血清MBL、BAFF与磷脂酶A2受体相关特发性膜性肾病患者肾功能及疗效的关系

目的探讨血清甘露聚糖结合凝集素(MBL)、肿瘤坏死因子家族B细胞活化因子(BAFF)与磷脂酶A2受体(PLA2R)相关特发性膜性肾病(IMN)患者肾功能和疗效的关系。方法选取PLA2R相关IMN患者103例作为观察组,并根据疗效将PLA2R相关IMN患者分为未缓解组(n=44)、缓解组(n=59);同期另选健康体检志愿者67例作为对照组。收集相关资料;用酶联免疫吸法检测血清MBL、BAFF、24 h尿蛋白,PA速率微板法试剂盒检测血肌酐,计算估计肾小球滤过率(eGFR)。Spearman相关法分析PLA2R相关IMN患者血清MBL、BAFF水平与肾功能指标的相关性;多因素Logistic回归分析影响PLA2R相关IMN患者疗效的因素,受试者工作特征(ROC)曲线分析血清MBL、BAFF对PLA2R相关IMN患者治疗未缓解的预测价值。结果观察组血清MBL、BAFF水平及24 h尿蛋白高于对照组,eGFR低于对照组(P均<0.05)。PLA2R相关IMN患者血清MBL、BAFF水平与eGFR呈负相关(r分别为-0.777、-0.760,P均<0.05),与24 h尿蛋白呈正相关(r分别为0.883、0.828,P均<0.05)。未缓解组白蛋白、eGFR低于缓解组,24 h尿蛋白、MBL、BAFF高于缓解组(P均<0.05),两组性别、年龄、血肌酐、血尿酸、血尿素氮、总胆固醇、甘油三酯、IgG、补体3和PLA2R抗体滴度比较差异无统计学意义(P均>0.05)。白蛋白和eGFR升高为PLA2R相关IMN患者疗效的独立保护因素(P均<0.05),24 h尿蛋白、MBL和BAFF升高为独立危险因素(P均<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清MBL、BAFF联合预测PLA2R相关IMN患者治疗未缓解的曲线下面积(0.880)大于二者单独预测(0.791、0.787),比较差异有统计学意义(Z分别为2.694、2.613,P均<0.05)。结论血清MBL、BAFF水平升高与PLA2R相关IMN患者肾功能降低及疗效差有关,二者联合检测预测PLA2R相关IMN患者治疗未缓解的价值较高。

程序性死亡因子-1、程序性死亡配体-1、TNF家族B细胞活化因子-R在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中的表达

目的 分析程序性死亡因子-1(programmed death factor-1,PD-1)、程序性死亡配体-1(programmed death-ligand-1,PDL1)、TNF家族B细胞活化因子-R(B cell-activating factor-R belonging to the TNF family,BAFF-R)在弥漫大B细胞淋巴瘤组织中的差异性表达及临床意义。方法 以延安大学附属医院血液科2019年1月至2020年4月初诊的28例弥漫性大B细胞淋巴瘤组织及瘤旁组织样本作为研究对象,采用免疫组化法检测其PD-1、PD-L1及BAFF-R表达,然后统计分析PD-1、PD-L1及BAFF-R表达与病人临床病理特征的关系。结果 弥漫性大B细胞淋巴瘤组织PD-1、PD-L1及BAFF-R阳性表达积分分别为(5.44±0.79)、(5.58±0.86)及(4.49±0.65)分,瘤旁组织PD-1、PD-L1及BAFF-R阳性表达积分分别为(3.31±0.35)、(3.25±0.34)及(2.77±0.27)分,差异有统计意义(P<0.05);淋巴瘤组织PD-1表达差异与临床病理特征差异无统计学意义(P>0.05);淋巴瘤组织PD-L1表达与Ann Arbor/Costwards分期、病理分型及EBV是否阳性差异有统计意义(P<0.05);淋巴瘤组织BAFF-R表达与Ann Arbor/Costwards分期、病理分型、IPI评分及EBV是否阳性差异有统计意义(P<0.05)。结论 PD-L1及BAFF-R在弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中呈高表达,且与弥漫性大B细胞淋巴瘤分期、病理分型及EBV感染密切相关,二者联合检测对病人预后评估可能具有较高价值;对难治性弥漫大B细胞淋巴瘤而言,以PD-L1及BAFF-R的信号通路为靶点,是潜在的免疫治疗方案。

