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ZnPcS_2P_2介导的光动力疗法联合mGM-CSF、mB7.1基因修饰的瘤苗治疗小鼠淋巴瘤 被引量:5
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作者 黄慧芳 陈元仲 +1 位作者 吴勇 李乃农 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期99-102,共4页
目的研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用。方法应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXS-NmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为... 目的研究两亲性酞菁锌光敏剂ZnPcS2P2介导的光动力疗法(ZnPc-PDT)联合GM-CSF、B7.1基因修饰的EL-4细胞,对小鼠淋巴瘤的抑制作用。方法应用反复多次转染的方法,分别将逆转录病毒pLXSN、pLXSNmGM-CSF、pLXS-NmB7.1导入EL-4细胞,分别命名为EL-4/pLXSN、EL-4/GM和EL-4/B7。进行ZnPc-PDT时,经荷瘤小鼠的尾静脉注射ZnPcS2P2,4h后局部用波长670nm的激光照射瘤体;光源为670nm的半导体激光仪。将40只荷瘤小鼠分为5组,每组8只,即对照组(不做任何处理)、EL-4/B7+EL-4/GM对照组、ZnPc-PDT对照组、ZnPc-PDT+EL-4/pLXSN对照组、ZnPc-PDT+EL-4/B7+EL-4/GM实验组。隔天测量瘤块的大小,观察荷瘤小鼠淋巴瘤的生长情况,并计算瘤块的相对体积(RTV)。观察荷瘤小鼠的生存期及瘤组织的病理学改变。结果实验组的生存率高于各个对照组(P<0.01)。Zn-Pc-PDT组小鼠的生存期略高于EL-4/B7+EL-4/GM组(P=0.01)。结论mB7.1、mGM-CSF基因修饰的瘤苗可显著增强ZnPc-PDT的抗肿瘤效应。 展开更多
关键词 PDT 酞菁锌 淋巴瘤 GM—CSF b7.1 免疫基因治疗
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B7.1及SEA基因共转染肝癌细胞的初步研究 被引量:2
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作者 张宇梅 隋延仿 +2 位作者 严泉剑 李增山 于军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期313-314,340,共3页
目的获得可表达共刺激分子B7.1和超抗原分子SEA的肝癌细胞株,检测其表达。方法用免疫组织化学方法,筛选表达B7.1及SEA的肝癌细胞阳性克隆。用流式细胞仪检测B7.1表达的阳性率,ELISA检测上清中SEA的含量。结果获得表达B7.1和SEA的肝... 目的获得可表达共刺激分子B7.1和超抗原分子SEA的肝癌细胞株,检测其表达。方法用免疫组织化学方法,筛选表达B7.1及SEA的肝癌细胞阳性克隆。用流式细胞仪检测B7.1表达的阳性率,ELISA检测上清中SEA的含量。结果获得表达B7.1和SEA的肝癌细胞株,培养上清中SEA的含量达10~14×10-8g/L。结论建立了免疫细胞在肝癌细胞上的SEA和B7.1联合识别效应系统。 展开更多
关键词 肝癌细胞 b7.1基因 SEA基因 肝癌 共转染
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B7.1基因的表达对肝癌细胞生物学特性的影响 被引量:3
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作者 张宇梅 隋延仿 李增山 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第3期268-270,共3页
目的 观察B7 1基因表达对肝癌细胞增殖特性的影响及诱发杀伤性T淋巴细胞 (CTL)细胞毒活性的变化。方法 用细胞计数法和流式细胞仪 (FCM)测定细胞生长曲线、DNA含量及细胞周期的变化。同时测定CTL对转染B7 1基因前后肝癌细胞的细胞毒... 目的 观察B7 1基因表达对肝癌细胞增殖特性的影响及诱发杀伤性T淋巴细胞 (CTL)细胞毒活性的变化。方法 用细胞计数法和流式细胞仪 (FCM)测定细胞生长曲线、DNA含量及细胞周期的变化。同时测定CTL对转染B7 1基因前后肝癌细胞的细胞毒作用。结果 转染B7 1基因后 ,肝癌细胞的增殖受到一定影响 :生长延缓、增殖幅度降低和倍增时间延长。CTL对转染B7 1基因的肝癌细胞杀伤明显增强。结论 转染B7 1基因的肝癌细胞出现了一定的增殖抑制现象 ,提示B7 展开更多
关键词 肝癌细胞 b7.1基因 生长曲线 细胞周期 细胞毒
