甘草对慢性小鼠哮喘模型气道炎症及外周血Th_1/Th_2失衡的影响

目的:探讨甘草对慢性小鼠哮喘模型气道炎症及外周血Th1/Th2失衡的影响。方法:用卵蛋白致敏建立慢性小鼠哮喘模型,观察甘草对肺组织形态学影响,用ELISA法检测外周血肿瘤坏死因子-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)的水平变化。结果:与哮喘组小鼠相比较,甘草治疗后小鼠肺组织的炎症病理变化减轻,血清IFN-γ水平升高,IL-4水平降低。结论:甘草能有效抑制慢性哮喘产生的气道炎症,具有调节免疫平衡作用。

射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型IL-17A及IL-17F表达的影响

目的:探讨射干麻黄汤对急性哮喘小鼠模型肺组织及血清中IL-17A及IL-17F表达的影响,以近一步阐明其治疗哮喘的作用机制。方法:选取60只SD小鼠随机分为6组,分别为空白对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、地塞米松对照组(F组)、射干麻黄汤高、中、低浓度组(C、D、E组)。显微镜镜下观察经HE染色的肺组织的病理性改变,哮喘小鼠血清检测IL-17A及IL-17F水平,肺组织中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的水平采用逆转录-聚合酶链反应法检测。结果:小鼠肺组织中B组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA的表达量均明显高于A组(P<0.01)。与B组比较,C、D、E组BALF中IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平降低(P<0.05),且C组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量下降最为明显。C组与F组IL-17A mRNA及IL-17F mRNA表达量相接近。小鼠血清中IL-17A及IL-17F水平变化与小鼠肺组织IL-17A mRNA及IL-17F mRNA水平变化趋势基本相同。结论:射干麻黄汤可能是通过降低IL-17A及IL-17F细胞因子的分泌,来起到治疗哮喘的目的。

滴鼻和雾化两种不同激发方式对小鼠支气管哮喘模型气道炎症的影响

目的探讨滴鼻和雾化两种不同激发方式对小鼠支气管哮喘模型气道炎症的影响,为研究和优化支气管哮喘动物模型提供实验和理论依据。方法选择鸡卵清蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠,分别采用滴鼻和雾化两种不同方式进行激发,复制哮喘模型,观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞总数和细胞分类计数,ELISA方法检测BALF上清中IL-4、IL-13含量,常规病理切片苏木精-伊红(HE)染色观察肺内炎症情况。结果滴鼻组小鼠BALF中白细胞总数最高,其次为雾化组小鼠;且滴鼻组小鼠嗜酸性粒细胞总数及中性粒细胞总数亦明显高于雾化组与正常组,差异有统计学意义(P<0.05)。滴鼻组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平明显高于雾化组与正常组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05);雾化组小鼠BALF中IL-4、IL-13水平高于正常组小鼠,差异有统计学意义(P<0.05)。滴鼻组肺组织炎症反应最明显,并可见上皮细胞破坏,杯状细胞增生,支气管和血管周围有大量炎症细胞浸润,以嗜酸性粒细胞和淋巴细胞为主。雾化组炎症程度较轻,正常对照组无明显炎症改变。结论雾化吸入和经鼻滴入的激发方式都可以成功制作出支气管哮喘模型,经鼻滴入方式可以引起肺部更加明显的炎症浸润及细胞因子表达,为哮喘研究提供更好的选择。

尘螨粗提浸液致敏小鼠的方法学研究

目的建立尘螨过敏性哮喘小鼠模型,比较不同致敏方式在相同尘螨粗提浸液(CDM)激发下的结果,评价CDM哮喘模型。方法 C57BL/6小鼠随机分成5组,各组分别采用不同的致敏程序致敏,试验第15～18天采用相同剂量与方式的CDM浸液激发。对照组致敏与激发均以磷酸盐缓冲液替代过敏原。从症状、肺泡灌洗液(BALF)的白细胞介素(IL-4)与干扰素-γ(IFN-γ)水平及细胞计数与肺组织病理方面进行评估。结果各模型组从症状,组织病理,BAIF细胞计数、分类(细胞总数增加,其中嗜酸性粒细胞所占比例增大,与对照组比较,P<0.05)及细胞因子检测(IL-4与对照组比较,P<0.05)等均表现出了过敏性哮喘的特点。但是模型组间细胞因子差异无统计学意义。结论各模型组均能够建立小鼠过敏性哮喘模型,证明了CDM的免疫耐受与常规过敏原不同,同时验证了抗原间可能存在协同作用。

