茅苍术麸炒前后胃黏膜保护作用的变化研究

目的:比较茅苍术生品和麸炒品对胃溃疡大鼠的胃黏膜保护作用。方法:以乙酸诱导大鼠胃溃疡模型。采用酶联免疫吸附(ELISA)法检测血清及胃组织中表皮生长因子(EGF)和三叶因子2(TFF2)的含量。实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法检测胃组织中EGF和TFF2 mRNA的表达。免疫组织化学法检测胃组织中EGF和TFF2的蛋白表达。结果:茅苍术能够明显升高血清及胃组织中EGF和TFF2的含量,上调胃组织中EGF和TFF2mRNA的表达和二者的蛋白表达量,麸炒品的作用优于生品。结论:麸炒能增强茅苍术对乙酸致胃溃疡大鼠胃黏膜的保护作用。

苍术麸炒前后非挥发性提取部位HPLC分析

目的:通过分析苍术麸炒前后非挥发性提取部位整体化学成分的分布与变化,为麸炒苍术炮制机制研究做基础。方法:采用蒸馏法提尽苍术和麸炒苍术挥发油,所得水液用不同极性溶剂萃取,所剩水液用大孔树脂层析,制得不同部位样品,运用HPLC法分析所有样品。色谱条件:梯度程序,流速:0.8ml·min^(-1),柱温25℃,进样量:10μl,ELSD:气流量:1.6L·min^(-1),温度50℃。结果:分析各萃取部位HPLC谱图,发现麸炒苍术较生苍术各化学成分的含量有不同程度降低。结论:采用HPLC-ELSD法可以较好的反映苍术麸炒炮制前后非挥发性提取部位整体化学成分的分布与变化。方法简便,结果稳定。

气相色谱氢火焰离子化检测法考察生炒茅苍术中β-桉叶醇及茅术醇含量变化

目的考察麸炒对茅苍术中β-桉叶醇及茅术醇含量的影响,为茅苍术的炮制研究提供实验依据。方法采用气相色谱氢火焰离子化检测法(GC-FID)检测茅苍术麸炒前后β-桉叶醇及茅术醇的含量,HP-5(30 m×320μm×0.25μm)石英毛细管柱,氢火焰离子化检测器(FID),检测器温度300℃,进样口温度200℃,不分流进样,载气为高纯氮气,程序升温。结果不同地区的茅苍术中茅术醇和β-桉叶醇的含量差别较大。生品茅苍术经麸炒之后茅术醇和β-桉叶醇的含量均有所下降,β-桉叶醇减少率为12.80%~25.99%,茅术醇减少率为8.13%~22.47%。结论麸炒能够降低茅苍术中茅术醇和β-桉叶醇的含量,与茅苍术炮制后可去油以减缓燥性的传统炮制理论相一致。

苍术及麸炒苍术高效液相图谱对比分析

目的研究苍术麸炒前后整体化学成分变化,为麸炒苍术炮制机理的研究提供科学依据。方法运用高效液相色谱法对生苍术及麸苍术进行分析。色谱条件:梯度程序,流速:1.0mL/m in,柱温30℃,进样量:5μL,DAD:检测波长300nm,ELSD:高纯氮,气流量:1.6L/m in,温度50℃。结果两种检测器之间检测结果有差异,但峰分布规律近似。两种检测器检测结果显示,苍术麸炒炮制后部分化学成分出现量的增减,质变不显著。结论运用HPLC法可对苍术麸炒炮制前后整体化学成分进行分析,实验方法准确可靠。

苍术(生/麸炒)作用研究简况

苍术燥湿健脾,祛风散寒,明目,麸炒(焦)苍术与生苍术,炮制后化学成分含量有变化,药效也有差异。焦苍术最佳炮制工艺:温度220~230℃,翻炒频率50次/min,炒制6 min。茅苍术挥发油中化学成分含量最高的是β-桉叶油醇(18.894%),其次是苍术酮(13.707%)和茅术醇(11.053%)等88种化合物。动物实验研究作用广泛,有燥性、助消化、降血糖、抗炎、抑制α-葡萄糖苷酶、抗肿瘤、调节脂代谢、杀虫、致突变、抑菌、调节免疫作用。药理及成分研究已较为深入,单体化合物药理作用研究尚属空白,细胞层面及代谢组学研究报道较少,今后应侧重分子与细胞层面研究。

茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用

目的探讨茅苍术麸炒品对人肝癌SMMC-7721细胞的体内外抑制作用。方法(1)取对数生长期SMMC-7721细胞,给予0μg/mL、25μg/mL、50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,检测SMMC-7721细胞的存活率;给予0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预24 h后,观察SMMC-7721细胞形态学,同时行Hoechst染色后于倒置荧光显微镜观察细胞凋亡情况,并应用流式细胞术检测细胞的凋亡率。(2)取24只裸鼠,皮下注射SMMC-7721细胞建立移植性肝癌模型。待肿瘤体积达到100 mm^3时,将裸鼠随机分为模型组和茅苍术麸炒品低、中、高剂量组,每组6只。低、中、高剂量组裸鼠分别每天灌胃0.8 g/kg、1.6 g/kg、3.2 g/kg的茅苍术麸炒品,模型组灌胃等体积的磷酸缓冲盐溶液。14 d后剥取肿瘤组织称质量,计算抑瘤率,并检测肿瘤组织B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关性X蛋白(Bax)和Survivin的蛋白表达水平。结果(1)100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL和600μg/mL茅苍术麸炒品干预后细胞的存活率均低于0μg/mL,且随浓度增加细胞存活率依次下降(均P<0.05)。细胞形态学观察和Hoechst 33258染色可见,不同浓度茅苍术麸炒品干预后,细胞皱缩,并生成凋亡小体。0μg/mL、100μg/mL、200μg/mL、400μg/mL茅苍术麸炒品干预后细胞凋亡率依次升高(均P<0.05)。(2)模型组、茅苍术麸炒品低、中、高剂量组的肿瘤质量、Bcl-2和Survivin蛋白表达水平依次降低(均P<0.05),而抑瘤率、Bax蛋白表达水平均依次升高(均P<0.05)。结论茅苍术麸炒品能抑制肝癌SMMC-7721细胞增殖并诱导细胞凋亡,同时其能够抑制裸鼠移植瘤的生长,而这可能与其上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2和Survivin蛋白表达有关。

苍术麸炒过程中5-羟甲基糠醛的转化机制研究

目的研究苍术麸炒后5-羟甲基糠醛(5-HMF)量的增加机制。方法在模拟苍术麸炒工艺条件下,对果糖和葡萄糖分别加热处理,采用HPLC法测定果糖和葡萄糖转化为5-HMF的量;并对麸炒前后苍术中的果糖进行定量测定,比较其量变化。结果在模拟条件下葡萄糖中未能检测到5-HMF,而果糖在相同条件下则能检测到5-HMF,且在最佳麸炒工艺下果糖的量明显降低,5-HMF的量增加最多。结论苍术麸炒后5-HMF的量显著增加的主要原因是麸炒过程中果糖的转化。

麸炒茅苍术挥发油抗LPS诱导HCoEpiC炎症损伤的作用

目的考察茅苍术挥发油抗脂多糖(LPS)诱导人结肠上皮细胞(HCoEpiC)炎症损伤的作用,并比较生品和麸炒品的作用差异。方法水蒸气蒸馏法提取茅苍术生品和麸炒品的挥发油;采用LPS造成HCoEpiC炎症损伤模型,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测炎症相关因子IL-4,IL-6,IL-1β和TNF-α的水平;RT-PCR法检测IL-6,IL-8和TNF-αmRNA的表达;Western blot法检测IL-6和IL-8的蛋白表达量。结果与模型组比较,茅苍术生品和麸炒品挥发油均能提高HCoEpiC的细胞活力;提高抑炎因子IL-4的水平,降低促炎因子IL-6,IL-1β和TNF-α的水平;且能够降低IL-6,IL-8和TNF-αmRNA的表达和IL-6和IL-8的蛋白表达量,麸炒品的作用优于生品。结论茅苍术挥发油具有明显抗LPS诱导HCoEpiC炎症损伤的作用,麸炒后该作用增强。

