Inhibitory effect of Cyrtomium falcatum on melanogenesis in α-MSH-stimulated B16F10 murine melanoma cells

Objective:To explore the anti-melanogenic potential of Cyrtomium falcatum.Methods:The effects of Cyrtomium falcatum crude extract and its solvent fractions on tyrosinase activity,melanin content,and the expressions of melanogenesis-related genes and proteins were analyzed inα-melanocyte-stimulating hormone(α-MSH)-stimulated B16F10 cells.Results:α-MSH treatment significantly increased tyrosinase activity,and extracellular and intracellular melanin content,as well as the expression levels of tyrosinase,microphthalmia-associated transcription factor(MITF),tyrosinase-related protein(TRP)-1,and TRP-2 in B16F10 cells.Treatment with Cyrtomium falcatum crude extract and its solvent fractions reduced tyrosinase activity and extracellular and intracellular melanin content and downregulated the expression levels of tyrosinase,MITF,TRP-1,and TRP-2 in a dose-dependent manner.Conclusions:Cyrtomium falcatum has potential anti-melanogenesis effects and can be used as a potential source material in cosmeceutical industry for the research and development of novel lead molecules with whitening properties.

百合主要有效成分对小鼠B-16细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的观察百合多糖与百合皂苷对小鼠B-16细胞中细胞活力、酪氨酸酶活性及黑色素含量的影响。方法选用同一传代小鼠B-16细胞并随机分为空白细胞组、空白对照组、熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组,共5组。空白细胞组加入180μL RPMI1640培养液;空白对照组加入180μL RPMI1640培养液和20μL高密度聚乙烯;熊果苷组、百合多糖组、百合皂苷组分别加入不同浓度(0.2、0.4、0.6、0.8 mg/mL)的熊果苷、百合多糖、百合皂苷,作用3 d后,用CCK-8法检测B-16细胞活力,用酪氨酸酶-多巴速率氧化法检测B-16细胞中酪氨酸酶的活性,以MTT法检测小鼠B-16细胞的黑色素含量。结果与空白细胞组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.4、0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性明显升高(P<0.01)。与空白对照组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力明显升高(P<0.01),0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.01);各浓度熊果苷、百合多糖组和0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显降低(P<0.01),0.2、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.2 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.2 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL熊果苷组比较,0.8 mg/mL熊果苷组细胞活力、0.4 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.6 mg/mL熊果苷组比较,0.6 mg/mL百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显升高(P<0.01)。与0.4 mg/mL百合皂苷组比较,0.6、0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力均明显降低(P<0.05,P<0.01)。与0.6 mg/mL百合皂苷组比较,0.8 mg/mL百合皂苷组细胞活力明显降低(P<0.01)。在0.2、0.4 mg/mL浓度下,百合皂苷组酪氨酸酶活性均明显高于百合多糖组(P<0.01)。结论相较于百合皂苷、熊果苷,百合多糖能够在不影响小鼠B-16细胞活性的情况下,对B-16细胞内酪氨酸酶活性和黑色素含量起到抑制作用,推测百合多糖可能通过抑制细胞内酪氨酸酶的活性,进一步抑制黑色素的合成,达到美白的效果。

三氧化二砷诱导恶性黑色素瘤A_(375)和B_(16)细胞凋亡的研究

目的 :研究不同浓度的三氧化二砷 (As2 O3 )对恶性黑色素瘤人A3 75细胞和小鼠B16细胞的凋亡诱导作用 ,为As2 O3 治疗恶性黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法 :用流式细胞术 (FCM )检测A3 75细胞和B16细胞的凋亡诱导及杀伤作用 :用不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1、0 .2 5mmol·L-1和 0 .5mmol/L-1) ,对小鼠进行腹腔注射 (10ml·kg-1,连续注射 10d后 ,检测小鼠血清与心、肝、肾有关的生化指标。结果 :As2 O3 浓度分别为 5 μmol·L-1、10 μmol·L-1和 2 0 μmol·L-1时 ,A3 75和B16细胞的凋亡率分别为 11.85 %、5 5 .5 1%、5 4 .90 %和 9.81%、2 6 .4 5 %、9.93% :As2 O3 诱导A3 75和B16细胞总的凋亡和坏死率分别为11.90 %、5 5 .71%、5 7.4 0 %和 12 .96 %、2 6 .99%、87.13% ;不同剂量的As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝、肾和心肌等功能无明显影响 ,与对照组各项指标无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :不同浓度的As2 O3 能明显诱导恶性黑色素瘤A3 75及B16细胞凋亡和坏死 ,对A3 75细胞的凋亡诱导作用强于B16细胞。As2 O3 (0 .1mmol·L-1～ 0 .5mmol·L-1)对小鼠肝。

