突变型Axin基因在神经胶质瘤细胞系C6中的功能研究

目的研究突变型Axin基因对C6细胞增殖及细胞周期的影响,以期揭示突变型Axin基因是否影响胶质瘤的发生。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法绘制细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。采用SP法免疫细胞化学染色法检测Ki-67、cyclinD1表达。结果转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞在生长速度,克隆形成能力方面均显著降低,且组间无差别;C6、C6-Vector、C6-Vector-Axin、和C6-Vector-Axin806各组细胞经流式细胞仪检测S期的细胞比例分别为:27.2%、24.8%、18.9%和18.5%;Ki-67及cyclinD1在转染突变型Axin基因与转染野生型Axin基因的C6细胞中表达均降低,且组间无差别。结论突变型Axin基因明显抑制C6细胞的增殖能力,该位点突变可能并不是胶质瘤发生的关键因素。

Axin基因的表达对神经胶质瘤细胞系C6生物学特性的影响

目的研究Axin基因对神经胶质瘤细胞C6生物学特性及相关蛋白的影响。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长曲线,应用流式细胞仪(FCM)测定细胞周期的变化,并用平板克隆形成实验对细胞克隆形成能力进行了检测。应用末端TdT酶标记技术(TUNEL)观察细胞凋亡及比率。采用免疫细胞化学染色法检测Ki67、CyclinD1、p53的表达。结果转染Axin基因使细胞周期在G1期阻滞;细胞增殖能力和细胞克隆形成能力均显著降低;细胞凋亡率增高;Ki67及CyclinD1低表达,p53高表达。结论转染Axin基因后胶质瘤细胞出现了一定的增殖抑制现象,诱导细胞凋亡,Axin基因可能通过上调p53基因表达和下调Cy-clinD1表达而抑制胶质瘤细胞的生长。

Axin基因与肿瘤相关性的研究进展

Axin是一个多结构域支架蛋白,对Wnt,JNK等信号途径起重要的调控作用,并且还参与了p53的活化。Axin的异常表达不仅可以导致胚胎体轴复制、胚胎死亡、细胞极性异常,而且与多种肿瘤的发生、发展有密切的关系。将Axin用于肿瘤的基因治疗,已取得了一定的进展,为肿瘤的治疗带来了新的希望。

pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC重组质粒在结肠癌细胞系SW480中的表达

目的在结肠癌细胞系SW480中成功表达Axin和APC基因片段。方法双酶切鉴定重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5,利用脂质体介导法将质粒共转染结肠癌细胞系SW480,RT-PCR鉴定细胞中目的基因APC和Axin mRNA的表达,western blotting鉴定标签蛋白GFP和myc的表达。结果重组质粒双酶切得到的片段大小与预期相符,质粒共转染SW480后,RT-PCR检测到目的基因APC和AxinmRNA的表达,western blotting检测到标签蛋白GFP和myc的表达。结论重组质粒pCS2-MT/Axin及pEGFP-N3/APC5在结肠癌细胞中成功表达,为下一步研究APC和Axin基因在细胞内的功能奠定了实验基础。

Axin基因对人肾母细胞瘤细胞生物学特性的影响

目的:研究Axin基因对人肾母细胞瘤细胞G401生物学特性的影响为人肾母细胞瘤的分子病理机制及治疗、预后提供基础研究依据。方法:采用基因工程的方法构建含Axin基因的真核表达载体pIRES2-EGFP-Axin,稳定转染G401细胞,建立高表达的G401细胞系。用MTT实验、克隆形成能力实验、侵袭能力实验三种方法检测Axin基因对G401细胞生物学特性的影响。结果:重组载体pIRES2-EGFP-Axin经PCR和双酶切鉴定结果显示:在约2500bp大小处出现一条特异性条带,转染G401细胞后,经Western blotting结果显示:Axin蛋白在G401细胞中成功表达,同时,转染了pIRES2-EGFP-Axin质粒的G401细胞生长速度显著减慢(P<0.05);G401细胞的克隆形成能力和侵袭力均显著降低(P<0.05)。结论:我们成功构建了重组真核表达载体PIRES2–EGRP–Axin,且通过Western blotting检测筛选获得稳定转染的G401细胞系,最后Axin体外实验对G401细胞生物学特性影响表明:Axin基因与肾母细胞瘤的发生发展有一定关系。

Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达及其多态性研究

目的观察Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达及其多态性,为临床治疗脑肿瘤疾病提供实验依据。方法取大鼠神经干细胞及胶质瘤肿瘤干细胞,采用RT-PCR、基因测序等方法研究Axin基因在脑肿瘤干细胞和神经干细胞中的表达,对反应产物进行测序,观察两组之间的序列差异,并与Genebank Axin基因序列进行比较。结果相差显微镜下观察,呈悬浮状态的脑肿瘤干细胞聚集在一起的小球,随着培养时间的延长,小球数量增多,球体不断增大但并不均一,长出的新球体大小均一,数量多。分离原代的神经干细胞形成细胞球。脑肿瘤干细胞中Axin序列的表达与神经干细胞及Genebank中Axin比较差异性很大,其相似性为75.6(。结论Axin基因在神经干细胞中正常表达,而在脑肿瘤干细胞中表达过低,说明Axin在脑肿瘤细胞增殖中起着重要的抑制作用。

胃癌组织中轴蛋白、结肠癌转移相关基因1蛋白的表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中轴蛋白(Axin)、结肠癌转移相关基因1(MACC1)蛋白的表达及其与临床病理参数的关系。方法收集山东省青岛市第八人民医院2015年1月~2017年12月胃癌患者手术标本150例胃癌组织,随机抽取其中70例为癌旁组织,利用免疫组织化法检测癌及癌旁组织中Axin、MACC1的表达;分析Axin、MACC1表达与胃癌患者临床病理参数之间的关系及两者的相关性。结果胃癌组织中Axin阳性表达率低于癌旁组织,胃癌组织中MACC1阳性表达率高于癌旁组织,差异均有高度统计学意义(P<0.01)。Axin、MACC1在胃癌组织中的表达均与胃癌的浸润深度、分化程度、淋巴结转移以及Duke分期有关(P<0.01),且胃癌组织中Axin表达与MACC1呈负相关(P<0.05)。结论Axin的表达降低及MACC1的表达升高都与胃癌发展相关,早期检测两项指标可为预测胃癌进展提供重要依据;Axin与MACC1的表达负相关,两者可能协同导致肿瘤的低分化、高侵袭、高转移性,提示两者可能成为胃癌治疗的潜在靶点。

家族性腺瘤性息肉病易感基因突变类型与临床表型关系的研究进展

家族性腺瘤性息肉病是最常见的遗传性结直肠癌之一，其临床表型与患者APC基因的突变位点有关。本文对APC基因检测为阴性但有明确临床表现的患者可能携带的其他基因调控位点，包括MUTYH基因、AXIN基因和表观遗传学改变等进行了概述。随着精准医学理念的推广，有效地结合家族性腺瘤性息肉病患者基因型与表型的对应关系，提供个体化的治疗方案及随访策略将具有积极的临床意义。本文对近年来家族性腺瘤性息肉病APC基因突变与表型相关性方面的最新研究进展进行了综述。