苍术麸炒前后活性部位药效比较研究

目的:比较苍术麸炒前后活性部位的药效差异。方法:将170只大鼠随机均分成17组,分别为空白对照组,湿阻脾胃模型组,生、麸炒苍术挥发油高、低剂量[分别为0.747、0.083 mg(生药)/ml,下同]组及其溶剂对照2%聚山梨酯80组,生、麸炒苍术二氯甲烷萃取物高、低剂量组及其溶剂对照1‰聚山梨酯80组,生、麸炒苍术正丁醇萃取物高、低剂量组及其溶剂对照湿阻脾胃模型蒸馏水对照组。除空白对照组外,其余16组大鼠ig番泻叶水煎液14 d建立大鼠湿阻脾胃模型,之后各组大鼠ig相应药物或溶剂,每日1次,连续7 d。测定各组大鼠给药前后体质量及给药后血清中淀粉酶、D-木糖、胃泌素、血管活性肠肽和一氧化氮(NO)的水平。结果:与湿阻脾胃模型组比较,生、麸炒苍术各活性部位组大鼠体质量增加,血清中胃泌素、淀粉酶、D-木糖水平明显升高(P<0.05),血管活性肠肽、NO水平明显降低(P<0.05);与生苍术活性部位组比较,除体质量外,麸炒苍术各活性部位组上述各指标变化更大,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:生苍术与麸炒苍术活性部位存在药效学差异,后者作用更强。

3种炮制方法对湖北茅苍术挥发油的化学成分的影响

目的:分析比较湖北茅苍术麸炒、米泔水制、清炒3种不同炮制品中挥发油的化学成分。方法:采用水蒸气蒸馏法提取3种不同的湖北茅苍术炮制品挥发油成分,通过气相色谱-质谱法(GC-MS)进行化学成分分析及鉴定,并采用峰面积归一化法计算各成分的相对质量分数。结果:从3种挥发油中共分离88种组分,鉴定出87种挥发性化学成分,其共有成分51种,鉴定出的各样本化学成分平均占其总挥发油的94.61%。结论:3种不同湖北茅苍术炮制品中挥发性化学成分及含量存在一定差异。

HPLC-ELSD法测定茅苍术生品及麸炒品中苍术苷A的含量

目的：建立测定茅苍术中苍术苷A含量的方法,比较茅苍术生品及麸炒品中苍术苷A含量的差异。方法：采用高效液相色谱蒸发光散射检测（HPLC-ELSD）法,使用Agilent TC-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈（A）-水（B）为流动相,梯度洗脱（0-10 min,2%A→8%A;10-15 min,8%A→15%A;15 min之后维持15%A）,流速1.0 mL·min-1,柱温30℃,蒸发光散射检测器漂移管温度50℃,雾化气体为氮气,氮气压力3.0×105Pa。结果：苍术苷A进样量在0.2390-4.7800μg（r=0.9998）范围内线性关系良好;平均回收率为97.84%,RSD为1.0%。样品测定结果为0.0474%-0.0852%。结论：本方法经过方法学验证,可为茅苍术的质量控制提供实验依据。

Box-behnken效应面法优选麸炒苍术的炮制工艺

目的:优选麸炒苍术的炮制工艺。方法:以苍术素含量、水溶性浸出物得率、醇溶性浸出物得率和外观评分的综合评分为评价指标,采用Box-behnken效应面法考察所加辅料量、翻炒时间、翻炒温度对麸炒苍术饮片质量的影响,优选麸炒苍术炮制工艺参数并进行验证试验。结果:麸炒苍术最优炮制工艺为加辅料量为药材量的10%、翻炒温度140℃、翻炒时间3 min;验证试验综合评分平均值为0.39(RSD=2.88%,n=3),与预测值0.38接近。结论:采用Box-behnken效应面法优选麸炒苍术的炮制工艺合理、可行。