海南文昌清澜港红树林真菌抗B16肿瘤细胞活性菌株的筛选

从海南文昌清澜港红树林采集78份植物组织和土壤样品。对样品进行真菌分离,共分离得到真菌608株,采用目测法对其体外抗肿瘤细胞活性进行检测,发现81株红树林真菌对小鼠黑色素瘤B16细胞有不同程度的抑制作用,占总分离菌株的13.32%。结果表明,从红树植物杯萼海桑中分离得到真菌菌株的数量最多,而从红树植物银叶树分离得到的抗肿瘤细胞活性菌株数量最多。

三氧化二砷对黑色素瘤B_(16)细胞端粒酶活性影响

目的 :研究三氧化二砷 (As2 O3 )对黑色素瘤B1 6细胞端粒酶活性的作用 ,探讨砷及其化合物治疗黑色素瘤的作用机制 ,为其治疗黑色素瘤提供新的理论和实验依据。方法 :用TRAP ELISA和TRAP PAGE银染法检测黑色素瘤B1 6细胞 (简称B1 6)端粒酶活性。结果 :As2 O3 对黑色素瘤B1 6细胞端粒酶活性的抑制有明显的浓度和时间依赖关系。结论 :As2 O3 对黑色素瘤B1

β-榄香烯对小鼠B_(16)黑色素瘤细胞粘附、运动和间隙连接通讯功能的影响

目的：探讨β揽香烯对小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞粘附和运动能力的影响。方法：采用细胞培养、电镜及划痕染料示踪技术，研究了β榄香烯对小鼠Ｂ１６黑色素瘤细胞粘附与运动能力、间隙连接结构及其间隙连接通讯功能的影响。结果：２０～４０μｇ／ｍｌ的β榄香烯可显著抑制Ｂ１６细胞对纤维结合蛋白和层粘连蛋白两种基质的粘附，抑制Ｂ１６细胞的运动，延迟吸管尖部所致细胞单层损伤的愈合。结论：提示β榄香烯对Ｂ１６细胞粘附和运动能力的抑制可能是其抗肿瘤转移作用的机制之一。

湘西龙山百合对小鼠B-16黑色素瘤细胞黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响

目的观察不同浓度湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞细胞活力、黑色素含量、酪氨酸酶活性的影响。方法选用同一传代小鼠B-16黑色素瘤细胞并分组,分别加入不同浓度百合提取液、维生素C二种溶液作用3 d后,用MTT法测定B-16细胞活力;用Maeda等的方法测定B-16细胞酪氨酸酶活性;用Victoria等的方法测定B-16细胞黑色素含量。结果湘西龙山百合提取液对小鼠B-16细胞的酪氨酸酶活性、黑色素合成的抑制作用明显强于维生素C,组间差异有统计学意义(P<0.05),且其抑制作用随浓度的增加而增加;同时湘西龙山百合提取液其细胞毒性作用同样强于维生素C,组间差异有统计学意义(P<0.05)。结论百合提取液对B-16细胞的生长、酪氨酸酶活性和黑色素合成的抑制作用强于维生素C,其抑制作用与浓度呈正相关。

重组CCL2小鼠黑色素瘤B-16细胞的建立及生物学活性的鉴定

目的:在小鼠黑色素瘤B-16细胞中克隆表达趋化因子CCL2,以进一步研究趋化因子与肿瘤的关系。方法:从小鼠腹腔巨噬细胞中提取总RNA,RT-PCR扩增CCL2 cDNA,将此片段重组于真核表达载体pcDNA3.0,脂质体FuGENE6转染鼠黑色素瘤B-16细胞,G-418筛选阳性克隆。结果:RT-PCR和免疫细胞化学鉴定转染B-16细胞中有较强CCL2的表达,体外趋化实验表明重组CCL2有生物学活性。结论:获得有趋化活性的重组CCL2的小鼠黑色素瘤B-16细胞。

