Atoh1基因在肺癌中的表达及临床意义

目的研究Atoh1(Atonalhomolog1)基因在肺癌中的表达。方法用实时荧光定量RT-PCR技术检测肺癌组织与癌旁组织中Atoh1的表达,采用表达的相对量进行结果分析。结果与癌旁组织相比,Atoh1 mRNA在肺癌组织中表达显著下调(P<0.05),两者比值约为0.46/1。结论 Atoh1基因在肺癌组织中的表达下调,可能与肺癌的发生、发展有关,可能成为诊断和治疗的新靶点。

HA-bPEI纳米颗粒携带Atoh1质粒豚鼠耳蜗转染观察

目的利用透明质酸(HA)修饰分支型聚乙烯亚胺(b PEI)纳米颗粒制备新型非病毒基因载体,包载Atoh1-EGFP质粒,检测其在活体豚鼠内耳的转染效率。方法质粒提取后按照COOH/N/P=4:10:1合成纳米载体基因复合物并进行表征。利用圆窗膜渗透的方法,导入实验动物耳蜗。术后7天,通过激光共聚焦扫描观察基底膜铺片和切片了解转染情况,并利用Western Blot和RT-PCR技术分别从蛋白和核酸水平验证转染结果。结果按照本研究实验方法可成功合成表面带有负电荷的纳米级别的基因载体复合物颗粒,导入实验动物耳蜗后7天取材,基底膜铺片的共聚焦显微镜观察结果显示:基底膜内外毛细胞可检测到绿色荧光蛋白显色,基底膜底转的转染效率达81.7±4.71%,中转可达33.8±9.02%。结合冰冻切片结果发现,表达的绿色荧光蛋白主要位于耳蜗底转和部分中转,顶转及内外毛细胞以外区域未见绿色荧光蛋白表达。基底膜细胞未见明显变形损伤。Western Blot和RT-PCR结果也验证了Atoh1基因在基底膜上的成功转染。结论 HA修饰b PEI纳米颗粒制备基因载体可成功实现耳蜗的基因转染,且未见对基底膜细胞产生明显的毒性。合成简单、成本较低,是理想的内耳基因转染载体。

Atoh1基因在癌症中的研究进展

癌症是由控制细胞生长增殖机制失常而引起的一种基因疾病。目前的治疗方法主要有手术、化疗、放疗、生物治疗、靶向治疗等。有些人的致癌基因比较活跃,在外界的影响下,容易患癌症。而有些人的DNA比较容易修复,患癌症的概率相对会小一些。Atoh1基因作为一种新发现的抑癌基因,能够控制细胞分化的最后步骤,确保细胞正确定型而不发生恶变。如果可以用化学药物有效控制Atoh1基因,它将是未来癌症治疗的利器。

大鼠Atoh1真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP的构建及转染293T细胞的研究

目的:利用基因工程方法克隆SD大鼠Atoh1基因编码区序列,构建Atoh1的真核表达载体pA-toh1-IRES2-EGFP,并验证其在293T细胞中的表达。方法:通过RT-PCR从SD大鼠结肠组织内扩增出Atoh1基因全长CDS序列,并TA克隆于PMD-19T载体中。纯化回收的目的片段测序后连接于真核细胞表达载体pIRES2-EGFP中,构建pAtoh1-IRES2-EGFP真核表达载体。再次测序后脂质体介导重组质粒转染293T细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:测序后将扩增得到的大鼠Atoh1CDS序列与GeneBank公布的参考序列对比,有两处碱基发生突变,但克隆序列编码的氨基酸序列与参考序列完全一致,两处碱基应为单核苷酸多态性,突变为无义突变,不影响蛋白表达。双酶切和测序结果证明Atoh1已正确地克隆到真核表达载体pIRES2-EGFP中,重组质粒转染293T细胞24h后荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白表达。结论:获得正确Atoh1编码序列,真核表达载体pAtoh1-IRES2-EGFP构建成功并可以在293T细胞中表达,为进一步对感音神经性聋的基因治疗奠定了基础。

Atoh1基因在哺乳动物听觉毛细胞再生中的作用的研究进展

Atoh1基因编码一种碱性螺旋-环-螺旋型(bHLH)转录因子,参与哺乳动物听觉毛细胞和支持细胞的产生与分化、调节耳蜗上皮细胞增殖,在感音神经性耳聋发病和恢复中具有重要作用。本文拟就Atoh1基因在听觉毛细胞再生中的最新研究进展进行阐述,以期为感音神经性耳聋的毛细胞再生基因疗法研究提供参考。