siRNA介导BMP7基因沉默对人肝癌HepG2细胞增殖和迁移的影响

目的:采用RNA干扰技术(RNA interference,RNAi)抑制骨形态发生蛋白7(bone morphogenetic protein 7,BMP7)的表达,观察BMP7基因沉默对人肝癌Hep G_2细胞增殖和迁移的影响.方法:设计并化学合成针对BMP7的3对小干扰RNA(small interfering RNA,si RNA),使用Trans Lipid&#174;HL Transfection Reagent瞬时转染人肝癌Hep G_2细胞,并设正常对照组、Negative-si RNA组及BMP7-si RNA-1、BMP7-siRNA-2、BMP7-siRN A-3转染组.运用半定量逆转录聚合酶链反应(reverse transcription-polymerase chain reaction,RTPCR)和Western blot法分别从m RNA和蛋白水平检测Hep G_2细胞中BMP7的表达变化,选取沉默效果最明显的si RNA片段进行后续实验.采用MTT比色法及Transwell迁移实验分别检测转染后细胞增殖及迁移的变化,Western blot法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Bax、Bcl-2、Caspase3)表达情况,流式细胞仪检测转染后细胞周期变化.结果:RT-PCR和Western blot结果显示,BMP7-s i R N A-3转染组B M P 7抑制效果最明显(P<0.01),选取BMP7-si RNA-3转染组进行后续实验.MTT比色法显示,转染后48,72 h细胞生长增殖均受到抑制(P<0.01).Transwell迁移实验显示,转染24 h后,BMP7-si RNA-3转染组Hep G_2细胞穿膜数均明显低于正常组和Negative-si RNA组(P<0.01).Western blot检测发现BMP7-si RNA-3组比对照组的细胞凋亡相关蛋白Bax、Caspase3表达增加(P<0.01),Bcl-2表达差异无统计学意义.流式细胞仪检测发现转染后48 h,BMP7-si RNA-3组Hep G_2细胞被阻滞在G_2期(P<0.01).结论:si RNA介导BMP7基因沉默对人肝癌H e p G 2细胞的增殖与迁移具有抑制作用,对细胞凋亡有促进作用,并可阻滞细胞在G_2期.

四种参考作物蒸散量综合法的比较

参考作物蒸散量(ET0)的估算是作物需水量计算的关键,诸多估算方法在不同地区具有不同的适应性。本文利用中国农业主产区6个代表站点的气象数据,以FAO 56 Penman-Monteith(PM)为标准,对常用的1963 Penman(Pen63)、FAO 1979 Penman(FAO 79)、FAO 24 Penman(FAO 24)及1996Kimberly Penman(Kpen)共4种参考作物蒸散量综合方法进行比较评价。结果表明:(1)Pen63、FAO 79及Kpen的日估算值均比PM估算值偏高,FAO 24偏低,其平均偏差分别为0.28、0.52、0和-0.17mm?d-1,相对偏差为16.0%、25.2%、2.4%、-5.3%,相对均方根误差为12.1%、22.4%、14.2%和13.5%。(2)Pen63、FAO79的月估算值显著高于PM值,在高估最大的5月份平均偏高12.5mm(10.8%)和28.2mm(22.6%)。FAO24表现为低估,低估最大的月份平均偏低11.4mm(8.1%),但在南方站点多数月份的估算值与PM估算值无显著差异。Kpen月估算值与PM估算值相比,既有高估(5-10月),也有低估,高估最大的月份平均偏高19.7mm(14.5%),且在南方站点的秋冬季有近6个月与PM无显著差异。(3)Pen63和FAO79的年值均显著大于PM年值,平均偏高103.8mm(11.8%)和191.5mm(21.3%)。FAO24年平均低估PM值60.9mm(6.3%),Kpen则平均高估50.5mm(5.8%)。(4)时间尺度对评价结果具有一定影响,4种综合法依据日、年值的评价效果排序分别为Pen63>FAO24>Kpen>FAO79和Kpen>FAO24>Pen63>FAO79。在日尺度下4种方法更适于湿润气候,但年尺度下仅FAO79和FAO24较适于湿润气候。可见,4种综合法以Pen63普适性最好,FAO79最低,因此使用FAO79前对其进行适应性评价尤为重要。