丹参素钠对小鼠黑色素瘤细胞B16细胞间缝隙连接的影响

【目的】研究丹参素钠(salvianic acid A sodium,SAAS)对小鼠黑色素瘤细胞株B16细胞间缝隙连接(GJIC)的影响及其机制。【方法】采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测SAAS对B16细胞生长的影响,荧光显微镜观察及流式细胞仪荧光示踪法结合分析缝隙连接(GJ)功能变化,并与阳性对照药全反式维甲酸(ATRA)比较,采用western blot法分析缝隙连接蛋白Cx32和Cx43的表达。【结果】以0～8μmol/L SAAS处理B16细胞48 h不影响其生存;用0、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h后,荧光显微镜下观察,SAAS能明显提高B16细胞Calcein传递,流式细胞术分析对照组和试验组的绿色荧光细胞(G4)与双阴性受体细胞(G3)比值(G4/G3)分别是0.10±0.01、0.16±0.02、0.20±0.01、0.21±0.02和0.25±0.02,各试验组G4/G3值显著高于对照组(P<0.01);western blot分析结果显示:用0、1、2、4、8μmol/L SAAS处理细胞48 h能显著提高Cx32、Cx43的表达。【结论】体外较低浓度SAAS能够促进B16细胞细胞间缝隙连接功能,但在一定药物浓度作用后,不能再提高其功能。SAAS促进GJ机制可能是通过上调Cx32、Cx43蛋白表达途径。

6种中药组方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖和黑素生成的影响

目的研究6种中药组方水提物、醇提物对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及黑素生成的影响。方法以MTT法测定各组方对B16细胞的增殖活性；NaOH裂解法测定各组方对B16细胞的黑素生成量。结果组方1、2、3水提物和组方2、4、6醇提物具有明显促细胞增殖作用（P〉0．05）；水提物中细胞增殖率最高的为组方2（0．625mg／ml），增殖率为22．60％；醇提物中细胞增殖率最高的为组方4（0．078mg／ml），增殖率为11．60％。组方1、2、4、5、6水提物和6种组方醇提物均具有促进黑色素生成的作用（P〈0．05）。水提物中黑素增率最高的为组方1（0.313mg／ml），增率为75．38％；醇提物中黑素生成增率最高的为组方1（1．25mg／ml），增率为88．01％。结论各组方对鼠黑素瘤B16细胞增殖及黑素生成均有一定的促进作用，但其作用强度与组方的组成密切相关。

GLS／IL-12对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响

目的:体外检测人GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16的增殖及凋亡的影响。方法:用脂质体将含GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达质粒转染黑色素瘤细胞B16并用RT-PCR检测其表达,再用MTT试验、Hoechst33258染色、AO/EB染色和AnnexinⅤ—FITC流式细胞分析检测基因表达产物对B16细胞的增殖抑制与促凋亡作用。结果:GLS活性肽和小鼠IL-12基因能在B16细胞中表达,MTT法观察到表达产物对B16有明显的细胞增殖抑制作用,经Hoechst33258染色、AO/EB染色和流式细胞分析观察到细胞核浓缩、深染、细胞膜改变等凋亡特征,凋亡指数明显高于对照组。结论:GLS活性肽和小鼠IL-12基因的共表达产物对黑色素瘤细胞B16具有明显的增殖抑制作用及促凋亡作用。

50MeV/u^(12)C^(6+) 离子辐照B_(16) 细胞氧效应研究

实 验以体外 培养的 小鼠 Ｂ１６ 黑色 素瘤细 胞为 材料， 在５０ Ｍｅ Ｖ／ｕ １２ Ｃ６ ＋ 离子 的展 宽 Ｂｒａｇｇ峰区辐 照细胞 ，得到的结 果是这 种离子的 Ｏ Ｅ Ｒ 值为 １２５ 。说明这 种能量的 离子具 有低的氧 效应。

复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响

目的探讨复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖及酪氨酸酶活性的影响。方法采用MTT法测定不同浓度的复色1号方对小鼠B16黑素瘤细胞增殖的影响,多巴速率氧化法测定对酪氨酸酶活性的影响,对其结果进行统计分析。结果复色1号方浓度在0.001～0.01g/l,范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比无统计学意义(P>0.05),0.05～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞的增殖与对照组相比有显著意义(P<0.05),呈现一定的抑制作用;复色1号方在0.001～0.1g/l浓度范围内对小鼠B16黑素瘤细胞中酪氨酸酶活性的影响与对照组相比,各浓度含药培养基组的A值均有显著性差异(P<0.05),呈剂量依赖性激活作用。在0.001～0.01g/l浓度范围内,复色1号方的最佳激活浓度为0.01g/l。结论复色1号方没有促进小鼠B16黑素瘤细胞增殖的作用;在一定浓度范围内(0.001～0.1g/l),对小鼠B16黑素瘤细胞酪氨酸酶的活性呈剂量依赖型激活作用。