黄芪多糖对哮喘小鼠气道炎症启动因子TSLP和DCs表达的影响

目的研究黄芪多糖(APS)对支气管哮喘模型小鼠气道上皮中胸腺间质淋巴细胞生成素(thymic stromal lymphopoietin,TSLP)和树突状细胞(dendritic cell,DCs)表达的影响。方法饲养雌性BALB/c小鼠30只,随机将其分为对照组、哮喘模型组和黄芪多糖组,各组采取相应的干预措施。通过支气管哮喘激发试验、肺组织病理学和酶联免疫吸附试验(ELISA)评价哮喘模型造模是否成功;肺组织中TSLP mRNA的相对表达水平采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测;蛋白免疫印迹实验(Western blot)检测肺组织中TSLP蛋白的表达;流式细胞术检测支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)中DCs表面CD40、CD80和CD86的表达水平。结果哮喘模型组小鼠气道反应性增高和肺组织HE染色结果均为哮喘的典型表现且哮喘模型组BALF中IL-13、IL-5和IL-4的表达水平显著高于黄芪多糖组和对照组(P<0.001);黄芪多糖组和对照组小鼠肺组织中TSLP mRNA的表达水平与哮喘模型组相比较低(P<0.001),TSLP mRNA的表达水平在黄芪多糖组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05);黄芪多糖组与对照组小鼠肺组织中TSLP蛋白的表达与哮喘模型组相比较弱;黄芪多糖组与对照组BALF中DCs表面CD54、CD80、CD86的表达明显低于哮喘模型组(P<0.001),黄芪多糖组与对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论黄芪多糖可明显抑制哮喘模型小鼠气道上皮细胞TSLP水平和DCs表面CD54、CD80、CD86的表达,并减轻气道炎症反应。

小鼠哮喘模型胸腺中胸腺基质淋巴生成素、Foxp3的表达及调节

目的通过建立小鼠哮喘模型,探讨胸腺在过敏性疾病发病机制中的作用,以及胸腺肽干预哮喘模型的作用和可能的机制。方法40只小鼠随机分为哮喘模型组、卵清蛋白(OVA)+胸腺肽组、对照组和胸腺肽组,每组各10只。①采用OVA腹腔注射和超声雾化吸入建立BALB/c小鼠哮喘模型;②通过血清总IgE水平和肺组织病理学检查评价哮喘模型;③用Real-time PCR检测哮喘模型和胸腺肽干预下,小鼠肺组织和胸腺中胸腺基质淋巴生成素(TSLP)以及胸腺Foxp3 mRNA表达变化,并通过血清总IgE水平和肺组织病理学评价胸腺肽干预下哮喘模型的过敏状态。结果①哮喘模型组与对照组相比,血清总IgE浓度明显增高,肺组织病理学检查示气道炎症明显,胸腺和肺组织TSLP mRNA表达均显著增高,胸腺Foxp3 mRNA表达显著降低;②OVA+胸腺肽组肺组织病理学检查示气道炎症减轻,胸腺TSLP mRNA表达显著低于哮喘模型组。结论①OVA哮喘模型胸腺TSLP mRNA的表达水平上调、Foxp3 mRNA的表达水平下调,提示OVA可影响中枢性免疫器官——胸腺;②OVA哮喘模型引起胸腺Foxp3 mRNA表达降低,提示胸腺功能的改变可能与过敏性疾病的发生有关;③胸腺肽可改善过敏状况,其作用机制至少部分是通过胸腺而发挥。

小鼠过敏性哮喘模型的研究进展及评价

支气管哮喘(简称哮喘)是常见的慢性病,随着过敏患者的增加,小鼠过敏性哮喘模型的研究越来越重要。本文通过对近年来国内外小鼠过敏性哮喘的实验研究文献进行总结,从实验小鼠的选择、制备模型的方法及模型的评价指标等方面进行综合分析,为进一步开展哮喘研究提供帮助。

