miR-519b-3p调控IL-6/STAT3通路对宫颈癌细胞凋亡、迁移、侵袭的影响

目的探讨miR-519b-3p调控IL-6/信号转导和转录激活因子3(STAT3)通路对宫颈癌细胞(SiHa)凋亡、迁移、侵袭的影响。方法qRT-PCR检测miR-519b-3p在宫颈癌组织中的表达。SiHa细胞分为miR-NC组、miR-519b-3p组、miR-NC+RhIL-6组、miR-519b-3p+RhIL-6组。流式细胞术评估SiHa细胞凋亡率,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭情况。Western blotting检测B细胞淋巴瘤-2基因(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-cadherin、Bcl相关x蛋白(Bax)、STAT3和p-STAT3蛋白水平。结果与癌旁组织比较,宫颈癌组织miR-519b-3p表达下调(P<0.05)。SiHa细胞凋亡率、Bax和E-cadherin蛋白水平miR-519b-3p组高于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组低于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组低于miR-519b-3p组(P<0.05)。SiHa细胞迁移数、侵袭数、Bcl-2、N-cadherin、p-STAT3蛋白水平miR-519b-3p组低于miR-NC组,miR-NC+RhIL-6组高于miR-NC组,miR-519b-3p+RhIL-6组高于miR-519b-3p组(P<0.05)。结论miR-519b-3p通过抑制IL-6/STAT3通路来抑制宫颈癌细胞迁移和侵袭,并增加细胞凋亡。

gga-miR-146b-5p在鸡肌肉和脂肪组织中的表达及其靶基因的生物信息学分析

为初步阐明gga-miR-146b-5p对优质肉鸡脂肪沉积和肌肉发育的调控作用,采用荧光定量PCR(RT-qPCR)检测gga-miR-146b-5p在不同组织、成肌细胞和脂肪细胞中的表达,并对靶基因进行生物信息学分析。结果表明,gga-miR-146b-5p在肝脏、腹脂、腿肌组织、成肌细胞和脂肪细胞中均有较高表达。在肝脏组织中,gga-miR-146b-5p在16周性连锁矮小鸡S3系鸡中的表达显著高于隐性白羽(RR)鸡,具有显著的品种差异性,且2个品种16周的表达均显著高于其他4个发育时期;在腹脂组织中,gga-miR-146b-5p在2周时表达具有显著的品种差异,RR鸡的表达显著高于S3系鸡;在腿肌组织中,gga-miR-146b-5p在16周时S3鸡的表达显著高于RR鸡。在脂肪细胞中,gga-miR-146b-5p在诱导分化4 d后的表达显著高于增殖期;在成肌细胞中,gga-miR-146b-5p的表达随分化时间的延长而升高,分化5 d后的表达显著高于增殖期。靶基因的GO和KEGG结果表明LAPTM5和IMPAD1分别是gga-miR-146b-5p调控肌肉发育和脂肪代谢的预测靶基因。本试验结果为进一步研究gga-miR-146b-5p在鸡脂肪沉积和肌肉发育中的作用奠定了基础。

食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p通过靶向抑制PTEN促进肿瘤相关巨噬细胞极化

目的:探究食管鳞状细胞癌外泌体miR-181b-5p对M2型巨噬细胞极化的影响及机制。方法:提取并鉴定食管鳞状细胞癌外泌体,qRT-PCR检测miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞及其外泌体中的表达。M0型巨噬细胞分为PBS组、HEEC exo组、Eca-109 exo组、miR-NC exo组、miR-181b-5p exo组、miR-NC组、miR-181b-5p mimic组、si-NC组、si-PTEN组、miR-181b-5p exo+PTEN组,qRT-PCR检测各组细胞中CD163、CD206、iNOS、TNF-α表达。双荧光素酶报告基因实验验证miR-181b-5p和PTEN的靶向关系。结果:miR-181b-5p在食管鳞状癌细胞TE-13、TE-12、TE-10、Eca-109、KYSE30及其外泌体中显著高表达(P<0.001)。相比于miR-NC组,miR-181b-5p mimic组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。双荧光素酶报告基因结果显示PTEN为miR-181b-5p的靶基因。相比于si-NC组,si-PTEN组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于PBS组,Eca-109 exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-NC exo组,miR-181b-5p exo组细胞CD163和CD206表达显著上调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著下调(P<0.001)。相比于miR-181b-5p exo组,miR-181b-5p exo+PTEN组CD163和CD206表达显著下调(P<0.001),而iNOS和TNF-α表达显著上调(P<0.001)。结论:外泌体miR-181b-5p抑制PTEN表达而促进M2型巨噬细胞极化。

胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系

目的研究胃癌患者血清微小RNA(miR)-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平与病理特征及预后的关系。方法回顾性选取2018年7月至2019年12月西安医学院第一附属医院收治的胃癌患者作为恶性组(80例),另选取该院同期收治的胃部良性病变患者作为良性组(93例)。统计两组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平,比较不同病理特征胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。胃癌患者随访3年,根据患者不同预后情况将其分为死亡组和存活组,比较死亡组和存活组血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平。绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平单独及三者联合检测对胃癌患者预后的预测价值。结果恶性组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于良性组,血清miR-144表达水平低于良性组,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同TNM分期、分化程度、淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况患者miR-125b-5p表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。不同肿瘤最大径、TNM分期、分化程度及淋巴结转移情况、腹膜种植转移情况、脉管浸润患者血清miR-144、miR-93表达水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。死亡组纳入33例患者,存活组纳入47例患者。死亡组血清miR-125b-5p、miR-93表达水平均高于存活组,miR-144表达水平低于存活组,差异均有统计学意义(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93单独检测预测胃癌患者预后的曲线下面积分别为0.737、0.757、0.738,均低于三者联合检测的0.887(Z=2.123、2.362、2.308,P<0.05)。结论胃癌患者、胃部良性病变患者及不同病理特征、不同预后胃癌患者血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93表达水平存在明显差异,血清miR-125b-5p、miR-144、miR-93联合对胃癌患者预后具有较好的预测价值,有望成为预测胃癌患者预后的标志物。

滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的治疗作用及对lncRNAPVT1、miR-30b-5p表达的影响

【目的】探讨滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)模型大鼠的治疗作用及机制。【方法】将96只大鼠随机分为正常组,模型组,滋金补水膏低、中、高剂量组,盐酸氨溴索组、滋金补水膏高剂量+pcDNA组,滋金补水膏高剂量+pcDNA-人浆细胞瘤转化迁移基因1(PVT1)组,每组12只。除正常组外,其他各组大鼠采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露法构建COPD模型。建模成功后,进行给药干预。给药结束后,采用酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清中白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平;流式细胞术检测大鼠外周血中辅助性T细胞17/调节性T细胞(Th17/Treg)水平,苏木素-伊红(HE)染色法观察肺组织病理变化,实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法检测血清和肺组织中长链非编码RNA(lncRNA)PVT1、miR-30b-5p表达,Western Blot法检测肺组织中维甲酸相关孤核受体γt(RORγt)、叉头框蛋白P3(Foxp3)蛋白表达,双荧光素酶报告基因实验验证lncRNA PVT1与miR-30b-5p的关系。【结果】与正常组比较,模型组肺泡间隔变大,支气管周围有大量炎症细胞浸润,Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平降低,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例、Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平升高(均P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组及盐酸氨溴索组大鼠肺组织病理损伤减轻、Treg细胞比例、miR-30b-5p表达水平、Foxp3蛋白表达水平升高,IL-6、TNF-α水平,Th17细胞比例,Th17/Treg比值,lncRNA PVT1表达水平,RORγt蛋白表达水平降低(均P<0.05)。lncRNA PVT1靶向调控miR-30b-5p表达。【结论】滋金补水膏可能通过调节lncRNA PVT1/miR-30b-5p轴促进Th17/Treg细胞平衡来抑制COPD大鼠炎症反应。