PGI_2/TxA_2、tPA/PAI动态平衡与黑色素瘤B_(16)侵袭率的关系

目的了解肿瘤侵袭率与ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ平衡的关系。方法参照Ｎｉｃｏｌｓｏｎ报道的方法建立体外黑色素瘤Ｂ１６侵袭血管内皮细胞单层模型，利用放射免疫酶联技术检测肿瘤侵袭过程中，ＰＧＩ２、ＴｘＡ２、ｔＰＡ、ＰＡＩ时相性分泌变化，以探究ＰＧＩ２／ＴｘＡ２、ｔＰＡ／ＰＡＩ比值变化，在肿瘤侵袭和转移过程中的作用。结果在肿瘤侵袭过程中，总ＰＧＩ２、ＰＡＩ分泌量呈下降趋势，ＴｘＡ２和ＰＡＩ分泌呈上升趋势；黑色素瘤Ｂ１６细胞能够通过分泌ｔＰＡ、ＰＡＩ、ＰＧＩ２和ＴｘＡ２来破坏血液循环系统中ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ平衡；ＰＧＩ２／ＴｘＡ２、ｔＰＡ／ＰＡＩ比值变化，肿瘤侵袭率呈对应性变动。结论ＰＧＩ２／ＴｘＡ２和ｔＰＡ／ＰＡＩ分泌的平衡失调可能是肿瘤侵袭和转移形成的重要原因之一。

IL-17对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨白细胞介素-17(IL-17)对小鼠黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭的影响。方法:体外培养小鼠黑色素瘤B16细胞,选择对数生长期的细胞,在培养基中加入一定浓度的IL-17,并设空白对照组,MTT法检测IL-17对B16细胞增殖能力的影响;transwell侵袭实验检测IL-17对B16细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性。结果:IL-17处理组与对照组相比,B16细胞的增殖能力无变化(P>0.05)。transwell侵袭实验显示,IL-17处理组B16细胞穿膜细胞数明显增多(P<0.01)。明胶酶谱实验显示,IL-17处理后细胞MMP-2和MMP-9的表达活性增强(P<0.01)。结论:IL-17对黑色素瘤B16F10细胞的增殖能力无影响,但可促进细胞侵袭,可能通过增强MMP-2和MMP-9的活性而发挥作用。

三氧化二砷对黑色素瘤B-16细胞增殖与凋亡的影响

目的：观察三氧化二砷（As2O3）对体外培养黑色素瘤B—16细胞增殖和凋亡的影响。方法：应用Mrr比色法检测细胞增殖活力；采用流式细胞术测定细胞周期及凋亡率；倒置显微镜、激光共聚焦显微镜和透射电子显微镜观察细胞形态学变化和凋亡特征。结果：6．25～100μmol／LAs2O3作用细胞24、48小时后，细胞增殖活力明显下降，且具有时一效和量一效依赖关系；50μmol／LAs2O3作用细胞12小时后。细胞凋亡率增加。S期细胞百分率下降；倒置显微镜下可见细胞生长密度减小、形态变圆、体积缩小；hoechst33258核染色可见核染色质边集、浓集；电子显微镜下可见到典型的凋亡细胞。结论：三氧化二砷能抑制黑色素瘤B16细胞的增殖并可诱导其发生凋亡.

胆囊良恶性病变 bcl-2 和 P_(16)蛋白产物的表达和意义

用免疫组化方法观察２４例胆囊粘膜异型增生和３８例胆囊腺癌中ｂｃｌ－２和Ｐ１６蛋白的表达。结果显示：正常胆囊粘膜中ｂｃｌ－２和Ｐ１６均未见表达，而胆囊粘膜上皮异型增生及胆囊腺癌阳性率较正常组织明显增加（Ｐ＜０．０１），ｂｃｌ－２和Ｐ１６蛋白的阳性率也随着异型增生程度增加而增高。Ｐ１６表达与胆囊腺癌淋巴结转移有关。结果表明，ｂｃｌ－２蛋白表达对胆囊腺癌的增殖有一定意义，Ｐ１６在胆囊粘膜癌变和胆囊腺癌进展中起重要作用。