IgG4相关性眼病泪腺病变的病理特点及BAFF和APRIL的表达

目的观察IgG4相关性眼病(IgG4-ROD)泪腺病变的病理特点,探讨B细胞活化因子(BAFF)和增殖诱导配体(APRIL)在IgG4-ROD泪腺病变中的作用。方法收集13例IgG4-ROD泪腺病变患者(15眼)的泪腺肿物为实验组,8例因其他疾病行眶内容物摘除患者(8眼)的正常泪腺组织为对照组。采用HE染色法观察泪腺的病理形态变化,免疫组织化学染色法检测泪腺中BAFF和APRIL的表达情况,并对二者表达水平进行相关性分析。结果实验组泪腺出现弥漫性淋巴细胞和浆细胞浸润,广泛淋巴滤泡形成,纤维组织增生的病理改变。实验组泪腺中BAFF和APRIL的表达水平均明显高于对照组(均P<0.05),且二者的表达呈正相关(P<0.05)。结论IgG4-ROD泪腺病变表现出淋巴细胞和浆细胞弥漫浸润、纤维组织增生的病理特点,这可能与BAFF和APRIL表达上调导致的免疫调节失衡有关。

Expression and Change of B Cell Activation Factor of the TNF Family(BAFF) Gene between Human Normal and Inflamed Fallopian Tubes

Objective To investigate the expression of B cell activation factor of the TNF family （BAFF） gene between human normal and inflamed fallopian tubes. Methods Tissue samples of human normal fallopian tube （n=20） and inflamed fallopian tube （n=20） were collected. The expression of BAFF gene was determined by the real- time reverse transcription polymerase chain reaction （RT-PCR） and immunohistochemistry. Results BAFF immunostaining appeared on the cellular membrane and in the cytoplasm of tubal epithelial cells. Both BAFF protein and mRNA in normal fallopian tubes had lower levels than those in inflamed fallopian tubes （P〈0.01）. Conclusion BAFF protein and mRNA are present in human tubal tissues. BAFF gene in human inflamed fallopian tube would have a high expression.

B细胞刺激因子在特发性炎性肌病相关肺间质病变的临床意义

目的探究B细胞刺激因子(BAFF)在特发性炎性肌病(IIM)相关肺间质病变(ILD)中的临床意义。方法纳入122例IIM患者,其中86例并发ILD,按性别、年龄匹配40例正常人作为对照,采用酶联免疫吸附试验检测BAFF,分析其临床意义。结果与non-ILD组相比,IIM-ILD组BAFF水平显著升高[2.19(1.07~4.54)ng mL vs.1.14(0.61~2.30)ng mL,P=0.005],是IIM-ILD的独立危险因素。抗MDA5抗体及抗合成酶抗体(ASA)阳性的IIM患者BAFF水平显著高于双阴性患者(P<0.05)。BAFF>3.74 ng mL时,对于诊断IIM-ILD的敏感性为36.0%,特异性为97.2%(AUC=0.681,P=0.002);联合KL-6时,对于诊断IIM-ILD的敏感性为82.6%,特异性为80.6%(AUC=0.868,P<0.001)。BAFF与铁蛋白呈正相关(r=0.368,P<0.001),与KL-6、肺部HRCT评分、肺功能无明显相关性。结论BAFF在IIM-ILD患者中显著升高,可作为IIM人群合并ILD的生物标志物。

血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值

目的:分析血清B细胞活化因子(BAFF)、新饱食分子蛋白1(Nesfatin-1)、NOD样受体家族含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)水平与癫痫患者预后的相关性及其预测价值。方法:选取2019年6月至2021年6月该院收治的149例癫痫患者进行前瞻性研究。治疗后随访1年,根据1年后预后情况将患者分为预后不良组(n=43)和预后良好组(n=106)。比较两组治疗前及治疗3、6个月后血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平,采用Spearman相关性分析BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后的相关性,并采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合检测预测癫痫患者预后的价值。结果:治疗3、6个月后,预后不良组血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平均高于预后良好组,差异有统计学意义(P<0.05);Spearman相关性分析结果显示,BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关(r>0,P<0.05);治疗6个月后,血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平单项及联合预测癫痫患者预后的曲线下面积(AUC)分别为0.730、0.756、0.737、0.906,均具有一定预测价值,其中联合检测预测价值最高。结论:血清BAFF、Nesfatin-1、NLRP3水平与癫痫患者预后均呈正相关,且三者联合检测预测癫痫患者的价值高于各单项检测。