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CD28与B7.1共刺激PBLs受肝癌细胞诱导后的TCR Vβ基因表达 被引量:2
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作者 杨红 李菁华 黄树林 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期42-44,共3页
目的研究T细胞受体(TCR)Vβ在外周血淋巴细胞(PBLs)中的表达。方法用单克隆抗体CD28+B7.1(CD80)共刺激正常人外周血淋巴细胞后作用于肝癌细胞(BEL-7402)。结果发现PBLsTCRVβ7基因在体外选择性扩增,表达水平为15%~25%,对照组为4%~8%... 目的研究T细胞受体(TCR)Vβ在外周血淋巴细胞(PBLs)中的表达。方法用单克隆抗体CD28+B7.1(CD80)共刺激正常人外周血淋巴细胞后作用于肝癌细胞(BEL-7402)。结果发现PBLsTCRVβ7基因在体外选择性扩增,表达水平为15%~25%,对照组为4%~8%。结论Vβ7基因对识别肿瘤抗原具有特异性,为肿瘤基因治疗和研究提供新的线索和实验依据。 展开更多
关键词 肝肿瘤 T细胞受体 VΒ基因 PLBs
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人B7.1真核表达载体的构建、鉴定及其在白血病细胞上表达的实验研究 被引量:1
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作者 马肖容 张王刚 +2 位作者 田玮 陈银霞 刘捷 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2009年第2期450-454,共5页
本研究构建包含人B7.1cDNA的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1并鉴定,实现其在白血病细胞株HL-60细胞上的表达,获得HL60-hB7.1。应用分子克隆、PCR法扩增人B7.1基因片段,采用ApaI、SalI分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产... 本研究构建包含人B7.1cDNA的重组真核表达载体pDisplay-hB7.1并鉴定,实现其在白血病细胞株HL-60细胞上的表达,获得HL60-hB7.1。应用分子克隆、PCR法扩增人B7.1基因片段,采用ApaI、SalI分别双酶切PCR产物和表达载体pHook,纯化后的酶切产物由T4DNA连接酶连接,转导大肠杆菌DH5α;应用ApaI、SalI双酶切和DNA序列分析技术进一步鉴定阳性克隆pDisplay-hB7.1,应用脂质体转化技术将B7.1转染HL-60细胞,同一标本分别采用直接免疫荧光法、SABC法及FACS法鉴定hB7.1在HL-60细胞上的表达,阳性细胞命名为HL60-hB7.1。结果表明,PCR法扩增出约620bp的基因片段;连接产物转导感受态细胞后,共筛选出5个阳性克隆,均可经ApaI、SalI双酶切出大小约620bp的基因片段,与人B7.1基因片段大小相符,提示重组载体构建成功。进一步DNA序列分析证明人B7.1基因序列和读码框架正确,与文献报道人B7.1cDNA序列一致,无基因突变。直接免疫荧光法鉴定表明,HL60-hB7.1阳性细胞数为70%,SABC法鉴定为65%,FACS法鉴定为92.7%。经以上鉴定证实hB7.1cDNA已成功转染HL-60细胞株并在其膜上高效表达,获得了HL60-hB7.1。结论:应用分子克隆方法可成功构建人B7.1(CD80)重组真核表达载体,并稳定、高效表达B7.1-于HL-60细胞胞膜上,推测应用这种方案制备的瘤苗可能具有免疫治疗和免疫保护作用。 展开更多
关键词 b7.1真核表达载体 白血病 基因治疗 免疫治疗
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B7.1、GM-CSF基因修饰的EL-4细胞激发小鼠抗淋巴瘤免疫反应 被引量:5
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作者 杨旭伟 陈元仲 +3 位作者 林振兴 陈英玉 兰小鹏 林景娟 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期359-362,共4页
