膜荚黄芪(Astragalus membranaceus (Fisch) Bunge)组织培养再生体系的建立

本研究以膜荚黄芪的子叶、下胚轴、幼茎、幼叶为外植体,诱导愈伤组织及再生芽,建立膜荚黄芪组织培养再生体系。结果表明,子叶是最佳的外植体。在6-BA与2,4-D或NAA培养基组合中,以MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.5mg/L为最佳的愈伤组织及芽诱导培养基。黄芪再生植株较难生根,在IAA、IBA和NAA激素培养基组合中,以1/2MS+IBA 2.0mg/L或1/2MS+IBA 1.0mg/L+NAA 1.0mg/L为最佳的试管苗生根培养基,生根率50%左右。

黄芪的本草考证及其研究进展

目的:研究历代书籍对黄芪的文献记载,对黄芪进行本草考证,总结黄芪的现代研究进展。方法:通过查阅古代本草学书籍以及与黄芪相关的现代书籍与期刊,从黄芪的道地沿革、基源、名称、功效主治、炮制方法、分类品级以及黄芪在现代医学应用研究七个方面进行考证。结果:通过查阅,黄芪道地产区由之前的四川、陕西、宁夏地区逐渐过渡到山西、内蒙古地区,如今以山西、内蒙古地区的黄芪为优,较为全面地分析了黄芪的发展历程和应用价值。黄芪作为最常用的中药补药,且应用范围广泛,有很好的研究价值和发展前景。结论:黄芪最初以膜荚黄芪为正品,后来蒙古黄芪所替代,但膜荚黄芪仍作为正品被使用,为黄芪的进一步研究提供了理论基础,黄芪作为最常用的中药补药,应用范围广泛,有很好的研究价值和发展前景。

蒙古黄芪中黄酮类成分的研究

目的研究蒙古黄芪的化学成分,为该中药的开发利用和质量评价提供依据。方法利用多种色谱方法分离纯化,通过理化常数测定和波谱分析鉴定其化学结构。结果从蒙古黄芪中分离鉴定了9个黄酮类化合物,分别为芒柄花素(formononetin,Ⅰ)、(3R)-8,2′-二羟基-7,4′-二甲氧基异黄烷[(3R)-8,2′-dihydroxy-7,4′-dimethoxy-isoflavane,Ⅱ]、毛蕊异黄酮(calycosin,Ⅲ)、(6aR,11aR)9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-葡萄糖苷[(6aR,11aR)9,10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside,Ⅳ]、7,2′-二羟基-3′,4′-二甲氧基异黄烷-7-O-β-D-葡萄糖苷(7,2′-di-hydroxy-3′,4′-dimethoxy-isoflavane-7-O-β-D-glucoside,)、芒柄花素-7-O-β-D-葡萄糖苷(formononetin-7-O-β-D-glucoside,Ⅴ)、毛蕊异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(calycosin-7-O-β-D-glucoside,Ⅵ)、红车轴草异黄酮-7-O-β-D-葡萄糖苷(pratensein-7-O-β-D-glucoside,Ⅶ)和染料木苷(genistin,(Ⅸ))。结论化合物为首次从黄芪属植物中分得,化合物为首次从该种植物中获得,化合物～具有促进细胞增殖的活性。-

安国引种黄芪的质量初步评介

测定安国县１０个村引种黄芪药材中黄芪甲苷含量，平均值为０．１９９％，比传统道地黄芪高２倍，比《中国药典》标准（不得少于０．０４％）高近４倍，但外观质量难以相比，１０个村黄芪药材中砷、汞、铅、镉、镍、钴等 ６种元素的平均值分别为 ０． ２４４、０． ００９、１．７３１、０． ０３６、０． ２１４、０． ３０２ μｇ／ｇ，与土壤中６种元素的比值即富集系数≤０．５。

蒙古黄芪与膜荚黄芪种子形态特征及其鉴别方法的研究

目的为黄芪种子鉴定提供方法,为按中药材GAP原则制定相关标准操作过程(SOP)提供基础研究资料。方法采用肉眼直接观察、光学显微镜观察和电子显微镜进行扫描观察,比较蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药用黄芪的种子形态特征和微观结构;通过萌发试验,比较二者的差异。结果通过肉眼和光学显微镜观察,两种黄芪种子的形态差异不明显,在电子显微镜下观察,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异;蒙古黄芪较膜荚黄芪种子硬实率高,萌发不整齐,萌发高峰滞后。结论在电子显微镜下能够对两种黄芪种子准确地做出鉴定,种脐、萌发孔、种皮的微观结构可作为鉴别两种黄芪种子的指标;种子硬实率和萌发动态规律可用于两种黄芪种子的辅助鉴别。