温经通络汤含药血清对小鼠软骨细胞损伤及IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴的影响研究

目的研究温经通络汤含药血清对白细胞介素-1β(IL-1β)诱导的小鼠原代软骨细胞损伤的影响及机制。方法采用IL-1β诱导小鼠原代软骨细胞损伤模型,检测细胞中炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α,软骨降解相关蛋白酶基质金属蛋白酶(MMP)3、MMP9、MMP13、ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)以及糖酵解相关酶乳酸脱氢酶A(LDHA)、M2型丙酮酸激酶(PKM2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶2(NOX2)、还原型辅酶Ⅱ氧化酶4(NOX4)的mRNA表达;测定细胞内MMP3、MMP13、P65、IκB-ζ、缺氧诱导因子1α(HIF-1α)以及LDHA蛋白表达水平;进一步检测细胞上清液中一氧化氮(NO)、丙二醛(MDA)和乳酸的浓度,测定细胞内辅酶Ⅰ(NAD)的还原态(NADH)和氧化态(NAD+)的比率,以及细胞内活性氧(ROS)水平。结果温经通络汤含药血清可显著抑制IL-1β软骨细胞内IL-1β、IL-6、TNF-α的mRNA表达(P<0.01),降低细胞上清液中NO浓度(P<0.05,P<0.01),下调IκB-ζ(P<0.05)和P65蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著下调MMP3、MMP9、MMP13以及ADAMTS4 mRNA表达(P<0.01),抑制MMP13(P<0.05,P<0.01)和MMP3(P<0.05)的蛋白表达。氧化应激方面,它可显著抑制软骨细胞内ROS的产生,提高NADH/NAD+比率,降低上清液中MDA浓度,下调HIF-1α蛋白表达(P<0.01)。温经通络汤含药血清可显著降低乳酸浓度,下调LDHA、PKM2、NOX2、NOX4的表达,降低细胞内糖酵解水平(P<0.05,P<0.01)。结论温经通络汤含药血清可通过抑制炎症、软骨降解、氧化应激和糖酵解,缓解IL-1β诱导的小鼠原代软骨细胞损伤,其机制可能与调控IκB-ζ/HIF-1α/LDHA轴有关。

基于B-S模型的Z公司价值评估研究

近年来,通信技术不断升级,通信行业已成为我国发展速度最快的行业之一。随着市场经济的蓬勃发展,通信行业中投资者对企业价值也越发重视。文章在对通信行业中企业特性分析的基础上,试图找到相对传统企业价值评估方法而言,更适用于通信行业价值评估的方法及模型。文章介绍了企业价值评估方法和模型,并结合通信行业的发展背景及行业特征,对能否应用于通信行业的企业进行了适用性分析。在对通信行业中的中电网络公司进行企业价值评估案例分析时,应用实物期权法中的B-S模型,该评估模型合理真实地反映企业价值,对今后通信行业的企业价值评估具有一定的参考意义。

miR-19b-3p靶向IGF-1参与绒毛膜癌发生发展的机制研究

目的探究miR-19b-3p靶向胰岛素样生长因子-1(IGF-1)参与绒毛膜癌增殖、侵袭和转移的机制。方法以人绒毛膜癌细胞系JEG-3为研究对象,A组:miR-19b-3p mimics组,B组:miR-19b-3p mimics NC组,C组:miR-19b-3p inhibitor组,D组:miR-19b-3p inhibitor NC组,E组:空白对照组。A组、B组、C组、D组按照分组情况进行相应转染,E组不做任何处理。分别用Real-time PCR和Western blot检测五组miR-19b-3p RNA和IGF-1蛋白表达水平,采用CCK-8法测定细胞增殖,采用划痕实验和Transwell小室侵袭实验测定细胞迁移和侵袭能力,并进行比较;采用双荧光素酶(Dualluciferase)报告实验验证miR-19b-3p对IGF-1的靶向关系。结果与E组的(0.98±0.13)相比,A组miR-19b-3p mRNA表达水平(2.23±0.16)明显上调,C组miR-19b-3p mRNA表达水平(0.73±0.08)明显下调(P<0.05)。与E组的(1.03±0.03)nmol/L相比,A组IGF-1蛋白表达水平(1.48±0.12)nmol/L明显上调,C组IGF-1蛋白表达水平(0.76±0.05)nmol/L明显下调(P<0.05)。72 h时,与E组的(5.03±0.14)%相比,A组细胞增殖活力(10.34±0.87)%明显增加,C组细胞增殖活力(2.42±0.13)%明显下调(P<0.05);与E组的(1.09±0.07)mm相比,A组细胞划痕迁移距离(1.45±0.08)mm明显增加,C组细胞划痕迁移距离(0.73±0.07)mm明显减少(P<0.05)。与E组的(103.00±7.00)个相比,A组侵袭细胞数(173.00±4.00)个明显增加,C组侵袭细胞数(82.00±1.00)个明显减少(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示:miR-19b-3p转染WT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.57±0.08)Kat低于miR-NC的(0.95±0.06)Kat(P<0.05);miR-19b-3p转染MUT-IGF-1的细胞荧光素酶活性(0.98±0.05)Kat与miR-NC的(0.96±0.06)Kat比较无明显差异(P>0.05)。结论miR-19b-3p靶向上调IGF-1促进绒毛膜癌JEG-3细胞增殖、侵袭、迁移。