B细胞活化因子的纯化和复性参数的优化研究

目的 获得高纯度和高活性的B细胞活化因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfamily ,BAFF)。 方法 重组原核表达载体 pQE 80L BAFF112 2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBAFF112 2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。 结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBAFF112 2 85蛋白。结论 优化了BAFF蛋白的纯化和复性的参数 ,所获结果为进一步研究创造了条件。

重组人BAFF_(112-285)的制备及活性分析

目的 制备具有功能活性的重组人TNF家族的B细胞激活因子 (BcellactivatingfactorbelongingtotheTNFfa mily ,BAFF)胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基段 (rhBAFF1 1 2 -2 85) ,为BAFF的深入研究奠定基础。方法 提取人HL 6 0细胞总RNA ,经RT PCR扩增编码人BAFF胞外区 1 1 2～ 2 85氨基酸残基 (BAFF1 1 2 -2 85)的cDNA ,行序列测定后 ,构建于原核表达载体pQE 80L并转化大肠杆菌DH5α ,经IPTG诱导表达rhBAFF1 1 2 -2 85,Ni2 + NTA层析纯化 ,进而经3 H TdR掺入实验检测其免疫学活性。结果 RT PCR扩增得到了 5 2 5bp的DNA片段 ,序列分析与GenBank中报道的编码人BAFF1 1 2 -2 85的cDNA序列一致 ,该胞外区片段在大肠杆菌中获得了高效表达 ,表达水平达细菌总蛋白的 4 5 .7% ,经纯化后纯度可达 98.4 % ,活性检测证实其能明显刺激外周血淋巴细胞活化。结论 利用大肠杆菌可高效表达rhBAFF1 1 2 -2 85,所获纯化产物具有生物学活性 。

系统性红斑狼疮患者血清B淋巴细胞活化因子的检测及意义

目的探讨血清B淋巴细胞活化因子(BAFF)在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法采用ELISA法检测45例SLE患者(SLE组)血清BAFF水平,免疫比浊法检测血清补体C3、C4水平;计算疾病活动性(SLAM)和损伤指数(SLICC/ACR);对BAFF水平与补体C3和C4、SLAM、SLICC/ACR进行相关性分析。对照组为45例查体健康者。结果 SLE组血清BAFF水平明显高于对照组,抗dsDNA抗体阳性者(13例)BAFF水平明显高于阴性者,P均<0.001。BAFF水平与补体C3呈显著负相关(r=-0.298,P=0.047),与补体C4无明显相关性,与SLAM呈显著正相关(r=0.450,P=0.002);与SLICC/ACR呈显著正相关(r=0.388,P=0.009)。结论 BAFF可能参与了SLE的发病与发展,检测血清BAFF水平有助于判断SLE活动性及预后;应用BAFF拮抗剂有望改善SLE病情。

酸甘生津方及其拆方对干燥综合征模型小鼠颌下腺BAFF的影响

目的观察酸甘生津方及其拆方对干燥综合征(SS)模型小鼠颌下腺组织的病理表现及免疫组化中B细胞活化因子(BAFF)的影响。方法将60只BALB/C小鼠随机分为全方组,养阴、活血、解毒3个拆方组及空白组,模型组共六组。除空白组外,其余五组小鼠采用同种小鼠颌下腺接种方法造模,造模2周后用免疫组化法观察各组小鼠颌下腺BAFF含量的变化,分析比较各组间表达差异。结果组织切片总阳性率:全方组与活血组相等,与养阴组和解毒组比较,差异有统计学意义(P<0.05);SS模型小鼠颌下腺组织BAFF表达水平:各给药组均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。其中全方组、活血组及养阴组的BAFF表达水平均低于解毒组,差异有统计学意义(P<0.01),但此三组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论酸甘生津方及其拆方对模型组小鼠颌下腺BAFF过度分泌有较好的抑制作用,可能通过调控BAFF表达来抑制B细胞异常活化。

