NSE BLyS APRIL在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性

目的研究神经特异性烯醇化酶(NSE)、B淋巴细胞刺激因子(BLyS)、增殖诱导配体(APRIL)在病毒性脑炎患者中的表达及与预后的相关性。方法选取2015—2023年河南科技大学第一附属医院收治的118例病毒性脑炎患者,另选取同期体检、经临床生化和脑脊髓穿刺等常规检查确认健康正常的对照组48例。比较不同病情的病毒性脑炎患者血清NSE、BLyS、APRIL水平,不同预后病毒性脑炎患者的相关资料。采用多因素Logistic分析病毒性脑炎预后不良的影响因素,并采取受试者工作特征(ROC)曲线分析血清NSE、BLyS、APRIL单独及联合检测在病毒性脑炎预后评价中的价值。结果重症组血清NSE、BLyS、APRIL水平均高于轻症组及对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。预后良好组入院当天及治疗后血清NSE、BLyS、APRIL水平均低于预后不良组,差异有统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示,年龄、总住院时间、是否进行机械通气、是否存在癫痫发作以及入院当天血清NSE、BLyS、APRIL水平与病毒性脑炎预后不良有关(OR>1,P<0.05)。ROC曲线显示,入院当天血清NSE、BLyS、APRIL联合检测预测预后不良的AUC值(0.895)高于NSE(0.801)、APRIL(0.781)、BLyS(0.776)。结论血清NSE、BLyS、APRIL在病毒性脑炎患者均呈高表达,三者联合检测可较好地预测患者预后。

计算机辅助设计可溶性BLyS受体,eBCMA-Fc融合蛋白及其在大肠杆菌中的表达(英文)

B细胞成熟抗原(BCMA)是B淋巴细胞刺激因子(BLyS)的受体之一.它的胞外区与人IgG1Fc的融合蛋白eBCMA-Fc,又称为诱饵受体,具有拮抗BLyS的活性.为了设计新的拮抗肽,基于BCMA和Fc的晶体结构,通过计算机图形学技术、分子模拟方法,建立了eBCMA-Fc融合蛋白的三维理论结构.利用均方根位移(root mean square distance,RMSD)对eBCMA-Fc融合蛋白与单体eBCMA、Fc构象差异进行分析.融合蛋白eBCMA-Fc中的eBCMA段与单体eBCMA的主链碳原子间RMSD值为0.036nm,Fc段与单体Fc的主链碳原子间RMSD值为0.064nm.结果表明,对比单体,融合蛋白eBCMA-Fc并未因eBCMA与Fc直接连接而发生构象的变化.分子对接方法显示,融合蛋白eBCMA-Fc中的BCMA与BLyS作用,而Fc扮演着稳定BCMA构象的支架作用.为进一步验证上述理论分析,构建eBCMA-Fc融合基因,并将载有eBCMA-Fc融合基因的原核表达质粒转化BL21(DE3)菌、在细菌中表达.目的蛋白经蛋白A亲和柱纯化大约为36kD,与理论预测值34kD相近.免疫印迹表明抗人IgG抗体能够识别eBCMA-Fc融合蛋白.ELISA证实,eBCMA-Fc融合蛋白能够结合BLyS.随着eBCMA-Fc融合蛋白增加,结合BLyS的融合蛋白也相应增加.而对照人IgG,即使在高浓度条件下,也不结合BLyS.此外,eBCMA-Fc融合蛋白能够抑制BLyS对B细胞肿瘤Daudi细胞的作用.这些研究为下一步设计和筛选BLyS拮抗肽提供了实验基础.

B淋巴细胞刺激因子(BLyS)研究进展

B淋巴细胞刺激因子 (BLyS)是 1999年新发现的一种重要的细胞因子 ,属于肿瘤坏死因子 (TNF)超家族成员 .在体液免疫调控中起重要作用 .它能强烈地刺激B淋巴细胞的增殖和分化并分泌大量免疫球蛋白 (主要为IgM) ;在体外其过量表达能促进多种B系肿瘤细胞的生长 .BLyS转基因小鼠出现严重的红斑狼疮样症状 .对BLyS的基因和蛋白质结构、免疫调控功能。

