Ax亚型的分子生物学研究

目的 研究中国汉族人群Ax亚型的分子生物学特点。方法 首先采用双重PCR RLFP方法 ,对 8份血清学试验疑为Ax及AxB的标本 ,做ABO初步基因分型 ,明确其中的A、B或O基因 ;然后用限制性内切酶mobI筛选ABO基因第 7外显子中的T6 4 6A的突变。对不具有该突变而血清学疑为Ax的标本以及血清学和基因分型不一致的标本 ,则进一步对其ABO基因第 6和 7外显子做深入的克隆测序分析。结果 8份标本中有半数含有T6 4 6A点突变 ,剩余 4份中 ,1份为包含C4 0 7T和C4 6 7T错义突变的A weak 0 1等位基因 ,1份为携带新的核苷酸变异的Ax (C4 6 7T和C74 5T)等位基因 ,另外 2份血清学疑为AxB ,初步基因分型为BO的个体 ,克隆测序的结果显示两者均有正常的O基因 ,但是其B等位基因均发生了新的nt6 4 0位A G突变。结论 在中国汉族人群中检测到新的Ax及B(A)

Ax基因致血清型与基因型不符的家系遗传研究——附1例报告

目的对一家系ABO血型不符合遗传规律的原因进行分析研究,为今后临床类似问题提供参考依据。方法采用血清学方法分析ABO表型,采用DNA直接测序方法检测ABO基因的第6、7外显子序列,分析家系ABO血型不符合遗传规律的原因。结果血清学鉴定为父亲B型,母亲O型,孩子AB型。DNA直接测序结果:父亲Bw14(B110)/O01,母亲Ax26/O02,孩子Bw14(B110)/Ax26。表明母亲的Ax26基因没有表达A抗原。结论 Ax等位基因在不同杂合状态的个体中会呈现出不同血清表型。

一例新的Ax等位基因及其家系调查

目的遗传性ABO血清学定型正反不符,常常见于ABO亚型等位基因和O等位基因联合存在的情况。本文报道一个由于A等位基因错义突变导致的AX亚型中国家系。方法采取先证者及家系其他4名成员的血样进行ABO血型血清学试验及使用PCR扩增和直接测序的方法进行ABO基因检测。结果血清学试验显示先证者及其父亲为AX表型,分子生物学检测发现他们的A等位基因发生错义突变c.595C>T,导致A糖基转移酶发生氨基酸置换p.R199C。结论该AX亚型是由于新的ABO*A等位基因突变c.595C>T导致的。

中国人群ABO亚型中一个新的Ax等位基因的鉴定

目的Ax是一种罕见的ABO亚型,其分子机理尚未完全阐明。本文以一个Ax亚型家系和一个无关的Ax亚型献血者个体为对象,研究中国人群Ax亚型的分子基础。方法ABO血清学定型、血浆N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶(A酶)活性测定、ABO基因7个外显子及其侧翼序列的PCR扩增、基因克隆和测序分析。结果DNA克隆和测序分析显示,家系先证者和无关献血者个体的ABO基因分别为A/O01和A/O02基因型,在第7外显子均存在426G>C杂合突变,导致N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶的氨基酸发生M142I改变。在120个正常样本中未检出此突变。结论ABO基因426G>C突变导致的N-乙酰-D-半乳糖胺基转移酶第142位氨基酸置换改变了酶的保守区域,从而降低了酶的催化活性,导致Ax表现型。本突变为国际首次报道。

一例ABO亚型Ax28新等位基因的鉴定

目的研究ABO血型新等位基因Ax28的分子机制。方法应用单克隆抗体检测样本的红细胞ABO血型抗原,标准A、B、O红细胞检测血清中ABO抗体。PCR技术扩增ABO基因7个外显子及其邻近内含子序列后测序,对第5~7外显子扩增产物进行克隆后测序。结果先证者红细胞有弱A抗原,同时血清中存在抗A和抗B抗体。直接测序分析发现第6外显子第261位杂合缺失,第7外显子在467C>T、830T>C杂合突变。克隆测序得到两个等位基因O01和Ax28。与A102序列相比,Ax28第830位T>C突变,导致第277位缬氨酸变成丙氨酸。结论N乙酰氨基半乳糖基转移酶基因第830位T>C突变可能引起酶活性减弱,进而导致产生Ax28变异型。