miR-15b-3p靶向CMTM6对胃癌细胞上皮-间充质转化的影响

目的探讨miR-15b-3p靶向趋化素样因子超家族6(CMTM6)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)的影响。方法采用实时荧光定量PCR法检测人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823、MKN-1及人正常胃黏膜上皮细胞GES-1中miR-15b-3p和CMTM6表达水平。采用双荧光素酶报告基因实验检测miR-15b-3p和CMTM6的靶向关系。将BGC-823细胞随机分为对照组(不做处理)、miR-15b-3p抑制剂组(转染miR-15b-3p抑制剂)、miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组(转染miR-15b-3p抑制剂和shRNA-CMTM6)。分别采用MTT实验、细胞划痕愈合实验、Transwell实验检测细胞的增殖、迁移和侵袭能力。采用蛋白质印迹法检测EMT相关蛋白表达水平。结果与GES-1细胞相比,SGC-7901、BGC-823和MKN-1细胞中miR-15b-3p和CMTM6 mRNA的相对表达量均显著升高(P均<0.05)。双荧光素酶报告基因实验检测结果显示,与miR-NC+CMTM6-WT组相比,miR-15b-3p抑制剂+CMTM6-WT组细胞的相对荧光素酶活性显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组细胞中miR-15b-3p和CMTM6mRNA的相对表达量均显著降低(P均<0.05);与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组细胞中miR-15b-3p的相对表达量无显著变化(P>0.05),而CMTM6 mRNA的相对表达量显著降低(P<0.05)。与对照组相比,miR-15b-3p抑制剂组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。与miR-15b-3p抑制剂组相比,miR-15b-3p抑制剂+shRNA-CMTM6组的细胞增殖抑制率升高,细胞划痕愈合率降低,细胞侵袭数目减少,N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平均降低,E-cadherin蛋白表达水平升高,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论miR-15b-3p表达下调可通过靶向CMTM6而抑制胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程。

miR-27b-3p联合miR-215对早期胃癌内镜黏膜下剥离术后复发的预测效能

目的探讨微小RNA(miR)-27b-3p联合miR-215对早期胃癌内镜黏膜下剥离术(ESD)后复发的预测效能。方法2021年1月~2022年2月医院收治的早期胃癌病人122例,所有病人均接受ESD术,随访10~15个月,平均(12.57±1.83)个月,根据早期胃癌病人ESD术后是否复发分为复发组与非复发组。对比两组miR-27b-3p、miR-215相对表达量及临床资料,分析早期胃癌病人ESD术后复发的影响因素,分析miR-27b-3p、miR-215相对表达量及二者联合对早期胃癌病人ESD术后复发的预测价值。结果随访10~15个月,平均(12.57±1.83)个月,122例病人失访3例,随访率为97.54%,其中12例复发,剩余107例均未复发。复发组miR-27b-3p低于非复发组(P<0.05),复发组miR-215相对表达量高于非复发组(P<0.05)。复发组病变大小≥3 cm、浸润深度为SM2~SM3例数占比高于非复发组(P<0.05),复发组R0切除例数占比低于非复发组(P<0.05)。Logistic多因素回归分析结果显示病变大小≥3 cm、浸润深度为SM2~SM3、miR-27b-3p相对表达量、miR-215相对表达量为早期胃癌病人ESD术后复发的影响因素(P<0.05)。miR-27b-3p、miR-215相对表达量及二者联合预测早期胃癌病人ESD术后复发的曲线下面积(AUC)AUC分别为0.783、0.845、0.935。结论miR-27b-3p、miR-215可用于预测早期胃癌病人ESD术后复发风险,二者联合具有更高的预测价值。

miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理特征、预后的关系。方法选取2018年1月至2021年12月于中国人民解放军联勤保障部队第九一〇医院行改良根治术的68例乳腺癌患者作为研究对象,收集乳腺癌组织及癌旁正常组织石蜡标本。通过实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)检测miR-135b-5p的表达水平,以乳腺癌组织miR-135b-5p表达量的平均值作为参考,将患者分为低表达组与高表达组,分析miR-135b-5p表达水平与患者临床病理特征的关系;使用Kaplan-MeierPlotter分析miR-135b-5p表达对不同分子亚型乳腺癌患者预后的影响。结果乳腺癌组织miR-135b-5p的表达水平高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。高表达组肿瘤直径>2cm、淋巴结转移阳性、分型为三阴性、ER表达阴性、PR表达阴性的患者占比高于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);两组年龄、发病部位、组织学分级、HER2表达情况比较差异无统计学意义。Kaplan-MeierPlotter在线生存分析结果显示,在ER阳性的管腔型乳腺癌患者中,miR-135b-5p低表达组总生存率低于高表达组,在三阴性乳腺癌患者中,miR-135b-5p高表达组总生存率低于低表达组,差异有统计学意义(P<0.05);在HER2过表达型乳腺癌患者中,低表达组和高表达组总生存率比较差异无统计学意义。结论miR-135b-5p在乳腺癌组织中的表达水平在三阴性和管腔型乳腺癌中存在显著差异,可通过发挥不同的作用参与肿瘤的进展过程,在乳腺癌的预后判断和靶向治疗方面可能具有潜在的应用价值。

基于FCFF和模糊B-S组合模型的医药制造企业价值评估研究

在我国投资市场上,医药制造类股始终是一个热门的投资领域,股民对医药制造行业的投资狂热也导致这类股的股价高涨。因此如何对医药制造企业进行估值,以及判断企业的股价是否被高估,便成了决策者和投资者共同关注的焦点。文章在对医药制造行业进行分析的基础上,对企业价值的特殊性进行讨论,明确医药制造企业的价值组成部分有实体性价值与期权价值,并构建出FCFF与模糊B-S组合模型对医药制造企业进行更合理的估值。研究发现,使用单一收益法评估容易造成医药制造企业价值的低估,采用改进后的模型可以更准确地评估医药制造企业的价值,且改进后模型对企业价值评估偏差的包容性更广。

LncRNA NORAD通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的作用机制

目的:探讨长链非编码RNA DNA损伤诱导的非编码RNA(LncRNA NORAD)通过miR-513b-5p/GREM1轴调节颅内动脉瘤血管平滑肌细胞(VSMC)增殖、迁移、侵袭和凋亡的机制。方法:采用实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法检测人颅内动脉瘤组织和正常组织中LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1表达。体外分离培养人VSMC,随机分为对照组、LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组、共转染(LncRNA NORAD siRNA+miR-513b-5p inhibitor)组、共转染阴性对照(LncRNA NORAD siRNA阴性对照+miR-513b-5p inhibitor阴性对照)组,分组转染后,采用实时荧光定量PCR法检测各组细胞LncRNA NORAD、miR-513b-5p及GREM1 mRNA表达;采用细胞计数试剂盒(CCK-8)和免疫荧光染色检测各组细胞增殖情况;采用Hoechst 33342染色和免疫荧光染色检测各组细胞凋亡情况;采用细胞划痕实验和Transwell实验检测各组细胞迁移、侵袭情况;采用免疫印记实验检测各组细胞上皮间充质转化(EMT)标志蛋白神经钙黏素(N-cadherin)、E-钙黏素(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达;采用双荧光素酶报告实验分析VSMC中LncRNA NORAD对miR-513b-5p、miR-513b-5p对GREM1的靶向调控。结果:与正常组织比较,颅内动脉瘤组织LncRNA NORAD、GREM1 mRNA表达明显升高(P<0.05),miR-513b-5p表达明显降低(P<0.05)。与对照组比较,LncRNA NORAD siRNA组、miR-513b-5p mimics组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达降低(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);共转染阴性对照组各指标差异无统计学意义(P>0.05)。与LncRNA NORAD siRNA组比较,共转染组细胞GREM1 mRNA表达、增殖率、Ki67阳性率、迁移率、侵袭数及N-cadherin、Vimentin蛋白表达升高(P<0.05),miR-513b-5p表达、凋亡率及Bax/Bcl-2、E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05)。结论:敲低LncRNA NORAD可通过上调miR-513b-5p表达而降低GREM1表达,从而抑制VSMC增殖与侵袭迁移,并促使其凋亡。