树突状细胞免疫受体是治疗哮喘的新靶点

目的探讨树突状细胞(dendritic cells,DCs)表面表达的Ⅱ型膜蛋白——树突状细胞免疫受体(dendritic cells immunal receptor,Dcir)在哮喘中的作用。方法使用卵清蛋白(OV-albumin,OVA)同时诱导Dcir-/-小鼠和野生型小鼠发生哮喘,通过对比2种小鼠模型气管中嗜酸性粒细胞的浸润、血清中抗体的产生、肺的病理表现和淋巴结细胞中Th2细胞因子的释放,来阐明Dcir在哮喘中的作用。为了证明Dcir在哮喘中的作用是通过DC细胞介导的免疫应答而非直接影响T细胞免疫实现的,我们使用含有OVA特异性T细胞受体的转基因小鼠DO11.10与DO11.10×Dcir-/-小鼠进行对比;并通过体外实验验证了Dcir缺失对na觙ve T细胞产生Th2细胞因子以及conventional DC(cDC)和plasmacytoid DC(pDC)增殖速度的影响。结果在OVA诱导的小鼠哮喘模型中,Dcir-/-小鼠气管内嗜酸性粒细胞的浸润较野生型小鼠亢进;Dcir-/-小鼠血清中抗体的产生较野生型小鼠增加;肺部的病理结果显示,相对于野生型小鼠,Dcir-/-小鼠的肺部有更多的浸润细胞、黏液分泌和更为严重的气管纤维化;Dcir-/-小鼠淋巴结细胞释放的Th2细胞因子较野生型小鼠升高。在诱导DO11.10和DO11.10×Dcir-/-小鼠的哮喘模型时,两者的各项指标之间没有明显差异,说明Dcir参与的哮喘恶性化是通过DC细胞介导的免疫应答实现的。在DC细胞与抗原和na觙ve T细胞共同培养的过程中,Dcir-/-小鼠来源的DC细胞诱导了更多的Th2细胞产生。在将骨髓细胞(BMC)诱导为cDC和pDC的体外实验中,Dcir-/-小鼠对GM-CSF的信号和Flt-3 ligand的信号感受性均增强,从而诱导出了比野生型小鼠更多的cDC和pDC。结论 Dcir-/-小鼠增加了OVA诱导的哮喘模型的恶性度。Dcir-/-小鼠对哮喘模型恶性度的增加是由过度增殖的DC细胞介导的免疫应答而并非直接影响T细胞的感受性。在哮喘模型中Dcir通过抑制树突状细胞对GM-CSF和对Flt-3 ligand的信号感受性,从而降低哮喘模型中DC细胞的分化增殖能力和Th2免疫应答。Dcir的配体有可能作为一种治疗哮喘的新药物获得应用。

不同品系小鼠肥胖哮喘模型建立及比较

目的建立并比较不同品系小鼠营养性肥胖哮喘模型。方法选用KM、C57BL/6J、BALB/c3个品系♀小鼠,随机分为对照组、哮喘组、肥胖组、肥胖哮喘组,分别以高脂饲料或普通饲料饲喂12周后,以卵清蛋白(OVA)或磷酸盐缓冲液(PBS)致敏激发小鼠,实验终点测定小鼠体重、身长、脂肪重量、肝脏重量、Lee's指数、血清总胆固醇(TC)及甘油三酯(TG)水平、支气管肺泡灌洗液(BALF)中OVA特异性IgE浓度。观察各组脂肪细胞形态及气道病理学改变。测定各组小鼠的特殊气道阻力(sRaw)。结果 KM肥胖组体重及Lee's指数增长最快,但哮喘特征性表现不明显;C57BL/6J小鼠能形成哮喘特征性表现,但肥胖相关指标差异无显著性;BALB/c肥胖组小鼠肥胖指标较之正常组差异有显著性。经OVA致敏激发后,BALB/c小鼠显示出更加明显的哮喘症状、气道高反应性和气道炎症表现。结论 BALB/c小鼠经高脂饲料诱导,OVA致敏激发能形成良好的肥胖合并哮喘模型。

