更多
关键词 肿瘤 基因表达 甲基化 DEAD盒多肽43
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KIT基因单核苷酸多态性与四川地区男性不育的相关性研究 被引量:3
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作者 张敏 丁显平 +3 位作者 朱一剑 沈梦捷 冉静 付莉 《四川大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期961-966,共6页
基于Luminex平台,应用多重等位基因特异性引物延伸反应(allele-specific primerextension,ASPE),对130例无精症、严重少精症患者与115例男性可育对照者KIT基因的4个单体型标签SNPs(haplotype tagging SNP):rs3819387、rs3796768、rs2237... 基于Luminex平台,应用多重等位基因特异性引物延伸反应(allele-specific primerextension,ASPE),对130例无精症、严重少精症患者与115例男性可育对照者KIT基因的4个单体型标签SNPs(haplotype tagging SNP):rs3819387、rs3796768、rs2237023、rs12646437的基因型进行检测并做关联分析.结果显示病例组与对照组中rs3819387、rs3796768、rs2237023、rs12646437位点基因型频率分布均符合Hardy-Weinberg平衡定律;病例组与对照组KIT基因4个htSNP位点的基因型频率、基因频率及单倍体型差异均无统计学意义(p>0.05),即KIT基因单核苷酸多态性与四川地区汉族男性不育没有相关性,提示其可能不是四川地区汉族男性不育的遗传易感因素. 展开更多
关键词 男性不育 单核苷酸多态性 aspE KIT基因
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沉默CITED1基因对甲状腺乳头状癌K1细胞生物学特性的影响 被引量:1
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作者 王英 庞华 +3 位作者 黄欢 刘倩 李佳 张磊 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期840-846,900,共8页
目的:探讨沉默CITED1(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1)基因表达对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、凋亡和迁移等生物学行为的影响。方法:将携带特异性靶向CITED1基因的shRNA(CITED1-shRNA... 目的:探讨沉默CITED1(Cbp/p300 interacting transactivator with Glu/Asp rich carboxy-terminal domain 1)基因表达对甲状腺乳头状癌K1细胞增殖、凋亡和迁移等生物学行为的影响。方法:将携带特异性靶向CITED1基因的shRNA(CITED1-shRNA)及其阴性对照shRNA(negative control-shRNA,NC-shRNA)的重组慢病毒分别感染甲状腺乳头状癌K1细胞株,采用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法检测CITED1基因沉默效率;然后采用CCK-8法检测细胞增殖,FCM法检测细胞周期和细胞凋亡,划痕愈合实验检测细胞迁移能力。结果:经携带CITED1-shRNA的重组慢病毒感染后,甲状腺乳头状癌K1细胞中CITED1 mRNA和蛋白的表达水平均明显降低(P值均<0.01),证明成功获得了CITED1基因沉默的K1细胞株。沉默CITED1基因表达后,K1细胞的增殖能力明显降低(P <0.01),细胞凋亡率明显升高(P=0.001),G0/G1期细胞所占比例明显增高(P=0.007),G2/M及S期细胞所占比例均明显降低(P值均<0.05),而且12 h和24 h时细胞迁移能力明显减弱(P值均<0.01)。结论:沉默CITED1基因表达可以抑制甲状腺乳头状癌K1细胞的增殖和迁移,促进肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 甲状腺肿瘤 RNA干扰 细胞凋亡 细胞增殖 基因 CITED 1
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RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子的体外实验研究
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作者 唐锋 管珩 +6 位作者 刘昌伟 李拥军 郑月宏 李晓慧 鲍军波 唐丽娜 宋存先 《国际生物医学工程杂志》 CAS 北大核心 2009年第3期129-132,I0001,共5页
目的将Arg—Gly—Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(CH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率。方法以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙... 目的将Arg—Gly—Asp(RGD)肽偶联到壳聚糖(CH)材料表面,并制备成包载质粒DNA的纳米粒子,以未偶连RGD的壳聚糖载质粒DNA作为对照,进行体外内皮细胞转染,观察其是否能提高对内皮细胞的转染效率。方法以1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(EDC)和N-羟基丁二酰亚胺(NHS)为偶联剂,通过酰胺键将RGD肽偶联到壳聚糖表面,对其进行表征,并以未偶连RGD的壳聚糖作为对照,制备载pEGFP-C1质粒DNA纳米粒子,比较2者对Hy926细胞的转染效率。结果壳聚糖-RGD(CH-RGD)载基因纳米粒子转染Hy926细胞的效率明显高于未偶连RGD的壳聚糖载基因纳米粒子(35.7%VS14.3%.P〈0.001)。结论RGD肽表面修饰壳聚糖载基因纳米粒子可用于体外细胞转染,其对细胞的转染效率明显优于未偶连RGD的壳聚糖。 展开更多
关键词 RGD肽 壳聚糖 纳米粒子 基因载体
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