实时荧光定量PCR检测BAALC基因在正常核型急性髓系白血病中的表达

目的探讨BAALC基因在NC-AML中的表达及其临床意义。方法运用实时荧光定量RT-PCR方法检测BAALC基因在48例NC-AML患者中的表达。结果以48例NC-AML患者骨髓BAALC基因中位表达为界,分为高表达(n=26)和低表达(n=22)组。BAALC高表达组与低表达组相比,患者的年龄、性别、血红蛋白量、血小板计数、外周血及骨髓中原始细胞比例差异无显著性;BAALC高表达组外周血高白细胞、FAB分型中M0和M1及CD34表达率较低表达组高;BAALC高表达组完全缓解率(CR)58%较低表达组CR87%差异有显著性(P<0.05);BAALC高表达组复发率42%较低表达组复发率19%差异有显著性(P<0.05)。结论BAALC基因高表达是NC-AML患者预后不良的分子标志。

BAALC蛋白在急性白血病中的表达及其临床意义

目的探讨脑和急性白血病胞质(Brain and acute leukemia cytoplasmic,BAALC)蛋白在急性髓细胞性白血病(Acute myeloid leukemia,AML)的表达及其临床意义。方法采用Western blot方法半定量检测BAALC蛋白在58例AML患者(初诊24例、完全缓解28例和复发6例)的骨髓单个核细胞(Bone marrow mononuclear cells,BM-MNCs)的表达水平,15例非恶性血液病患者以及AML细胞系KG1α和HL-60分别作为阴性和阳性对照。结果 KG1α和HL-60细胞BAALC均为阳性高表达,非恶性血液病对照者BAALC表达均为阴性。BAALC阳性率在AML初诊组(83.3%)与复发组(100%)均高于完全缓解(CR)组(7.1%)和阴性对照组(0)(P<0.001);AML初诊组和复发组的BAALC蛋白相对含量明显高于CR组和阴性对照组(P<0.01),且CR组和阴性对照组之间BAALC表达阳性率和相对含量差异无统计学意义(P>0.05)。结论 BAALC蛋白在AML中表达水平异常增高,提示BAALC可能与AML的发生发展密切相关。

实时定量逆转录PCR检测急性髓系白血病患者骨髓细胞BAALC基因表达

目的:建立实时定量逆转录聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性髓系白血病(AML)骨髓细胞BAALCmRNA的方法,并对24例初诊AML患者骨髓标本进行检测,初步观察其表达及意义。方法:构建BAALC基因转录本的阳性标准品质粒,利用ABI Prism7300型实时定量PCR仪进行检测,BAALC mRNA定量结果以校正比值(NQ)表示,NQ=BAALC mRNA拷贝数/ABL mRNA拷贝数。结果:RQ-PCR实验敏感度为5个拷贝。ABL及BAALC基因CT值的批内差及批间差均<2.26%。FAB各亚型中,M2型BAALC基因高表达率高于M3-M6型(P<0.05)。BAALC高表达患者血小板计数倾向于比低表达患者更低(P=0.175),CD34阳性率倾向于比低表达患者高(P=0.153)。骨髓增生异常综合征(MDS)转化的或具有MDS特点的AML(MDS-related AML)患者无论BAALC高表达还是低表达均呈现难治/复发,而原发性AML患者BAALC高表达者难治/复发率倾向于比低表达者高(P=0.182)。结论:建立的RQ-PCR检测AML患者骨髓细胞BAALC mRNA的方法稳定可靠,敏感度高。BAALC基因高表达可能是原发性AML患者一个重要不良预后因素。

BAALC转录本1-6-8逆转录病毒表达载体的构建

目的构建含BAALC(brain and acute leukemia,cytoplasmic)1-6-8转录本的逆转录病毒表达载体。方法从KASUMI-1细胞株中提取mRNA,应用RT-PCR技术扩增BAALC 1-6-8获得目的基因,选用pMDTM18-TVector做TA克隆。分别双酶切TA克隆获得的阳性质粒和pcDNATM3.1/myc-His A+质粒,琼脂糖电泳纯化回收前者的小片段和后者的大片段,应用T4连接酶连接后转化至E.coliDH5α中。PCR扩增BAALC-myc-His基因序列,双酶切PCR产物和pLXSN载体,T4连接酶连接后转化至E.coliDH5α中,挑选阳性克隆,PCR、双酶切及测序鉴定。结果 PCR分别扩增TA克隆产物和重组pcDNATM3.1/myc-His A+-BAALC,在535bp处均可见一清晰的特异性扩增条带,显示TA克隆及重组真核表达载体成功;PCR扩增pLXSN-BAALC-His大小为664 bp,双酶切及测序结果证实目的基因片段正确插入到逆转录病毒表达载体pLXSN中。结论分离得到了BAALC 1-6-8转录本基因,并成功构建了pLXSN-BAALC-His表达载体。