目的 研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法 用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞... 目的 研究B7.1、GM CSF基因修饰的淋巴瘤瘤苗进行恶性淋巴瘤免疫基因治疗的有效性。方法 用逆转录病毒载体分别将B7.1和GM CSF基因导入小鼠淋巴瘤细胞EL 4中 ,得到EL 4 /B7和EL 4 /GM转基因瘤苗细胞。观察EL 4 /B7和EL 4 /GM瘤苗细胞对荷淋巴瘤小鼠的免疫治疗作用 ,以及预先接种过EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠 ,对野生型EL 4细胞致瘤性作用的影响 ,并检测接种EL 4 /B7或 /和EL 4 /GM瘤苗的小鼠血浆IL 2及TNF α的水平 ,及其脾淋巴细胞对野生型EL 4的细胞毒效应。另外 ,检测经EL 4 /B7、EL 4 /GM刺激后的小鼠脾淋巴细胞的增殖程度。结果 ①经EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞注射后 ,荷瘤小鼠的淋巴瘤生长速度变慢、生存时间延长 ,淋巴瘤组织中出现大量的炎症细胞 ;②接种一定数量的EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞的小鼠 ,能抵抗野生型EL 4细胞的攻击 ;③接种瘤苗的小鼠血浆IL 2的水平明显升高 ,而TNF α的水平无明显变化 ;④接种瘤苗的小鼠脾淋巴细胞 ,对野生型EL 4细胞有明显的细胞毒效应 ;EL 4 /B7、EL 4 /GM细胞能刺激小鼠脾淋巴细胞明显增殖。结论 B7.1、GM CSF基因修饰的EL 4细胞 ,能有效地激发C5 7BL/ 6小鼠的抗淋巴瘤免疫反应 ,且B7.1基因与GM 展开更多
关键词 b7.1 GM-CSF 免疫基因治疗 淋巴瘤
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IL-2-TNFα融合基因与B7.1基因联合修饰的肿瘤的疫苗作用
7
作者 刘雪丰 张连峰 +2 位作者 张铭 马耀文 蔡有余 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2000年第2期98-106,共9页
目的 改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法 在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果 免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比... 目的 改进基因修饰的肿瘤细胞疫苗的效力。方法 在小鼠乳腺癌细胞系EMF6 和一个已被含有IL - 2和TNFα融合基因的逆转录病毒载体XdF转染的EMF6 亚系 (T2 -EMF6)中表达B7 1基因。结果 免疫 /侵袭实验表明 ,与单基因转导的肿瘤细胞相比 ,IL - 2-TNFα/B7 1共同修饰的肿瘤细胞具有较低的致瘤性和较优的疫苗效力 (P <0 0 5)。在各种肿瘤细胞的免疫接种后三周 ,进行混合淋巴细胞培养实验和51 Cr释放实验来检测动物的细胞免疫活性 ,IL - 2 -TNFα和B7 1共同作用诱导了比其中的任意一个单独作用更强的抗肿瘤应答 (比IL - 2 -TNFα高 2 5% ,比B7 1高 2 0 % )。结论 IL - 2 -TNFα和B7 1协同作用可提高他们所修饰的肿瘤细胞的疫苗效力。 展开更多
关键词 b7.1 IL-2 TNF 肿瘤细胞 疫苗效力 融合基因 联合 免疫接种 动物 释放
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DESIGN OF ANTI-CD3 ScFv-B7.1 FUSION MOLECULE AND PREDICTION OF ITS BIOLOGICAL CHARACTERISTICS
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作者 杨章民 司履生 +1 位作者 王一理 来宝长 《Academic Journal of Xi'an Jiaotong University》 CAS 2002年第2期117-120,共4页
Objective To design and construct the eukaryotic expression vector which expresses Anti-CD3 ScFv-B7.1 fusion molecules and predict the biological characteristics, the rationality and feasibility of the spacer. Methods... Objective To design and construct the eukaryotic expression vector which expresses Anti-CD3 ScFv-B7.1 fusion molecules and predict the biological characteristics, the rationality and feasibility of the spacer. Methods To analyze the flexibility, Hoop & Woods hydrophilicity and the epitope of Anti-CD3 ScFv-B7.1 fusion molecule