烟曲霉提取物诱导小鼠哮喘模型的建立

目的:探讨小鼠哮喘模型建立的方法,为开展哮喘发生机制或药物治疗研究奠定基础。方法:40只,SPF级C57BL/6小鼠,雌雄各20只,随机分成对照组和模型组两组。模型组小鼠采用气管滴注烟曲霉提取物,隔天给药,对照组小鼠采用无菌0.9%氯化钠溶液气管滴注。给药21天后,最后一次给药24小时后收取肺泡灌洗液,离心后灌洗液上清检测炎症因子水平,灌洗细胞做Giemsa染色分类计数;取左肺做AB-PAS染色,右肺提取mRNA;腹主动脉取血ELISA检测Ig E水平。结果:与对照组相比,模型组小鼠可见典型的哮喘症状,肺泡灌洗液中炎症细胞总数、嗜酸性粒细胞和中性粒细胞较对照组显著增多,肺泡灌洗液IL-3、IL-4、IL-5、IL-6及IL-17表达上调,与对照组相比分别为P<0.05和P<0.01。血清Ig E较对照组明显增加[(23.84±3.65)vs.(6.22±1.06)mg/L,P<0.01];AB-PAS染色黏液分泌较对照组明显加重。结论:烟曲霉提取物气管滴注可成功诱导小鼠哮喘模型。

平喘方对哮喘急性发作期小鼠MMP-9、TIMP-1、E-cadherin及CollagenⅠ的影响

目的通过检测小鼠肺组织中基质金属蛋白酶9(MMP-9)、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、Ⅰ型胶原(CollagenⅠ)的蛋白表达水平,探讨平喘方对哮喘急性发作期小鼠气道重塑的作用机制。方法将40只Balb/c雄性小鼠按随机数字表分为空白组、模型组、地塞米松组、平喘方组,每组10只。除空白组外,其余组均采用OVA"致敏+激发"建立哮喘模型。灌胃给药干预1周后,采用Masson染色观察肺组织病理变化,ELISA法检测血小板衍生生长因子(PDGF)水平,Western blot法检测MMP-9、TIMP-1、E-cadherin、CollagenⅠ蛋白含量。结果空白组可见少许淡蓝色胶原纤维,胶原容积分数(CVF)最小,与空白组比较,模型组胶原纤维面积明显增多(P<0.01),颜色更深;与模型组比较,地塞米松组、平喘方组小鼠胶原纤维面积明显较少(P<0.01)。与空白组比较,模型组小鼠PDGF因子水平、MMP-9、TIMP-1、CollagenⅠ蛋白表达水平显著上升(P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平显著降低(P<0.01);与模型组比较,地塞米松组及平喘方组小鼠PDGF因子水平、TIMP-1、CollagenⅠ均显著下降(P<0.01,P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平均显著上升(P<0.01),地塞米松组MMP-9蛋白表达水平显著升高(P<0.01),平喘方组MMP-9蛋白水平升高,但不显著(P>0.05)。结论在哮喘急性发作期,平喘方可通过抑制PDGF的释放,降低MMP-9、TIMP-1、CollagenⅠ的表达以及上调E-cadherin的表达来缓解气道重塑,从而发挥哮喘治疗作用,为化痰药与祛瘀药相配治疗哮喘提供了理论依据。

小鼠嗜酸粒细胞性支气管炎模型与哮喘模型的蛋白组学差异表达分析

【目的】探讨小鼠嗜酸粒细胞性支气管炎模型（EB模型）与哮喘模型的蛋白组学差异表达。【方法】EB模型小鼠（实验组）、哮喘模型小鼠（哮喘组）及对照组小鼠各4只，取肺组织提取总蛋白质，采用基质辅助电离解析飞行时间质谱对蛋白质进行序列分析，并比较三组肺组织蛋白差异。【结果】双向电泳图像显示三组肺组织蛋白表达比较差异有显著性（P＜0．05），经质谱检测肽质量指纹谱与标准分子量、等电点对照分析鉴定出20个蛋白，分别为谷胱甘肽-S-转移酶 M1（GSTM1）、热休克蛋白 B1（HSPB1）等，其中 GSTM1在哮喘组表达下调、HSPB1在哮喘组表达上调。【结论】GSTM1、HSPB1等可能参与气道高反应性的发生机制。