miR-20b-5p靶向VEGFA对深Ⅱ度烫伤创面组织的作用机制

目的:探究微小RNA-20b-5p(miR-20b-5p)对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合的影响机制,以及其对血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)A的表达的调控机制。方法:沸水浴烙铁术制作深Ⅱ度烫伤大鼠模型,以miR-20b-5p抑制剂(miR-20b-5p-antagomir)干预创面组织,以miR-20b-5p-antagomir+小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)抑制VEGFA进行功能挽救;造模28 d后,检测大鼠的创面愈合率、创面组织中的胶原纤维含量以及血管新生。以miR-20b-5p-antagomir和miR-20b-5p-antagomir+siRNA-VEGFA分别转染微血管内皮细胞(human microvascular endothelial cells,HMEC)-1;检测细胞的增殖及小管形成的能力;Western blot检测各组创面组织和细胞中VEGFA的表达。结果:miR-20b-5p-antagomir能明显促进创面愈合,促进HMEC-1细胞的增殖与小管形成,而siRNA-VEGFA可部分逆转这一作用,差异均具有统计意义(P均<0.05)。结论:miR-20b-5p靶向VEGFA的表达影响深Ⅱ度烫伤大鼠的创面愈合,抑制miR-20b-5p的表达能促进创面愈合,促进血管新生。

miR-26b-3p靶向CREB1调控神经胶质瘤细胞的增殖、迁移及侵袭

目的探讨miR-26b-3p靶向调控环磷酸腺苷效应元件结合蛋白1(CREB1)表达水平影响胶质瘤细胞增殖、迁移和侵袭能力的分子机制。方法运用RT-qPCR和Western blotting检测不同级别胶质瘤中miR-26b-3p和CREB1的表达情况;生物信息学方法分析miR-26b-3p与CREB1结合的靶向序列。采用双荧光素酶报告基因检测miR-26b-3p对CREB1的靶向调控机制;将胶质瘤U251细胞分为对照组、miR-26b-3p mimic组及miR-26b-3p inhibitor组,采用Western blotting检测CREB1的表达变化,采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力的影响,采用划痕实验检测各组细胞迁移能力的影响,采用Transwell检测各组细胞侵袭能力的影响,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡的影响。结果miR-26b-3p的表达随着胶质瘤级别的增加而降低(P<0.05),而CREB1的表达则逐渐增加,差异有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告基因结果显示miR-26b-3p可显著影响CREB13′UTR表达载体的荧光素酶活性,CREB1是miR-26b-3p下游靶基因。抑制miR-26b-3p表达可上调CERB1的表达,进而抑制细胞凋亡,促进胶质瘤细胞的增殖和侵袭。过表达miR-26b-3p可下调CERB1的表达,促进细胞凋亡,抑制胶质瘤细胞的增殖和侵袭(P<0.05)。结论miR-26b-3p可靶向调控CREB1的表达调节胶质瘤细胞的凋亡、增殖、迁移和侵袭,进而参与胶质瘤的发生发展。