沉默pim-3基因对黑色素瘤细胞B16的抑制作用

目的:观察靶向沉默原癌基因pim-3对小鼠黑色素瘤细胞B16的抑制作用。方法:用脂质体将特异性靶向沉默pim-3载体(pim-3-shRNA)和pim-3过表达载体(pim-3-MIGR1)转染到黑色素瘤细胞B16中,荧光定量PCR和Western blotting法检测pim-3 mRNA和蛋白表达的变化,Annexin V/PI染色和TUNEL染色检测细胞凋亡情况,荧光定量PCR和Western blotting法检测pBad、Bcl-2、Bcl-xl、Bax、caspase-3等凋亡相关分子表达的变化,MTT法检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期,RTCAxCELLigence系统检测细胞迁移情况,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭的变化。结果:转染pim-3-sh RNA组B16细胞的pim-3mRNA及蛋白表达较对照组明显下降(P<0.05),转染pim-3过表达质粒组B16细胞的pim-3 mRNA及蛋白表达较对照组显著增加(P<0.05)。转染pim-3-shRNA后,B16细胞的凋亡明显增加,在此基础上共转pim-3过表达质粒后则明显逆转沉默pim-3所引起的凋亡(P<0.05);进一步检测发现沉默pim-3明显下调凋亡相关分子p-Bad、Bcl-2、Bcl-xl的表达,上调Bax的表达,最终引起caspase-3活性增加(P<0.05)。沉默pim-3后B16细胞增殖和迁移受到抑制(P<0.05),而细胞周期无明显变化。结论:靶向沉默pim-3基因能促进黑色素瘤细胞的凋亡,抑制细胞的增殖和迁移,提示pim-3基因可以作为黑色素瘤基因治疗的新靶点。

知母皂苷AⅢ对黑色素瘤B16细胞生长和Bax,Bcl-2 mRNA的影响

目的观察知母皂苷AⅢ对体外培养黑色素瘤B16细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养B16细胞,分别以浓度为1,2,4,8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ作用24 h,通过MTT比色法检测对细胞生长的影响;倒置显微镜观察对细胞形态的影响;Annexin V-FITC/PI双染流式检测对细胞凋亡的影响;逆转录PCR检测对细胞凋亡相关基因Bax,Bcl-2的影响。结果 8,16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ明显抑制细胞增殖,24 h的半数抑制浓度(IC50)为10.16μmol·L-1;细胞形态显示16μmol·L-1的知母皂苷AⅢ使细胞体积缩小变圆,细胞减少。与对照组比较,10μmol·L-1知母皂苷AⅢ细胞凋亡率为(4.83±0.25)%(P<0.01),而Bax/Bcl-2比值升高(P<0.05)。结论体外实验显示知母皂苷AⅢ能明显抑制B16细胞生长,并能诱导部分细胞发生凋亡。由于诱导细胞凋亡率与24 h的IC50有一定差距,因此知母皂苷AⅢ对B16细胞生长的影响可能不仅仅与激活凋亡信号通路有关,还与其他细胞生长信号通路有关。

炎症因子IL-23对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭能力的影响

目的:探讨白细胞介素-23(IL-23)对黑色素瘤B16F10细胞增殖和侵袭能力的影响。方法:体外培养小鼠黑色素瘤B16F10细胞,采用MTT法检测IL-23对B16细胞增殖能力的影响;Transwell侵袭实验检测IL-23对B16细胞侵袭能力的影响;明胶酶谱法分析IL-23处理后肿瘤细胞B16细胞分泌MMP-2和MMP-9的活性表达情况。免疫印迹杂交法检测IL-23处理组肿瘤细胞核转录因子κB P65(NF-κB P65)的表达水平。结果:与对照组相比,IL-23处理组B16F10细胞穿膜数明显增多(P<0.01);肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达活性增强(P<0.01);核转录因子NF-κB P65的表达水平显著提高(P<0.01);B16细胞的增殖能力未见明显变化(P>0.05)。结论:IL-23对黑色素瘤B16F10细胞的增殖能力无影响,可通过上调MMP-2和MMP-9的活性促进肿瘤细胞侵袭,其分子机制可能与NF-κB信号通路的激活相关。