甲醛暴露时间延长加剧小鼠哮喘模型肺氧化损伤并促进IL-17表达

为了探究不同暴露时间甲醛对小鼠哮喘模型肺氧化应激及IL-17表达的影响,用浓度为3.0 mg·m^(-3)的甲醛气体吸入染毒,同时将48只雄性Balb/c小鼠随机分为6组:(1)对照组(生理盐水组);(2)ovalbumin(OVA)致敏组;(3)0.5 h甲醛+OVA组;(4)1h甲醛+OVA组;(5)1.5 h甲醛+OVA组;(6)2 h甲醛+OVA组,以不同时间长度进行甲醛暴露,连续35 d。OVA致敏组、0.5 h甲醛+OVA组、1 h甲醛+OVA组、1.5 h甲醛+OVA组、2 h甲醛+OVA组均在第11、18及25天腹腔注射OVA致敏液(5 mg OVA+175 mg Al(OH)_3+30 mL生理盐水),第29~35天(共计1周)进行1%OVA雾化(30 min·d^(-1)),每日1次,诱发哮喘。第36天进行以下操作:取肺组织测定肺系数并制作肺匀浆,检测肺组织中活性氧自由基(ROS)、丙二醛(MDA)和还原型谷胱甘肽(GSH)的含量,并采用ELISA法检测肺组织中IL-17的水平。同时,采用HE染色法观察小鼠肺部气道的病理学变化。结果显示,在浓度为3.0 mg·m^(-3)的甲醛气体吸入染毒条件下,与对照组相比,1.5 h甲醛+OVA染毒组、2 h甲醛+OVA染毒组ROS、MDA、IL-17含量上升,具有统计学意义(P<0.01)。同时,随着暴露时间长度的增加,小鼠肺部气道出现明显病理学变化。综上所述,每天2 h甲醛+OVA染毒能对小鼠肺造成损伤并恶化OVA对小鼠肺的损伤,产生炎症反应,并通过氧化应激反应介导。

呼吸道合胞病毒诱发的哮喘小鼠模型的建立

[目的]探讨建立呼吸道合胞病毒诱发的哮喘小鼠模型的方法,为研究哮喘发病机理、筛选有效的治疗药物奠定基础。[方法]随机将BALB/C小鼠分成正常对照和模型组两组。用福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒(FI-RSV)致敏、激发模型组小鼠,观察激发后小鼠的哮喘症状;分别于激发后0、24、48、72h处死动物,摘眼球取血分离血清,ELISA测定血清IgE、IL-4、IFN-γ水平;取肺组织行HE染色,观察支气管黏膜及黏膜下炎症细胞浸润及EOS的浸润情况。[结果]模型组小鼠激发即刻可见典型的哮喘症状。激发后24h肺组织炎症细胞浸润最多。模型组小鼠血清IgE、IL-4水平均低于正常对照组;IFN-γ均高于正常对照组;模型组小鼠激发后24h血清IgE、IL-4水平最高,IFN-γ水平最低(P<0.05或P<0.01)。结论:FI-RSV复制BALB/C小鼠哮喘模型成功可行,且24h小鼠哮喘模型较理想。

中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的影响及机制

目的:观察中药蓝玉簪颗粒对慢性哮喘小鼠气道重建的抑制作用并探讨其机制.方法:将32只雌性BABL/c小鼠随机分成正常对照组(A组),慢性哮喘模型组(B组),蓝玉簪颗粒组(C组,1.0g生药/3.0kg体质量)和地塞米松干预组(D组,2.0mg/kg),以卵白蛋白(OVA)腹腔注射致敏并长期雾化吸入制备小鼠慢性哮喘模型.苏木素-伊红(HE)染色观察小鼠肺组织一般病理学改变;阿尔辛蓝-过碘酸-希夫氏(AB-PAS)染色观察气道上皮杯状细胞增生、黏液分泌情况;天狼猩红(SR)染色观察气道壁胶原沉积并检测肺组织羟脯氨酸(HYP)含量以评价气道上皮下纤维化,采用免疫组化半定量法测定气道壁转化生长因子β1(TGF-β1)含量.计算机图像分析软件测定气道外、内径比值(Po/Pi),气道壁厚度和面积(Awt,Aaw)以及TGF-β1免疫组化阳性染色面积与气道基底膜周径(Pbm)比值(如Awt/Pbm,TGF-β1/Pbm)等.结果:B组小鼠气管及血管周围大量炎性细胞浸润,气道黏膜上皮增生,气道黏液高分泌及气道上皮下胶原沉积增多,气道壁TGF-β1表达增强;Po/Pi,Awt/Pbm,Aaw/Pbm以及TGF-β1/Pbm,肺组织HYP含量等所有指标均显著增高.C组与B组之间比较差异均有统计学意义(P<0.01);C组与A,D组比较差异具有统计学意义(P<0.05).TGF-β1的表达与肺组织HYP含量呈显著正相关(rs=0.669,P<0.01).结论:中药蓝玉簪颗粒可以抑制慢性哮喘小鼠气道炎症及气道重建,其机制可能与抑制TGF-β1表达有关.