miR-421和miR-196b-3p在胃癌癌前病变和早期胃癌诊断中的潜在价值

目的研究血浆miR-421和miR-196b-3p作为诊断胃癌癌前病变和早期胃癌新型潜在生物标志物的临床意义。方法(1)发现集:于2018年12月1日至12月31日采集早期胃癌患者(早期胃癌组)、癌前病变患者(癌前病变组)和健康志愿者(NC组)的血浆标本各3例,用作miRNA微阵列分析。借用TCGA数据证实候选miRNA在癌症组织中的表达。(2)验证集:于2019年1月1日至2023年1月1日共采集90例胃癌患者(胃癌组)、89例癌前病变患者(癌前病变组)和45例健康志愿者(NC组)的血浆标本。通过定量实时聚合酶链反应测定候选miRNA水平。比较各组候选miRNA及常规肿瘤标志物[铁蛋白、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、CA211、CA50、CA125、CA199、CA153、CA242、CA724]水平;通过受试者工作特征(ROC)曲线分析比较候选miRNA与常规肿瘤标志物的诊断价值。结果(1)发现集:通过miRNA微阵列筛选,与NC组相比,miR-421和miR-196b-3p水平在早期胃癌组和癌前病变组明显上调(P<0.05)。TCGA数据证实,与正常胃黏膜相比,miR-421在胃癌组织中呈高表达(P<0.001)。(2)验证集:与NC组相比,癌前病变组和胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平明显上调(P<0.05),且胃癌组血浆miR-421、miR-196b-3p水平高于癌前病变组(P<0.001)。ROC曲线分析结果显示,血浆miR-421对胃癌的诊断价值最高,曲线下面积(AUC)为0.931(95%CI:0.889~0.972),高于CEA、CA125、CA199、CA724、CA211、CA50诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-196b-3p诊断胃癌的AUC[0.804(95%CI:0.733~0.875)]也高于CEA、CA125、CA199和CA724诊断胃癌的AUC(P<0.05);miR-421和miR-196b-3p也可用于早期胃癌诊断,AUC分别为0.942(95%CI:0.886~0.997)和0.809(95%CI:0.708~0.910);血浆miR-421和miR-196b-3p诊断癌前病变的AUC分别为0.788(95%CI:0.714~0.863)和0.648(0.556~0.741),miR-421诊断癌前病变的AUC均高于miR-196b-3p、铁蛋白、CA50诊断癌前病变的AUC(P<0.05)。血浆miR-421和miR-196b-3p在胃癌Ⅰ期病例中的水平与Ⅱ、Ⅲ/Ⅳ期相比,差异无统计学意义(P>0.05),但在胃癌发病早期(Ⅰ~Ⅱ期)的水平明显高于NC组和癌前病变组(P<0.05)。结论血浆miR-421和miR-196b-3p在早期胃癌患者中过表达,有希望成为诊断癌前病变和早期胃癌的新型生物标志物。

H12、RS13和RL6在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达研究

目的探讨组蛋白H1变体(H12)、核糖体蛋白S13(RS13)和核糖体蛋白L6(RL6)在miR-199b-5p敲除小鼠卵巢中的表达变化。方法(1)自行繁育miR-199b-5p敲除(Knockout,KO)和野生型(Wild-type,WT)C57BL/6小鼠,分别记录两组雌鼠产仔情况(2)基因型鉴定验证分组,取性成熟期小鼠(鼠周龄为11~13周)卵巢用于验证实验。(3)用实时荧光定量PCR(qPCR)检测每组小鼠(n=10)卵巢组织中H12、RS13和RL6的mRNA表达水平变化。(4)用蛋白免疫印迹法(WB)检测每组小鼠(n=3)卵巢组织中H12、RS13和RL6的蛋白表达水平变化。结果(1)共统计半年内两组雌鼠产仔情况:WT组生产27窝,平均每窝产仔数为(8.15±0.41)只;KO组生产28窝,平均每窝产仔数为6.43±0.32只,与WT组比较,KO组雌鼠产仔数显著下降(P=0.004),差异有统计学意义。(2)qPCR结果示:与WT组比较,KO组卵巢组织中H12(P=0.038)、RS13(P=0.011)和RL6(P=0.009)的mRNA表达水平显著升高,差异均有统计学意义。(3)WB结果示:与WT组比较,KO组小鼠卵巢组织中H12(P=0.014)蛋白表达水平显著升高,而RS13(P=0.005)和RL6(P=0.009)蛋白表达水平显著下降,差异均有统计学意义。结论敲除miR-199b-5p可能影响H12、RL6和RS13基因的表达使小鼠卵巢储备能力下降。