过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的检测

目的了解TRANCE和BLys在过敏性紫癜发病中的作用。方法通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平。结果过敏性紫癜患者血清中TRANCE和BLys的表达水平(2.83±0.96,90.48±2.64)与正常对照组(0.85±0.35,82.02±4.04)相比均升高(P<0.01),伴有肾脏损害患者血清中TRANCE,BLys的表达水平(4.09±0.45,93.92±2.07)与单纯型患者(2.44±0.70,89.42±1.75)相比显著增高(P<0.01)。患者血清中TRANCE与BLys的表达水平呈显著正相关(r=0.515,P<0.01)。结论过敏性紫癜患者血清中TRANCE,BLys的表达异常增高,可能与其发病有关。

sBLyS突变体酵母表达载体的构建

目的构建人BLyS胞外区(soluble BLyS)突变体毕赤酵母分泌型表达载体,为深入探讨BLyS的功能和机制创造条件。方法以构建的人pUC19/sBLyS及其突变体重组质粒为模板,利用PCR扩增出6×his/sBLyS及其突变体的cDNA,克隆入酵母表达载体pPIC9K;行序列测定后电转化入毕赤酵母GS115,并进行表型筛选和G418抗性筛选;对高拷贝整合的重组酵母表达菌株进行PCR鉴定。结果构建得到酵母融合重组表达载体pPIC9K/6×his/sBLyS及其突变体;经G418浓度梯度筛选及PCR鉴定得到高拷贝整合的重组酵母表达菌株。结论成功构建了人sBLyS及其突变体的真核表达载体,为获得人sBLyS及其突变体蛋白,进一步研究BLyS的生物学功能奠定了基础。

人BLyS基因克隆、表达和抗人BLyS单克隆抗体的制备

【目的】研制抗人BLyS单克隆抗体 ,以进一步探讨人BLyS与自身免疫性疾病的关系。【方法】将人BLyS基因克隆到融合蛋白原核表达载体 pGEX 4T 1中 ,构建重组质粒 pGEX 4T 1/hBLyS ,用此重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,加IPTG诱导大肠杆菌表达GST hBLyS融合蛋白 ,用此融合蛋白免疫BALB/c鼠 ,取鼠脾细胞与骨髓瘤细胞融合 ,用ELISA法筛选阳性克隆 ,用免疫印迹和流式细胞仪进一步鉴定抗体的特异性。【结果】重组质粒双酶切结果和DNA序列测定以及表达蛋白SDS PAGE电泳结果表明 ,pGEX 4T 1/hBLyS重组质粒可以正确表达GST hBLyS融合蛋白 ;ELISA、免疫印迹和流式细胞仪检测结果表明 ,1c6杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体可以特异性结合人T淋巴细胞膜表面BLyS的膜外区 ,属于IgG2b亚类。【结论】所获得的单克隆抗体具有能够结合人T淋巴细胞上的BLyS特异性 。

多发性骨髓瘤中MAPK信号通路对BLyS表达的调控研究

目的 研究多发性骨髓瘤（MM）细胞中丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号通路的表达及活化情况,探讨MAPK信号通路对MM细胞B淋巴细胞刺激因子（BLyS）表达变化的影响及对MM细胞增殖与存活的影响,并初步探讨MAPK信号通路在IFN-γ（MM重要的促生长因子）上调MM细胞BLyS表达过程中的作用.方法 应用Western blot方法检测MM细胞中蛋白ERK、p-ERK、JNK、p-JNK、p38及p-p38的表达情况；应用RT-PCR及Western blot检测MAPK信号通路对BLyS表达的影响；应用WST-1法检测靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125对MM细胞增殖与存活的影响.结果 MM细胞株中,除了ERK、JNK及p38的表达外,还有活化蛋白p-JNK的表达；靶向JNK的MAPK信号通路抑制剂SP600125可下调MM细胞BLyS的表达,其激动剂茴香霉素（anisomycin）可上调BLyS的表达；IFN-γ可上调MM细胞BLyS的表达,SP600125可部分抵消IFN-γ对BLyS的上调作用；SP600125可抑制MM细胞的增殖与存活.结论 MM细胞中有JNK/SAPK信号通路的活化；JNK/SAPK信号通路的活化程度与BLyS的表达高低呈正相关；JNK/SAPK信号通路在IFN-γ上调MM细胞BLyS表达过程中发挥重要作用.

重组人B淋巴细胞刺激因子纯化及其生物活性鉴定

目的 获得高纯度和高活性的B淋巴细胞刺激因子。方法 重组原核表达载体pQE 80L BLyS112 -2 85在大肠杆菌DH5α中经IPTG诱导表达rhBLyS112 -2 85,超声碎菌 ,提取包涵体 ,经Ni2 + NTA亲和层析和SepharcrylS 2 0 0凝胶过滤层析纯化后 ,选择不同氧化还原条件进行复性 ,进而检测其生物学活性。结果 得到了有较高纯度和较好生物学活性的rhBLyS112 -2 85蛋白。结论 优化了BLyS蛋白的纯化和复性的参数 。

抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库的构建

目的构建抗人B-淋巴细胞刺激因子噬菌体单链抗体库。方法从B-淋巴细胞刺激因子免疫小鼠的脾细胞中抽提总RNA,经逆转录聚合酶反应合成cDNA,分别扩增小鼠重链可变区基因和轻链可变区基因。通过重叠延伸拼接法将重链可变区基因和轻链可变区基因组装成单链抗体基因,重组于载体pFUSE5,电转化E.coliXL 1-Blue。在辅助噬菌体援救下,构建成噬菌体单链抗体库。采用聚合酶链反应、核苷酸序列测定和酶联免疫分析鉴定单链抗体库的特征。结果本抗体库的噬菌体库容量约1×106,单链抗体基因插入效率为93%,存在序列差异性并含有抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体。结论成功地构建了抗人B-淋巴细胞刺激因子单链噬菌体抗体库,为筛选抗B-淋巴细胞刺激因子单链抗体药物奠定了良好的基础。

B淋巴细胞刺激因子的药学前景

B淋巴细胞刺激因子(BlyS)是肿瘤坏死因子(TNF)超家族的一名新成员,它与某些免疫疾病的致病机制密切相关。从BlyS的生物学结构和功能入手,阐述与其相关的免疫缺陷病、自身免疫疾病和淋巴瘤等免疫疾病,以及BlyS治疗性蛋白、BlyS蛋白拮抗物、放射性BlyS蛋白的临床应用前景。

B淋巴细胞刺激因子与系统性红斑狼疮

B淋巴细胞刺激因子(Blys)是肿瘤坏死因子配体超家族成员,可刺激B淋巴细胞增殖、分化及分泌抗体,对机体的免疫应答、尤其是体液免疫应答起着关键性作用。Blys缺陷或过量表达均可引起机体免疫失衡,诱发多种自身免疫性疾病。Blys mRNA可能是SLE疾病活动性的一个有用的生物学标志,Blys拮抗剂为SLE的治疗带来新的研究方向。

抗B淋巴细胞刺激因子单克隆抗体对系统性红斑狼疮患者外周血表达的影响

目的利用体外细胞培养技术研究抗B淋巴细胞刺激因子(BlyS)单克隆抗体对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中相关因子的影响。方法抽取36例SLE患者外周血,每例外周血分成等份分别不加或加入抗BlyS单克隆抗体分组培养,检测比较培养后各组血浆中的免疫球蛋白、补体和多种狼疮相关细胞因子含量的差异。结果狼疮组加入抗BlyS单克隆抗体培养后,血浆中的IgG、IgM水平均比未加单抗组培养后的水平低,IgA水平仅有下降趋势;血浆补体C3、C4水平较未加单抗组高;且血浆中狼疮相关细胞因子BlyS、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-6水平均较未加单抗组低。结论抗BlyS单克隆抗体在体外能够抑制狼疮患者外周血中的免疫球蛋白过度升高和补体的下降,以及狼疮相关损害因子偏高。

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子对系统性红斑狼疮作用的研究进展

跨膜激活剂及钙调亲环素配体相互作用分子(TACI)对B淋巴细胞的稳态和自身免疫起负调控作用。敲除TACI基因的小鼠出现狼疮样自身免疫性疾病,同时TACI-Fc可影响B细胞的增生和存活,抑制抗体的产生,现已作为一种生物制剂用于治疗SLE,所以对TACI的研究及其在临床上的应用越来越受关注。本文就目前对TACI生物学作用及其应用于SLE的治疗研究进行综述。

B淋巴细胞刺激因子及其受体在多发性骨髓瘤中的表达及其意义

目的探讨B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体在多发性骨髓瘤（MM）中的表达及其意义。方法采用流式细胞术（FCM）分析人MM肿瘤细胞系KM3及CZ-1细胞表面BLyS及其受体的表达；RT—PCR及Western blot进一步验证BLyS及其受体的表达；采用荧光免疫细胞化学法和激光共聚焦技术鉴定KM3细胞中BEyS蛋白的表达与定位；WST细胞增殖实验检测BLyS对MM肿瘤细胞生长与存活的影响。ELISA及荧光定量-聚合酶链反应（RTQ-PcR）测定MM患者BLyS蛋白与mRNA的表达水平。同时分析乳酸脱氢酶（LDH）、β2微球蛋白浓度与BLys蛋白及mRNA表达水平的关系。结果①MM细胞能够表达BLyS及其受体；②BLyS定位表达于KM3细胞的浆膜上；③BLyS促进MM细胞的生长与存活；④MM患者BLys蛋白或mRNA表达水平显著高于正常对照组（P值均〈0．01）；⑤直线相关分析显示LDH、β2微球蛋白浓度与BLyS蛋白及mRNA表达水平呈显著相关性。结论BLyS及其受体对于MM发生、发展可能起着重要的作用。