小鼠哮喘模型肺组织中STAT1活性变化及其对ICAM-1表达的影响

目的探讨信号转导和转录激活子1(signal transducers and activators of transcription 1,STAT1)DNA结合活性在小鼠哮喘模型的肺组织中不同时间点的变化及其对细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule-1,ICAM-1)表达的调控作用。方法用鸡卵白蛋白(OVA)抗原溶液腹腔注射致敏,雾化吸入激发制备哮喘小鼠模型,造模后凝胶迁移滞留试验(EMSA)的方法测定病变肺组织中STAT1 DNA结合活性在模型组不同时间点(8h、24h、48h、96h、7d)的变化;PCR法测定ICAM-1mRNA在上述时间点的表达,设生理盐水对照组。设生理盐水对照组为0h时间组。结果造模后肺STAT1明显活化,96h达到最高峰;ICAM-1mRNA与蛋白表达在8h开始有所增加,96h达高峰。STAT1 DNA结合活性及ICAM-1表达呈高度正相关。对照组则无明显改变。结论哮喘模型的病变肺组织STAT1 DNA结合活性的持续与异常升高,STAT1参与鸡卵白蛋白诱导的小鼠哮喘的发生和发展;ICAM-1在模型的不同时间点表达增加,可能受到STAT1调控。

藜草花粉特异性致敏哮喘动物模型的制备

目的:建立藜草花粉粗制变应原诱导的小鼠变态反应气管炎症动物模型。方法:制备藜草花粉粗制变应原,将40只BALB/c小鼠,分为:1空白对照组、2低剂量组、3中剂量组、4高剂量组,每组10只。分别通过HE染色观察小鼠肺部炎症和黏液分泌;观察支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和细胞分类;用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测BALF、脾组织匀浆上清的IL-4、IFN-γ和血清抗原特异的IgE、IgG1抗体。结果:随着抗原浓度的升高肺部病理改变呈明显的变态反应炎症;BALF中的细胞总数、巨噬细胞数、EOS计数、IL-4、血清抗原特异性IgE抗体、IgG1抗体也逐步升高并明显高于空白对照组(P<0.05);BALF、脾组织匀浆上清的IFN-γ与空白对照组相比却反而下降(P<0.05)。结论:藜草花粉成功构建小鼠变态反应气道炎症动物模型。

自血穴位注射对哮喘小鼠肺组织Bcl-2及Fas表达的影响

【目的】观察自血穴位注射对哮喘小鼠肺组织凋亡抗原Fas与抗凋亡抗原Bcl-2表达的影响。【方法】选用BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、模型组、生理盐水穴位注射组、自血穴位注射组、地塞米松组;除正常对照组外,其他组均采用卵蛋白注射致敏加超声雾化吸入法复制哮喘模型;自血穴位注射组采用自体血注射两侧定喘穴,每穴0.1 mL,生理盐水穴位注射组则以生理盐水代替注射,地塞米松组以0.5 mg/kg剂量腹腔注射,均隔天1次,1周为1个疗程。采用免疫组化法观察各组小鼠肺组织Fas与Bcl-2表达,并观察各组小鼠肺组织病理形态变化。【结果】模型组Fas与Bcl-2的面密度均显著升高(P<0.05或P<0.01);自血穴位注射组与地塞米松组均可显著升高Fas面密度,降低Bcl-2面密度,与模型组比较差异均有显著性意义(P<0.05),而2组间比较差异无显著性意义(P>0.05);生理盐水穴位注射组与模型组比较差异无显著性意义(P>0.05)。自血穴位注射组可一定程度改善哮喘小鼠的肺组织病理形态变化。【结果】自血穴位注射疗法治疗哮喘的作用可能与上调哮喘小鼠肺组织Fas表达,下调Bcl-2表达,促进炎症细胞凋亡,改善气道炎症有关。