B淋巴细胞活化因子特异的单链DNA适体的人工进化

目的:进化筛选与B淋巴细胞活化因子(B cell activating factor be longing to the TNF family,BAFF)特异结合的单链DNA适体,鉴定其结合力。方法:应用指数方式富集的配体系统进化(systemati cevolution of ligands by exponential enrich-ment,SELEX)技术,将随机序列寡核苷酸文库与BAFF分子相互作用,分离出结合的寡核苷酸配体,经反复扩增、筛选数个循环,获得重组人BAFF的单链DNA适体,应用Dot blotting鉴定其结合力,酶联法比较各适体序列对BAFF的相对结合力。结果:优化实验条件后成功进行了13轮次筛选,随机选取42个阳性克隆测序,各序列GC含量最高达75%,分为6类不同序列;Dotblotting证实这些适体均与BAFF相结合;比较各适体序列结合BAFF的光密度值,以序列44光密度值最高(0.752,P<0.05),具有对BAFF相对最高结合力。结论:首次成功获得特异结合BAFF的高亲和力的单链DNA适体,为研发防治肿瘤和自身免疫疾病新药奠定了基础。

类风湿关节炎中B细胞活化因子的研究

目的探讨B淋巴细胞活化子(B cell activativing factor belonging to the TNFfamily,BAFF)在RA患者血清中的水平和临床意义。方法用ELISA法检测14例类风湿关节炎患者和9例正常人血清中BAFF的表达,并测定两组临床指标:类风湿因子(RF)、丙种反应蛋白(CRP)、红细胞沉降率(ESR)、晨僵时间(Ms,以min为单位)、关节肿胀数目(Number,不分关节大小、部位)。比较两组血清BAFF水平差异;在RA组中:将BAFF分别与以上临床指标进行pearson相关性分析。结果RA组血清BAFF水平(0.82±0.10)ng/ml,显著高于正常组(0.33±0.07)ng/ml,P=0.0001。pearson相关性分析表明:BAFF与RF成相关性(r=0.38,P=0.39)、BAFF与Ms无相关性(r=0.46,P=0.43)、BAFF与Number无相关(r=0.47,P=0.42),BAFF与CRP无相关性(r=(0.25,P=0.63)、BAFF与ESR无相关性(r=(0.09,P=0.86)。结论①BAFF在RA组升高;②BAFF水平还不能作为临床评价RA活动与否的指标,但BAFF可能成为新的治疗靶点。

B细胞活化因子的双向性:促进调节性T细胞分泌白细胞介素-35

目的研究B细胞活化因子(B cell activation factor of the tumor necrosis factor family,BAFF)对调节性T细胞(Tregs)分泌抑制性细胞因子白细胞介素-35(interleukin-35,IL-35)的影响,验证系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)中BAFF对免疫反应的双向调节机制。方法磁珠分选狼疮模型鼠Tregs,经BAFF刺激后采用qRT-PCR及流式细胞术检测其分泌IL-35浓度。比较正常对照鼠、狼疮模型鼠及经尾静脉注射抗BAFF蛋白后狼疮模型鼠脾脏Tregs频率及分泌IL-35情况。结果BAFF能够有效促进Tregs分泌IL-35。相对于正常对照鼠,狼疮模型鼠(血清中BAFF升高)脾脏Tregs分泌较高浓度的IL-35,而中和其循环中BAFF后,Tregs分泌IL-35减少。结论在SLE发病机制中,BAFF不仅是重要的致病因素,还能够通过促进Tregs细胞分泌IL-35发挥负向免疫调节效应。

人sΔBAFF的高效原核表达及纯化

目的克隆TNF家族B细胞激活因子（B cell activating factor to the TNF family,BAFF）胞外区134～285（sBAFF134-285）氨基酸残基段缺失突变体（s△BAFF）的cDNA,并进行表达及纯化.方法以构建的重组质粒pUC19/sBAFF为模板,采用一步反向PCR法,扩增缺失编码sBAFF的142～160位氨基酸的核苷酸序列.经测序证实后,克隆入原核表达载体pQE-80L.经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测表达产物,Ni2＋-NTA柱层析纯化目的蛋白.结果经一步反向PCR扩增后得到401 bp的DNA片段,该片段序列与GenBank报道的编码人△BAFF的胞外区（s△BAFF）cDNA序列一致.含s△BAFF的表达载体在大肠杆菌中可表达出相对分子质量为18 000的蛋白质并以包涵体的形式存在,经Ni2＋-NTA柱层析纯化后得到高纯度的目的蛋白.结论已成功地制备出人s△BAFF蛋白,为其功能的研究创造了条件.

