转AtMYB44基因小麦的获得和检测

为了评价拟南芥转录因子AtMYB44基因对小麦抗病能力的影响,以小麦幼胚诱导的愈伤组织为转化受体,以磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,PMI)基因作为选择标记,通过基因枪介导法将带有At-MYB44基因的表达质粒AF234296-44导入小麦品种扬麦158.经过2～3次甘露糖筛选后,获得75株再生苗.通过氯酚红(chlorophenol red,CPR)染色获得40株CPR阳性再生苗,进一步通过标记基因PMI和目的基因AtMYB44的PCR检测,获得22株PCR阳性植株,转化率为0.306%.结果初步表明AtMYB44基因已整合到小麦基因组中,获得了生物安全标记的转AtMYB44基因小麦.

AtMYB44与ABI1竞争性结合ABA受体RCAR1的研究

为了进一步确定AtMYB44、ABI1、RCAR1三者之间的关系,本文进行了竞争性pull down和ABI1磷酸酶活性的测定实验,结果表明AtMYB44与ABI1能够竞争性结合RCAR1,并且这种竞争性结合依赖于ABA,AtMYB44能够降低RCAR1对ABI1活性的抑制,这为深入研究ABA信号转导途径奠定了基础.

拟南芥AtMYB44与RCAR1相互作用的研究

以拟南芥脱落酸（ABA）受体RCARl和以文为诱饵蛋白质，利用酵母双杂交（Y2H）技术筛选出转录因子AtMYB44，本文进行了pulldown及重转酵母验证，确定它们之间的关系，实验结果显示RCARl与AtMYB44之间确实存在相互作用．此外，为了确定RCARl在AtMYB44上的作用区域，构建了不同长度的AtMYB44cDNA序列的PGADT7载体，利用酵母双杂交实验分析，表明只有AtMYB44的N端54～105氨基酸序列与RCARl存在相互作用．