膜荚黄芪内生真菌的分离与鉴定

根据膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch.)Bunge)根叶组织在4种培养基上的生长状况,制成水载片,用光学显微镜定期观察产孢的内生真菌菌丝结构、菌落形态特征等指标鉴定到属。结果表明:从膜荚黄芪根、叶各培养基上共分离65株内生真菌。经显微形态观察鉴定为半知菌门镰孢属、曲霉属、青霉属,其中镰孢属为优势菌群,且大都无孢子产生。

黄芪多糖微波辅助提取工艺优化

对黄芪多糖进行微波辅助提取,采用单因素试验及正交试验优化提取工艺,探讨料水质量比、微波功率、微波处理时间、pH对黄芪多糖提取率的影响。结果表明,微波辅助提取黄芪多糖的最佳工艺条件是料水质量比1∶15、微波功率450 W、微波处理时间90 s、pH 8.5。

用RP-HPLC法测定黄芪毛状根中黄芪甲苷的含量

ＲＰ－ＨＰＬＣ法对黄芪毛状根中黄芪甲苷进行定量分析，在实验条件下，黄芪甲苷标准品在 １０．６４～５３．２０μｇ范围内与峰面积呈良好的线性关系；平均加样回收率为９２．６６％；精密度试验相 对标准偏差为４．２０％和２．４０％；测得黄芪毛状根中黄芪甲苷的含量为０．１４％（干重）。

HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量

用ＨＰＬＣ法测定了黄芪甲苷含量．样品从东北黄芪中提取，用色谱纯甲醇溶解并稀释，采用ＹＷＧＣ１８ 柱，流动相为甲醇，在２０５ ｎｍ 下检测，灵敏度为０－１ ＡＵＦＳ，测定了黄芪甲苷的含量．平均回收率为９６－１ ％ ，ＲＳＤ 为２－１５ ％ ，结果表明，样品浓度在０－０１ ～０－２ ｍｇ／ｍＬ 之间与峰面积成良好的线性关系．

施N量和AM真菌对黄芪生长和生理学特性的影响

以非灭菌土为生长基质,采用盆栽试验,研究了不同施N水平下接种AM真菌对黄芪生长和生理学特性的影响。结果表明:不同施N水平对AM真菌接种效果有显著影响,接种AM真菌能够提高黄芪根系菌根侵染率,但高N量抑制了AM真菌对黄芪根系的侵染。不同施N水平下接种AM真菌能有效提高黄芪生长量、植株叶片可溶性蛋白含量及SOD和CAT活性,但可溶性糖含量和POD活性却有所下降。施N量为50～100 mg N/ kg土时AM真菌接种效果最好。

川产家种与野生膜荚黄芪的生药学对比研究

本文通过对四川家种与野生膜荚黄芪(Astragalus membranaceus(Fisch)Bunge)根的性状、组织构造、化学成分预试薄层层析定性、游离氨基酸种类和含量的对比分析,结果表明:家种膜荚黄芪与野生膜荚黄芪质量基本一致,为发展四川黄芪资源提供了科学依据。

黄芪毛状根淀粉粒结合淀粉合成酶(GBSS)基因表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达

以膜荚黄芪毛状根中克隆得到的GBSS基因序列设计一对特殊引物 ,得到了包含GBSS基因全部表达序列的1.9kb的cDNA片段。该片段正向连接于切除了GUS基因的pBI12 1上 ,构建成表达载体pBI-gbss。SDS -PAGE实验证实了GBSS基因在含有该表达载体的DH5α的大肠杆菌中得到表达。酶活性测定表明转化菌株比未转化菌株高出 2 0 %。

玉仁丰乳丸质量标准研究

采用薄层色谱法对制剂中的黄芪、王不留行、川芎进行了鉴别，采用双波长薄层扫描法以人参皂苷Rg1为指标进行了含量测定。方法回收率为97．54％，RSD=3．43％，玉仁丰乳丸中人参皂苷Rg1测定含量为0．55％（n=3）。方法准确，专属性强，可有效地控制该制剂的质量。

超微粉碎技术对黄芪多糖、淫羊藿多糖溶出的影响

用蒽酮-硫酸法测定了黄芪、淫羊藿普通粉和超微粉对其多糖溶出量的影响。结果表明,在相同的条件下,超微粉中黄芪多糖、淫羊藿多糖提取量较普通粗粉分别提高了117.13%和315.15%。

黄芪幼苗丛枝菌根形成过程研究

盆栽灭菌条件下,研究了黄芪Astragalus membranaceus与摩西球囊霉Glomus mosseae形成丛枝菌根的过程及细胞结构变化情况。结果发现,黄芪接种34 d时,真菌菌丝开始侵染根表皮;44 d时菌丝在皮层细胞内逐渐增多,并且细胞间有极少量泡囊产生,形状为椭圆形;54 d时细胞内大量菌丝扩展;63 d时有大量真菌孢子萌发;84 d时细胞间有大量泡囊形成,呈圆形、近圆形或椭圆形,部分泡囊开始收缩衰老,同时皮层细胞内有少量丛枝并存。生长期间,菌根侵染率和孢子密度的变化与丛枝菌根的发育状况密切相关。