联合检测中危组成人急性髓系白血病患者MDR1与BAALC基因mRNA表达水平及其临床意义

急性髓系白血病(Acute myeloid leukemia, AML)是高度异质性疾病,存在多种具有不同功能的临床意义的基因或分子学异常。我们已经证明了MDR1、BAALC基因均为AML重要的独立预后指标。但是联合检测这两个指标对于中危组AML预后的意义尚未进行阐述。方法:使用实时定量PCR方法检测105例初治成人中危组AML的骨髓标本中MDR1和BAALC基因mRNA水平。将AML患者根据两个基因表达水平分别分为高表达组和低表达组,并统计分析两组病例中临床预后间差异。结果:105例中危组AML中首次诱导化疗后CR率为79.0% (83/105),复发率为38.6% (32/83)。根据MDR1和BAALC基因表达情况,将105例患者分为4组。MDR1基因和BAALC基因均高表达组、MDR1基因高表达而BAALC基因低表达组、MDR1基因低表达而BAALC基因高表达组、MDR1基因和BAALC基因均低表达组。前三组间病人的一般情况及预后资料之间无统计学差异,因此将后组合并为一个组,即高MDR1和/或高BAALC基因表达组。低MDR1/低BAALC患者的CR率(91.4% vs 72.9%, P = 0.028)和OS (79.7% vs 25.3%, P = 0.000)明显高于高MDR1和/或高BAALC基因高表达组,而复发率明显低于MDR1和/或BAALC基因高表达组(15.6% vs 52.9%, P = 0.001)。结论:联合检测MDR1和BAALC基因表达有助于提高成人中危组AML的分层级预后判断,低MDR1/低BAALC的AML患者预后较好。

急性髓系白血病患者BAALC的表达及其临床意义

目的:检测急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)患者BAALC(brain and acute leukemia,cytoplasmic)基因的表达并探讨其临床意义。方法:收集93例初诊AML患者(研究组)和36例非恶性血液病患者(对照组)骨髓,应用实时定量PCR(real-time quantitative PCR,RQ-PCR)法检测骨髓单个核细胞中BAALC转录本水平。采用ROC曲线根据其表达水平对AML患者再次分组并比较组间临床参数的异同,分析其临床意义。结果:AML患者BAALC表达水平明显高于对照组(P<0.001)。AML患者的BAALC表达水平根据临界值2.107(ROC曲线敏感度51%、特异性100%)分为高表达组和低表达组。两组患者的性别、年龄、外周血白细胞计数、血小板计数、血红蛋白含量和基因突变差异无统计学意义(P>0.05),但FAB分型、WHO分型、不同核型以及染色体危险程度分型差异有统计学意义(P<0.05),BAALC高表达组原始细胞计数明显高于低表达组(P<0.001)。BAALC高表达组治疗后完全缓解率低于BAALC低表达组(P=0.087);BAALC高表达组患者总体生存时间明显低于BAALC低表达组(P=0.031),正常核型AML患者中BAALC高表达组总体生存时间也明显低于低表达组(P=0.043)。结论:BAALC高表达是AML患者预后不良的影响因素,可作为AML辅助诊断的参考标志。

荧光定量PCR检测急性髓细胞白血病患者BAALC基因及临床意义

目的研究急性髓细胞白血病(AML)患者 BAALC(brain and acute leukemiacytoplasmic)基因的表达水平及其临床意义。方法构建实时定量 PCR 检测 BAALC 基因表达的技术,并定量检测63例初治 AML 患者 BAALC 基因的表达水平及分析其与临床疗效的关系。结果建立的实时定量 PCR 方法的标准曲线相关系数大于0.99。49例(78%)初治 AML 患者存在 BAALC 基因表达;BAALC 基因高表达患者发病时外周血 WBC 计数、Hb 浓度、PLT 计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(26.3±18.1)×10~9/L、(78.3±21.8)g/L、(76.9±64.5)×10~9/L 和(61.2±22.3)%,低表达患者发病时外周血 WBC 计数、Hb 浓度、PLT 计数及骨髓白血病细胞比例分别为:(30.2±21.7)×10~9/L、(81.6±30.9)g/L、(73.9±57.2)×10~9/L 和(54.3±16.3)%,两组间差异无统计学意义(P>0.05);正常核型初治 AML 患者中 BAALC 高表达率为68%(25/37),高于非正常核型 AML 患者[23%(6/26)],差异有统计学意义(x^2=12.093,P=0.001);正常核型初治 AML 患者中 BAALC 基因高表达患者化疗的完全缓解率(CR)为65%(20/31),低于低表达患者[84%(27/32)],差异有统计学意义(X^2=6.573,P:0.013)。结论 BAALC 基因高表达是正常核型 AML 患者一个重要不良预后因素。

华南地区不同亚型急性髓系白血病患者骨髓细胞BAALC基因表达对疗效及预后的影响

探讨华南地区不同亚型急性髓系白血病患者骨髓细胞BAALC基因表达对疗效及预后的影响。研究发现, BAALC基因的高表达组复发率远高于低表达组, 死亡率远高于低表达组。其他8种检测基因的高表达组与低表达组的死亡率之间差异无统计学意义。性别是研究病例的保护因素, 男性病例的预后生存率高于女性;BAALC基因表达高低分组变量是研究病例的危险因素, 基因低表达组的预后生存率高于基因高表达组。本研究结果有助于临床工作中为BAALC高表达患者设计个体化治疗方案。