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0.05),而Vimentin的蛋白表达水平显著上升(P<0.05)。与NC-mimic组相比,miR-26b-5p-mimic组在24h、48h以及72h时细胞吸光值显著减少(P<0.05),24h划痕距离显著增加(P<0.05),24h侵袭细胞数显著减少(P<0.05),E-cadherin蛋白表达显著上调(P<0.05)、Vimentin和VEGF蛋白表达显著下调(均P<0.05)。结论过表达miR-26b-5p可以通过靶向抑制VEGF的表达,从而抑制非小细胞肺癌A549细胞的增殖、迁移和侵袭。

miR-146b-5p调控CD82介导食管鳞状细胞癌恶性表型

目的探究miR-146b-5p促进食管鳞状细胞癌恶性表型的分子机制。方法选取2020年10月-2021年12月在四川省西南医科大学附属医院行食管癌根治术治疗的38名食管鳞状细胞癌患者的癌组织和癌旁正常组织(NAT)样本,核酸原位杂交法检测miR-146b-5p在食管鳞癌及癌旁正常组织中的表达水平;通过siRNA敲低miR-146b-5p的表达水平,细胞增殖实验、划痕实验检测敲低miR-146b-5p后细胞行为学表型变化;生物信息学分析预测miR-146b-5p的下游靶基因为CD82;免疫印迹法(Western-blot)检测靶基因CD82的表达水平,双荧光素酶报告基因实验确定miR-146b-5p与CD82之间的调控关系。结果核酸原位杂交法检测结果显示,与NAT组织病理评分比较,miR-146b-5p在ESCC组织中的病理评分较高(P<0.05);EdU细胞增殖实验结果显示,与NC组比较,KD组EdU阳性细胞比例显著降低(P<0.05)。细胞划痕实验结果显示,与NC组比较,KD组划痕愈合比例显著下降(P<0.05)。ENCORI数据库预测CD82是miR-146b-5p的下游靶基因;Western-blot实验结果显示,相比NC组,KD组CD82在蛋白水平显著性上调;双荧光素酶报告基因实验结果显示,wt+mimic组荧光强度较mut+mimic组显著性下降(P<0.05)。结论miR-146b-5p通过靶向调控CD82促进食管鳞状细胞癌细胞的迁移,为食管鳞状细胞癌的治疗提供新的靶点。

miR-513b-5p靶向趋化因子CXCL8抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭

侵袭转移是喉鳞癌预后不良的主要危险因素,肿瘤微环境中的趋化因子与侵袭转移密切相关。CXCL8是一种细胞因子样的分泌蛋白质,在多种肿瘤的恶性发展过程中发挥重要作用,但其在喉鳞癌的作用尚未阐明。本文以喉鳞癌细胞为研究对象,阐明CXCL8在喉鳞癌细胞的作用,并寻找靶向CXCL8的miRNA,为喉鳞癌的诊断和治疗提供新靶点。GEPIA网站显示,CXCL8在头颈肿瘤组织中高表达(P<0.05)。实时荧光定量PCR发现,CXCL8在喉鳞癌细胞中高表达,酶联免疫检测也发现,CXCL8在喉鳞癌细胞上清中分泌量较高(P<0.001)。CCK8检测证实,降低CXCL8表达会明显抑制喉鳞癌细胞FD-LSC-1和AMC-HN8增殖(平均抑制率分别为34.0%,19.5%);EdU实验也证实,降低CXCL8表达明显抑制喉鳞癌细胞的增殖(P<0.05)。Transwell小室实验证实,降低CXCL8表达明显抑制喉鳞癌细胞FD-LSC-1迁移和侵袭(平均抑制率分别为40.0%,38.5%);降低CXCL8表达也明显抑制喉鳞癌细胞AMC-HN8迁移和侵袭(平均抑制率分别为37.5%,53.5%)。生物信息学网站预测,CXCL 8可能是miR-513b-5p靶基因,双荧光素酶报告检测证实,miR-513b-5p能够与CXCL 8-3′UTR结合,在喉鳞癌细胞中过表达miR-513b-5p,CXCL 8 mRNA表达量下降60%(P<0.01)。细胞功能恢复实验证实,miR-513b-5p削弱喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭的能力可被外源表达的CXCL8有效逆转(P<0.05)。综上所述,miR-513b-5p通过靶向CXCL 8抑制喉鳞癌细胞增殖、迁移和侵袭。