BAFF,IL-10在干燥综合征患者血清中的表达及其意义

目的检测原发性干燥综合征(PSS)患者血清中人B细胞刺激因子(BAFF)、白细胞介素-10(IL-10)表达水平及相关性,并探讨其与干燥综合征发病的关系。方法收集确诊为PSS患者血液标本28例为实验组,并以28例年龄与之相匹配的健康对照者血液作为对照组。通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测对照组和实验组患者血清BAFF,IL-10表达水平,并行BAFF与IL-10指标的相关性分析。结果 PSS组血清中BAFF,IL-10表达水平明显高于正常对照组,差异具有统计学意义(P<0.05);PSS组血清BAFF与IL-10表达水平呈正相关(P<0.05)。结论 BAFF,IL-10在PSS患者血清中的表达明显上调,提示两者参与PSS患者自身免疫性炎症反应过程,可以作为PSS诊断的辅助指标及治疗靶点;PSS患者血清IL-10可能上调血清BAFF的表达。

活血解毒方对干燥综合征小鼠干扰素-γ、B细胞活化因子及其受体的干预作用研究

目的探索活血解毒方对干燥综合征小鼠干扰素(interferon,IFN)-γ、B细胞活化因子(B cell activating factor belonging to the TNF family,BAFF)及其受体BAFF-R的影响及其机制。方法以C57BL/6j小鼠及NOD/Ltj小鼠为实验动物,分别以蒸馏水、白芍总苷混悬液、活血解毒方汤剂灌胃干预,干预过程中观察小鼠一般状态,于干预60天后测量小鼠唾液流率,并取小鼠颌下腺及血清,测量颌下腺指数及血清中BAFF、BAFF-R、IFN-γ及颌下腺BAFF、BAFF-R水平。结果正常组唾液流率均较其他各组高(P<0.05),实验第40天开始,对照组及治疗组的唾液流率开始较模型组升高(P<0.05),而对照组与治疗组之间差异不明显(P>0.05);第60天对照组与治疗组之间差异明显(P<0.05)。颌下腺指数,正常组较模型组、对照组、治疗组高(P<0.05)。模型组较对照组、治疗组低(P<0.05),对照组与治疗组之间差异不明显(P>0.05)。血清BAFF、BAFF-R、IFN-γ及颌下腺BAFF、BAFF-R水平,正常组均较模型组、对照组、治疗组低(P<0.05),模型组较对照组、治疗组高(P<0.05),其中对照组水平高于治疗组(P<0.05),各组之间比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论活血解毒方可减轻NOD小鼠颌下腺炎症,增加唾液分泌量,降低血清中BAFF、BAFF-R、IFN-γ及颌下腺BAFF、BAFF-R的水平,从而达到治疗干燥综合征的作用。

含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子疫苗对狼疮肾炎模型小鼠的保护作用

考察含对硝基苯丙氨酸的B淋巴细胞刺激因子(BAFF)治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的效果。利用本研究前期构建的工程菌,表达纯化了B淋巴细胞刺激因子的可溶型突变体(sm BAFF)以及在其65位定点引入了对硝基苯丙氨酸的改构体(pNO_2Phe^(65)sm BAFF)。通过考察pNO_2Phe^(65)sm BAFF体外促小鼠淋巴细胞增殖活性、免疫原性以及所诱导的抗血清对天然BAFF活性的抑制作用,评价了其用于治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的可行性;同时采用了cGVHD(graft-versus-host disease)诱导的狼疮肾炎小鼠模型评价了pNO_2Phe^(65)sm BAFF的药理活性。结果表明:定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO_2Phe^(65)sm BAFF不具有促进小鼠淋巴细胞增殖的能力;由于对硝基苯丙氨酸的引入显著增强了蛋白的免疫原性,诱导机体产生了可以抑制天然BAFF活性的交叉抗体;在cGVHD诱导的狼疮肾炎小鼠模型中,pNO_2Phe^(65)sm BAFF可显著减轻疾病症状。定点引入了对硝基苯丙氨酸的pNO_2Phe^(65)sm BAFF可以作为治疗BAFF过表达的自身免疫性疾病的候选分子。