他克莫司滴鼻治疗过敏性哮喘小鼠的实验研究

目的探讨免疫抑制剂他克莫司(tacrolimus)滴鼻疗法对过敏性哮喘小鼠的治疗效果和机制。方法将24只雌性BALB/c小鼠随机分为4组,分别为阴性对照组(A组)、模型对照组(B组)、低剂量治疗组(C组)和高剂量治疗组(D组)。除A组外,其他各组在第0、7和14天分别用50μg粉尘螨变应原提取液+2 mg氢氧化铝腹腔注射小鼠致敏,A组腹腔注射等量生理盐水。自第28天开始,乙醚麻醉小鼠后,A、B、C和D组分别用100μl生理盐水、PBS、0.01%他克莫司和0.1%他克莫司滴鼻治疗,连续治疗7 d,1次/d,每次治疗同时用50μl(1 mg/ml)粉尘螨变应原滴鼻激发1次。末次激发后24 h,检测小鼠的气道高反应性;末次激发后48 h,处死小鼠,行支气管肺泡灌洗,无菌摘取肺组织和脾脏。记录支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和嗜酸粒细胞数。ELISA法检测BALF和脾细胞培养上清的白介素4(IL-4)、IL-5和γ干扰素(IFN-γ)水平。通过苏木素-伊红染色(HE)和阿尔辛蓝(AB)染色观察小鼠肺部炎症和杯状细胞黏液分泌情况。结果与B组相比,D组气道高反应性显著降低(P<0.05),肺部病理改变(炎症细胞浸润和黏液分泌)明显减轻。D组的BALF中细胞总数[(29.9±5.2)×104/ml](P<0.05)和嗜酸粒细胞数[(4.3±0.8)×104/ml](P<0.01)均比B组[分别为(59.3±6.0)×104/ml和(22.7±5.7)×104/ml]显著减少。D组BALF中IL-4[(22.49±4.96)pg/ml](P<0.05)、IL-5[(43.90±13.15)pg/ml](P<0.01)和IFN-γ[(10.17±1.09)pg/ml](P<0.05)均显著低于B组[分别为(57.02±7.38)、(133.49±15.63)和(15.32±3.23)pg/ml]。D组的脾细胞培养上清中IL-4[(22.54±4.58)pg/ml]、IL-5[(36.31±20.85)pg/ml]和IFN-γ[(11.28±1.79)pg/ml]亦显著低于B组[分别为(56.34±6.21)、(72.32±6.23)和(18.82±1.88)pg/ml](均P<0.05)。整个实验中,C组与B组均无明显差异。结论他克莫司对粉尘螨致敏小鼠具有一定免疫治疗作用,可能与其抑制T淋巴细胞因子分泌有关。

BALB/c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型的建立与评价

目的建立BALB/c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型并进行评价。方法采用腹腔注射与皮下注射卵清白蛋白(OVA)致敏、雾化吸入OVA激发的方法复制过敏性哮喘BALB/c小鼠模型,激发后期合并灌胃甲状腺素复制阴虚型过敏性哮喘模型。在监测饮食、饮水及体质量的基础上,对支气管激发过程中哮喘行为学、肺功能及肺组织病理学等哮喘相关指标进行观测,同时对cAMP、cGMP及肺液清除功能等阴虚证相关指标进行考察。结果阴虚哮喘模型组小鼠出现明显的哮喘症状,哮喘行为学综合评分明显升高,吸气峰流量、呼气峰流量、潮气量明显下降,呼吸频率增加,肺组织病理学可见明显的炎症反应;同时,阴虚哮喘模型组小鼠进食与饮水量明显增加,而体质量增长缓慢,肺组织湿重/干重比值下降,血清cAMP及cAMP/cGMP升高,cGMP下降,显示小鼠处于阴虚而阳相对亢盛的状态。结论在OVA致敏、激发的基础上给予甲状腺素,可成功复制BALB/c小鼠阴虚型过敏性哮喘模型。