急性髓系白血病ERG、MDR1及BAALC基因的表达水平及临床意义

目的:探讨急性髓系白血病(acutemyeloidleukemia,AML)患者骨髓单个核细胞的ETS相关基因(ETS related gene,ERG)、多药耐药基因1(Multidrug resistance gene 1,MDR1)、脑和急性白血病胞质(Brain and acute leukemia cytoplasmic,BAALC)基因的表达水平及临床意义。方法:选取90例成人AML患者为研究对象,均接受蒽环类药物诱导化疗联合阿糖胞苷等进行初步治疗,采用实时荧光定量检测PCR技术检测治疗后的骨髓单个核细胞ERG、MDR1、BAALC基因表达,并分析其与患者临床特征、危险度分层、治疗疗效、生存率的关系。结果:AML患者ERG、MDR1、BAALC基因均有强表达,三因子表达强弱同白细胞、血小板等临床指标无明显相关性(P>0.05),不同危险度分层对应的ERG、MDR1、BAALC表达之间有明显差异,中危组、高危组患者表达强度均高于低危组(P<0.05)。ERG、MDR1低表达组对应的疗效CR(93.1%%,89.6%)、OS(56.5%, 66.7%)较高表达组CR(61.4%, 81.3%)、OS(56.5%,66.7%)值更高(P<0.05),不同BAALC表达者疗效CR及生存率OS比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:AML患者单个核细胞的ERG、MDR1基因表达水平与其危险度分层、疗效和生存率呈负相关,以REG和MDR1同AML关系敏感,BAALC敏感度较低,联合检测REG、MDR1、BAALC基因表达可能提高AML患者危险度分层、疗效及预后判读的准确度。

BAALC基因的rs62527607单核苷酸多态性和儿童AML易感性的关联

目的探讨脑和急性白血病胞质(BAALC)基因的rs62527607单核苷酸多态性和儿童急性髓细胞性白血病(AML)易感性的关联。方法选取郑州儿童医院急性髓细胞性白血病(非急性早幼粒细胞白血病)患儿138例,同时选择门诊行健康体检的正常儿童166人作为对照组,两组利用连接酶检测技术检测BAALC基因的rs62527607单核苷酸多态性,同时予以AML患儿吡柔比星治疗,并记录毒副反应。结果 AML组中TT、TG基因型比例高于对照组(TT:13.0%vs. 2.4%,TG:43.4%vs. 8.4%),GG基因型比例低于对照组(43.4%vs. 89.1%),其基因分布比较差异均有统计学意义(χ~2=22.85,P<0.05);AML组中TT、TG基因能增加其患病风险,与对照组比较差异有统计学意义(OR=0.17,95%CI=0.05~0.49;OR=0.12,95%CI=0.06~0.23;P均<0.05)。AML女性组TT、TG基因能增加其患病风险,与对照组比较差异均无统计学意义(OR=1.07,95%CI=0.89~1.30;OR=1.25,95%CI=0.87~1.82;P均>0.05);AML男性组TT、TG基因能增加其患病风险,与对照组比较差异有统计学意义(OR=1.30,95%CI=1.09~1.51;OR=2.20,95%CI=1.12~4.31;P均<0.05);BAALC rs62527607各基因型多态性与中性粒细胞减少、血小板减少、消化道反应、肝脏毒性分级无明显相关关系(χ~2=4.53、3.89、5.01、5.23,P>0.05);携带等位基因G(TG+GG)有增加中性粒细胞减少、血小板减少、消化道反应、肝脏毒性的趋势,但差异无统计学意义(OR=1.16,95%CI=0.70~1.92;OR=1.15,95%CI=0.53~2.39; OR=1.72,95%CI=0.78~3.74;OR=1.23,95%CI=0.65~1.89;P均>0.05)。结论 BAALC基因TT、TG基因型能增加儿童AML易感性,且有增加蒽环类药物吡柔比星毒副反应发生的趋势,但其rs62527607单核苷酸多态性与儿童AML发病风险的机制仍需进一步探讨。

急性髓系白血病预后相关的分子标志

众多的无法被细胞遗传学方法检测出来的基因异常(如基因突变及表达异常等)已越来越多的被发现。这使得对不同预后的急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)的分析进入分子水平。例如:存在转录因子C/EBPα(CCAAT enhancer binding factoralpha,CCAAT增强结合因子α亚单位)或核磷蛋白(nucleophosmin-1,NPM)基因突变的AML往往提示有较好的预后,而有着MLL基因(mixed-lineage leukemia,混合系白血病基因)部分串联重复突变(MLL-PTD),FLT3(FLM样酪氨酸激酶3)基因串联重复突变(FLT3-ITD)以及WT-1(Wilms′Tumor1,肾母细胞瘤1)基因突变的AML却提示不良预后。本文将探讨这些异常基因分子的特点,联系及其对AML预后的影响。