应用ELISPOT方法筛选确定HIV-1 B／C亚型疫苗六种抗原的H-2^d限制的T细胞表位

为了筛选和确定用于检测表达HIV-1 B'/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、polr、evt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位,本研究使用表达上述6种抗原的复制型DNA疫苗和非复制型重组痘苗病毒疫苗联合免疫BALB/c小鼠,通过矩阵设计将HIV-1 B(C)亚型6种相应抗原全序列肽库分别混合成肽池,使用肽池对免疫小鼠进行IFN-γELISPOT检测,根据检测结果确定肽库中特异反应的优势表位肽。结果显示:筛选到七条针对Gag的特异表位肽,其中有5条与文献报道相同,另2条为新表位肽;筛选到3条针对Pol蛋白特异表位肽,其中一条为新表位肽;筛选到2条针对gp160特异表位肽,其中一条为新表位肽;在Nef肽库中筛选到一条新的表位肽;从Tat肽库中筛选到3条表位肽,这三条肽在肽库中是连续的序列,都包含(或部分包含)网上公布的表位序列;在Rev肽库中没有筛选到能够产生阳性反应的特异性表位肽。本研究使用IFN-γELISPOT方法筛选和确定了可用于检测表达HIV-1 B'/C亚型病毒6种抗原(gp160、gag、pol、revt、at和nef)的艾滋病疫苗免疫小鼠后H-2d限制的特异性T细胞表位。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位H-2~d限制性T_H表位的预测与鉴定

目的鉴定幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H-2d限制性TH表位,为研究Hp表位疫苗奠定实验基础。方法用RANKPEP软件预测尿素酶B亚单位可能的H-2d限制性TH细胞表位,合成表位肽,采用淋巴细胞增殖试验、流式细胞分析及CD4+T淋巴细胞增殖试验进行表位鉴定。结果经软件预测获得7条可能的H-2d限制性TH细胞表位,多肽合成经分析各表位肽纯度均>85％,其中3条表位肽U546-561、U229-244、U237-251能够刺激rUreB致敏的BALB／c(H-2d)小鼠的CD4+ T淋巴细胞增殖(SI>2)。结论U546-561、U229-244、U237-251是UreB的H-2d限制性TH细胞表位,可进一步用于Hp表位疫苗的研究。

幽门螺杆菌尿素酶B亚单位Th表位的免疫学特性研究

采用MHC限制性分析、ELISA方法、淋巴细胞增殖实验等方法研究幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)的H- 2~d限制性Th表位U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)的免疫学特性。发现抗I-E^d抗体能够抑制U_(546-561)对CD4^+T淋巴细胞的刺激,抗I-A^d抗体能够抑制U_(229-244)、U_(237-251)对CD4^+T淋巴细胞的刺激作用。U_(229-244)、U_(229-244)能刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IL-4和IL-10,U_(237-251)刺激CD4^+T淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-2,且U_(546-561)、U_(229-244)、U_(237-251)三个表位肽免疫BALB/c小鼠能够引起针对各自免疫多肽和rUreB的CD4^+T细胞应答。结果表明U_(546-561)为I-E^d限制性Th2表位,U_(229-244)为I-A^d限制性Th2表位、U_(237-251)为I-A^d限制性Th1表位。三个表位之间具有协同刺激效应,可以用于Hp表位疫苗的研究。