at secondary structure level by computer simulation utilizing the GoldKey software. Results By comparing with Anti-CD3 ScFv and B7.1 respectively, it shows that Anti-CD3 ScFv-B7.1 fusion molecules can form correct secondary structure with the linking of the spacer, the fusion does not change the original hydrophilicity and epitopes of both Anti-CD3 ScFv and B7.1, no new epitopes emerge; The spacer is flexible and shows low antigenicity. Conclusion The design of Anti-CD3 ScFv-B7.1 fusion molecule are rational and feasible, the expressed fusion protein could retain the maximum biological activity and the function of both Anti-CD3 ScFv and B7.1. 展开更多
关键词 anti-CD3 SCFV b7.1 FUSION gene COMPUTER simulation
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低剂量X射线在优化pEgr-IL18-B7.1基因-放疗方案中的作用 被引量:2
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作者 武宁 陈光伟 +2 位作者 刘永哲 金顺子 刘树铮 《中华放射医学与防护杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期223-225,共3页
目的观察低剂量X射线全身照射在接种Lewis肺癌小鼠的pEgr-IL18-B7.1基因-放疗中的抑瘤作用。方法基因-放疗组中小鼠肿瘤局部注射由多聚乙烯亚胺包裹的pEgr-IL18-B7.1重组质粒,分别接受由2GyX射线局部照射和0.075GyX射线全身照射组合的... 目的观察低剂量X射线全身照射在接种Lewis肺癌小鼠的pEgr-IL18-B7.1基因-放疗中的抑瘤作用。方法基因-放疗组中小鼠肿瘤局部注射由多聚乙烯亚胺包裹的pEgr-IL18-B7.1重组质粒,分别接受由2GyX射线局部照射和0.075GyX射线全身照射组合的不同治疗方案,观察各种治疗方案在荷瘤小鼠中的抑瘤作用。结果与单纯多次大剂量X射线局部照射相比,单次大剂量X射线局部照射后加多次低剂量全身照射在联合pEgr-IL18-B7.1基因治疗中能体现出更为有效的抑制肿瘤生长作用。结论低剂量X射线全身照射作为一种优化手段,可有效增强pEgr-IL18-B7.1基因-放疗的抑瘤效果。 展开更多
关键词 低剂量X射线 pEgr-IL18-b7.1重组质粒 基因-放疗 LEWIS肺癌细胞
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肿瘤基因疫苗免疫增效载体pVAX1-IRES-GM/B7的构建与表达 被引量:3
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作者 刘宁 阎瑾琦 +4 位作者 冉多良 贾锐 张亮 王浩 于继云 《军事医学科学院院刊》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期249-252,共4页
目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7。方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,... 目的:构建上游可以表达肿瘤抗原复合物,下游表达人GM-CSF和B7.1免疫协同增效分子的双顺反子真核表达载体pVAX1-IRES-GM/B7。方法:通过搭桥PCR获得人GM-CSF和B7.1融合基因,插入已构建好的DNA疫苗载体pVAX1-IRES的下游,瞬时转染293T细胞,通过流式细胞术和间接免疫荧光检测融合基因的表达。此外,还在载体上游插入肿瘤抗原复合物,进一步验证该载体对肿瘤抗原的表达情况。结果:酶切鉴定和序列分析表明,GM/B7融合基因与设计完全一致,在体外细胞检测中获得表达,而且上游的抗原基因也可以顺利表达。结论:该载体的构建成功可以为肿瘤基因疫苗研制提供免疫增效载体。 展开更多
关键词 GM-CSF b7.1 基因融合 IRES 真核表达 癌症疫苗 抗原 肿瘤
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