茅苍术生品及麸炒品挥发油对脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症损伤的影响

目的:考察并比较茅苍术生品及麸炒品挥发油体外抗结肠炎的作用,基于IKB抑制蛋白激酶(IKK)/核转录因子κB(NF-κB)信号通路探讨其作用机制。方法:以脂多糖诱导人结肠上皮细胞炎症损伤模型,MTT法检测细胞活力,ELISA法检测炎症相关因子白细胞介素(IL)-4、IL-8、IL-12和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平;RT-PCR法检测IKKα、NF-κB、IL-4和IL-8 mRNA表达;Western blot法检测IKKα、p-IKKα、p-IKKβ、NF-κB蛋白表达量。结果:与模型组比较,茅苍术生品和麸炒品挥发油均能显著提高细胞的存活率(P<0.05);提高抑炎因子IL-4的水平(P<0.05),降低促炎因子IL-8、IL-12和TNF-α水平(P<0.05);提高IL-4 mRNA的水平(P<0.05),降低NF-κB和IL-8 mRNA水平(P<0.05);降低p-IKKα、p-IKKβ和NF-κB蛋白表达量(P<0.05);麸炒品的作用优于生品。结论:茅苍术生品及麸炒品挥发油具有明显体外抗结肠炎的作用,麸炒品的作用优于生品,其机制部分是通过调控IKK/NF-κB信号通路而发挥作用。

基于液质联用技术的苍术炮制前后苍术苷A的尿排泄动力学研究

目的:采用液质联用技术对大鼠灌胃生、麸炒苍术提取物后苍术苷A的尿排泄动力学规律进行研究。方法:将SD大鼠随机分为2组,分别灌胃给予生、麸炒苍术提取物,收集给药前后不同时间段大鼠尿液,采用多反应监测(MRM)模式对尿液中苍术苷A的浓度进行测定。以DAS 3.2.8软件计算排泄动力学参数,绘制累计排泄率以及排泄速率曲线,比较炮制前后尿排泄规律的异同。结果:生、麸炒苍术中苍术苷A的t1/2分别为(12.88±1.85)h和(12.44±2.41)h,排泄速率峰值分别为(1.32±0.32)μg·h^(-1)和(1.99±0.59)μg·h^(-1),36 h累积排泄量分别占总排泄量的88.55%和90.34%。结论:苍术麸炒后,其主要成分苍术苷A的尿排泄动力学参数t1/2和ke值均无显著变化,但总排泄率明显高于生品。

麸炒茅苍术及其不同物化形式标准汤剂中挥发油的量质传递规律分析

目的:研究麸炒茅苍术、麸炒茅苍术标准汤剂浓缩液及冻干粉中挥发油含量,以及挥发油中化学成分种类与含量的差异,明确量质传递规律。方法:收集10批茅苍术药材,依次制备成茅苍术、麸炒茅苍术、麸炒茅苍术标准汤剂浓缩液及冻干粉,分别提取挥发油,计算各样品中挥发油转移率;采用气相色谱法(GC)对各挥发油中主要化学成分(β-桉叶醇、苍术酮、苍术素)进行分析,色谱柱为HP-5石英毛细管柱(0.32 mm×30 m,0.25μm),检测器为氢火焰离子化检测器(FID),分流比10∶1,程序升温(初始温度80℃,保持1 min;以10℃·min^(-1)升至150℃,保持10 min;以0.5℃·min^(-1)升至155℃,保持5 min;以8.5℃·min^(-1)升至240℃,保持8 min);利用聚类分析、主成分分析(PCA)探究麸炒茅苍术标准汤剂浓缩液与冻干粉之间化学成分种类及含量的整体差异。结果:麸炒茅苍术及其标准汤剂浓缩液、冻干粉中挥发油的转移率分别为70.51%、1.57%、40.90%;麸炒茅苍术挥发油中β-桉叶醇、苍术酮、苍术素的平均转移率分别为58.45%、48.49%、55.64%;在麸炒茅苍术标准汤剂浓缩液中仅检测出β-桉叶醇和苍术素,两者平均转移率分别为0.22%、0.10%;冻干粉中只检测出β-桉叶醇,平均转移率8.37%;聚类分析和PCA结果均显示,麸炒茅苍术标准汤剂浓缩液与冻干粉之间化学成分种类及含量整体差异明显。结论:麸炒茅苍术及其标准汤剂浓缩液、冻干粉之间量质传递规律稳定,若选择冻干粉作为中药配方颗粒基准物质,应回加适量挥发油使其与标准汤剂浓缩液量质保持一致。