不同种源黄芪光合特性研究

以14个种源黄芪1年生苗为材料,采用TPS-2型便携式光合仪测定其光合特性,对其指标数值进行比较以及主成分和聚类分析,旨在筛选出黄芪综合性状优质种源.研究结果表明:不同种源间黄芪各光合指标均存在显著差异,净光合速率、蒸腾速率、水分利用率、气孔导度和胞间CO_2浓度变化范围分别为2.68~12.68μmol·s^(-1)·m^(-2)、1.85~4.46 mmol·s^(-1)·m^(-2)、0.85~5.06μmol·mmol^(-1)、165.33~550.33μmmol·s^(-1)·m^(-2)和319.00~371.00μmol·mol^(-1);采用主成分分析表明,将黄芪光合性状简化为2个主成分,累计贡献率为94.36%;其聚类分析结果表明,将14份不同种源黄芪分为5个大类.

纳米黄芪粉的显微结构和有效成分溶出的研究

目的对黄芪药材进行纳米级粉碎的研究。方法采用HSCS超细粉碎机进行纳米粉碎,Zeta PALS光散射粒度分布及电位分析仪进行粒度分析和Zeta电位测定,并采用显微观察法对药物组织结构进行显微特征的观察。结果纳米黄芪悬浮液中固体颗粒平均粒径为81.7 nm,大部分细胞壁被破碎,黄芪皂苷和多糖直接进入水中。结论黄芪纳米化后可促进有效成分的溶出。

乳核散结胶囊中相关药材薄层色谱鉴别

目的建立乳核散结胶囊中相关药材的薄层色谱(TLC)定性鉴别方法。方法采用TLC法对乳核散结胶囊中相关药材进行定性鉴别。结果TLC法可检测出柴胡、鹿衔草、当归、黄芪,且斑点清晰,无拖尾,阴性对照无干扰。结论该方法专属性强、简便,且重复性好,可用于乳核散结胶囊的质量控制。

基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的作用

【目的】基于网络药理学及分子对接技术研究黄芪调控仔猪肠道菌群失调性腹泻的有效活性成分及其作用机制。【方法】从TCMSP数据库搜集黄芪中药化合物成分,并获取其潜在靶点。利用GeneCards和OMIM数据库搜集肠道菌群失调性腹泻(flora imbalance diarrhea)的作用靶点,将两者预测的潜在作用靶点进行映射,获得共同作用靶点。运用STRING数据库构建靶点蛋白-蛋白相互作用(PPI)关系,用Cytoscape_3.8.0软件对其网络进行拓扑分析,用DAVID数据库对共同作用靶点进行富集分析,用AutoDuck_4.2.6软件对其核心成分与核心靶点进行分子对接。【结果】黄芪含有11个调控仔猪肠道菌群失调性腹泻核心成分,其对应靶点基因65个,疾病靶点854个,交集靶点25个。PPI网络中显示肿瘤坏死因子(TNF)、转录因子AP-1(JUN)、半胱氨酸蛋白酶-3(CASP3)、白细胞介素-6(IL6)、NF-κB抑制剂α(NFKBIA)、IL1B、IL10、细胞肿瘤抗原p53(TP53)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARG)、C-C基序趋化因子2(CCL2)为关键靶点。GO功能和KEGG通路富集分析发现,黄芪有效成分主要通过美国锥虫病、炎症性肠病、阿米巴病、细胞因子-细胞因子受体相互作用、A型流感、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路参与转录调控、免疫反应、细胞对脂多糖的反应等生物过程。分子对接结果显示,槲皮素、山奈酚、芒柄花素等核心成分与TNF、IL1B等关键靶点结合紧密,亲和力较好。【结论】黄芪可能通过槲皮素、山奈酚、芒柄花素等主要活性成分作用于TNF、IL1B等靶点,通过参与美国锥虫病、炎症性肠病、疟疾、T细胞受体信号通路、沙门菌感染等信号通路进而治疗仔猪肠道菌群失调性腹泻。

膜荚黄芪CBF基因的克隆及表达分析

为探究膜荚黄芪CBF基因的结构与功能,该试验采用RACE技术克隆得到了膜荚黄芪CBF基因,命名为AmCBF。分析结果表明:AmCBF序列全长cDNA为827 bp,开放阅读框为642 bp,在线分析软件预测其编码213个氨基酸,等电点5.84,分子量24066.86 Da,是亲水性蛋白,定位于细胞质中。实时荧光定量PCR分析结果表明:AmCBF在低温和干旱胁迫时基因表达上调,且在低温处理时表达量较高。