PD-L1和BAFF-R在胃弥漫性大B细胞淋巴瘤中的表达及其临床意义

目的探讨程序性死亡蛋白受体-1配体(programmed death ligand-1, PD-L1)和TNF家族的B细胞活化因子(B cell-activating factor belonging to the TNF family, BAFF-R)在胃弥漫性大B细胞淋巴瘤(gastric diffuse large B-cell lymphoma, GDLBCL)的瘤组织和瘤旁组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组织化学法和定量逆转录-聚合酶链反应法(quantitative real time polymerase chain reaction, qRT-PCR)检测26例GDLBCL瘤组织和瘤旁组织中的PD-L1和BAFF-R的表达,分析PD-L1和BAFF-R的表达与GDLBCL临床分期和病理分型之间的关系和PD-L1与BAFF-R表达的相关性。结果 PD-L1和BAFF-R在GDLBCL中的表达显著高于瘤旁组织(P<0.01)。PD-L1和BAFF-R表达与GDLBCL分期及病理分型均有明显相关性(P<0.01),PD-L1与BAFF-R有相关性(P<0.01)。结论 PDL-1和BAFF-R表达上调与GDLBCL分期及病理分型密切相关,联合检测PD-L1和BAFF-R可能成为GDLBCL有价值的预后指标。以PD-L1和BAFF-R信号通路为靶点的治疗有望成为GDLBLC免疫治疗的潜在方案。

MMP-9、BAFF在原发性干燥综合征患者唇腺组织中表达的相关研究

目的探讨基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)、B细胞激活因子(B cell activatingfactor of the tumor necrosis factor family,BAFF)在原发性干燥综合征(PSS)发病过程中的作用和意义。方法采用免疫组化SP法检测50例PSS患者及30例正常对照组唇腺组织中MMP-9、BAFF的表达情况。结果50例PSS患者唇腺组织中MMP-9均阳性高表达,其表达的面积(14382.38±657.39)μm2、累积光密度(2705.46±868.76)均高于正常对照组(8445.10±361.84)μm2、(1114.26±570.82),且随着淋巴细胞浸润等级的增加,MMP-9表达增强,差异有统计学意义(P<0.05);50例PSS组患者唇腺组织中BAFF均阳性表达,其表达的面积(13586.72±1569.45)μm2、累积光密度(2073.57±850.73)均高于正常对照组(7116.83±338.19)μm2、(850.73±120.31),且随着淋巴细胞浸润等级的增加,BAFF表达增强(P<0.05);PSS组患者唇腺组织中MMP-9与BAFF的表达呈正相关(P<0.05)。结论 MMP-9、BAFF的异常表达与原发性干燥综合征患者唇腺组织的破坏有关,二者参与了PSS的发病过程。

鼠TNF家族的B细胞活化因子ORF基因的克隆及原核表达

目的克隆鼠TNF家族的B细胞活化因子(Bcell activating factor of TNF family,BAFF)ORF基因,并进行原核表达及纯化。方法提取鼠新鲜脾脏组织总RNA,经RT-PCR扩增BAFF ORF基因,测序后,克隆入载体pMAL-c2x,构建重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF,转化大肠杆菌Rosseta(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经亲和层析纯化后,进行Western blot分析。结果 RT-PCR扩增得到约930bp的cDNA,其序列与GenBank中登录的鼠BAFF ORF cDNA序列的同源性达99.9%;重组表达质粒pMAL-c2x/BAFF ORF经酶切鉴定构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为76500,IPTG终浓度为0.9mmol/L,诱导时间为4h,目的蛋白的表达量最高,破菌上清和沉淀中均可见目的蛋白条带,可溶性蛋白的表达量占全菌总蛋白的49%;纯化的重组蛋白纯度可达90%,含量为0.9mg/ml,且具有良好的反应原性。结论已成功克隆了鼠BAFF ORF基因,并进行了原核表达及纯化,为进一步研究其生物功能奠定了基础。