跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型

目的:通过跑步运动联合高脂单笼喂饲建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型。方法:选取6月龄雄性去势普通级小型猪47只,以随机数字表法随机分为对照组和模型组,对照组5只,模型组42只。模型组施以每日跑步训练联合高脂喂饲干预,对照组予普通饲料喂食,共喂饲24周。对巴马小型猪等待喂食行为、皮毛光泽、口色、粪便性状、划痕、生命体征、形体指标、血脂和行为学指标进行观测。结果:跑步运动联合高脂喂饲可使巴马小型猪出现高脂血症脾虚痰浊证表现:(1)模型组血清TC(14.89±5.56)mmol/L高于对照组(3.88±1.89)mmol/L,TG(1.00±0.36)mmol/L高于对照组(0.35±0.09)mmol/L,HDL-C(1.97±0.61)mmol/L高于对照组(0.77±0.17)mmol/L,LDL-C(8.00±3.17)mmol/L高于对照组(1.09±0.25)mmol/L,ox-LDL(8.84±0.86)μg/L高于对照组(8.04±0.25)μg/L,差异均有统计学意义(P<0.01)。(2)模型组更趋于倦怠、懒惰,表现为咬物品、摆尾频次、闻物体、站立、走持续时间等低于对照组,闻同伴、卧、坐持续时间高于对照组(P<0.01)。(3)模型组等待喂食行为、粪便性状、划痕、口色评分大于对照组(P<0.05)。(4)模型组体质量、腹围、臀宽大于对照组(P<0.01)。(5)模型组心率大于对照组,呼吸频率小于对照组(P<0.01)。结论:跑步运动联合高脂单笼喂饲能成功建立巴马小型猪高脂血症脾虚痰浊证动物模型,为巴马小型猪进一步应用于中医药研究中提供有益的参考。

不同海拔地区两种小型猪血液生理生化指标比较

本试验旨在比较高原蕨麻小型猪与平原巴马小型猪的血液生理生化指标差异,为高原蕨麻小型猪的实验动物化提供理论基础。试验分别在高原地区和西安市采集高原蕨麻小型猪与巴马小型猪血样,检测10项血液生理指标和14项血液生化指标,并对结果进行统计分析。结果显示,血液生理指标中高原蕨麻小型猪的红细胞计数(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)、红细胞平均血红蛋白含量(MCH)、红细胞平均血红蛋白浓度(MCMH)均极显著高于巴马小型猪(P<0.01),血小板(PLT)、红细胞分布列宽变异系数(RDW-CV)和红细胞分布宽度标准差(RDW-SD)与巴马小型猪相比差异显著(P<0.05);血液生化指标中高原蕨麻小型猪γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、葡萄糖(GLU)、肌酐(CRE)均极显著高于巴马小型猪(P<0.01),其余指标均无显著差异(P>0.05)。结果表明,高原蕨麻小型猪具有低氧适应的生理特征,与巴马小型猪相比有独特的高原适应性,具有开发成为高原疾病动物模型的潜力。

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌糖代谢相关分子的变化特点

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织葡萄糖代谢相关分子的变化特点。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组及脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织葡萄糖转运体4(glucose transporter 4,GLUT4)、磷酸果糖激酶1(Phosphofructokinase-1,PFK-1)、丙酮酸激酶(Pyruvate kinase2,PKM2)和己糖激酶(Hexokinase,HK)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织GLUT4、PFK1、PKM2和HK蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织GLUT4、PKM2、PFK1、HK mRNA表达水平显著下降(P<0.01),GLUT4、PKM2蛋白表达水平显著下降(P<0.05)。PFK1、HK蛋白表达水显著下降P<0.01)。结论:脾虚痰浊证小型猪心肌存在葡萄糖代谢异常,与葡萄糖转运及代谢相关分子表达呈下降趋势。

广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性研究

为探讨广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的多态性,以其耳组织为试验材料,经PCR扩增获得广西巴马小型猪SLA-DQB外显子2片段,片段大小为273 bp,含有1个RsaI酶切位点和5个HaeIII酶切位点,基因型分别为27bp/246 bp和84 bp/83 bp/7 bp/16 bp/29 bp/54 bp。采用PCR-RFLP对30头广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2的PCR扩增产物进行多态性分析,发现广西巴马小型猪封闭群内S,LA-DQB基因外显子2无多态性位点;而克隆测序及同源性比较分析表明,广西巴马小型猪SLA-DQB基因外显子2序列与普通猪(Sus Scrofa)、人类(Homo sapiens)的同源性分别为94.1%、79.1%。

巴马小型猪在辽宁地区的适应性观察及血液生理生化指标检测

从广西巴马瑶族自治县引进巴马小型猪20头,进行饲养繁殖,观察其在东北环境下的适应性及血液生理生化指标的变化。经过2年的观察与检验,证实引进的巴马小型猪适应性良好,繁殖性能正常,性成熟期为2~3月龄,妊娠期为114~120d,初产仔猪数为3~7头,经产仔猪数为5~10头,产仔猪数与母猪体重呈正相关(R2=0.96)。血液生理生化指标检测结果显示,与巴马原种厂提供的数据相比,白细胞数(WBC)、血红蛋白(HGB)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖定量试验(GLU)、总胆固醇(T-Ch)、甘油三酯(TG)、胆碱酯酶(CHS)、Na、Cl、淀粉酶(AMS)和二氧化碳结合力(CO2CP)均有显著差异(P【0.05),其余指标差异均不显著(P】0.05)。结果表明由辽宁省饲养并繁殖的巴马小型猪的血液生理生化指标与人类具有一定的相似性,可以为辽宁地区试验应用巴马小型猪提供参考依据。

巴马小型猪在医学研究中的应用进展

广西巴马小型猪作为国内小型猪主要品种之一,具有遗传性稳定、多产、体重较小、体表多覆白毛等特征,组织器官及生化指标与人类相似,已越来越广泛地应用于医学研究领域:猪的心脏解剖与生理特点与人类高度相似,已被广泛应用于心血管系统研究中,在我国,巴马小型猪被用来构建心肌缺血、卵圆孔未闭等心血管疾病模型;猪具有杂食性及与人相似的脂质代谢,可用于研究内分泌疾病,巴马小型猪已用于糖尿病动物模型建立及其遗传易感性、并发症的防治研究等;巴马小型猪的消化系统与人类相似,利用此特点已建立阻塞性慢性胰腺炎、结肠穿孔、胆肠吻合等消化系统疾病模型;巴马小型猪除头、尾外,体表覆以白毛,这一特点使其成为研究皮肤创伤、烧伤修复等的理想动物;小型猪的牙齿解剖结构与人类相似,口裂大,可作为口腔医学研究中的理想动物,巴马小型猪已用来建立牙髓坏死模型及对上颌扩弓方式的研究;类似人的解剖、生理、病理使其成为较为适合的异种移植供体。在中医药研究方面,已用巴马小型猪分别建立了肝脏、脾脏、股动、静脉出血及头颈恶性肿瘤放疗后的腮腺损伤动物模型以研究中药制剂的疗效及机制。

速眠新Ⅱ与氯胺酮复合麻醉对巴马小型猪呼吸与循环的影响

试验旨在观察速眠新Ⅱ、速眠新Ⅱ与氯胺酮复合麻醉对巴马小型猪呼吸与循环功能的影响。试验选取成年健康巴马小型猪20只,分为速眠新Ⅱ组、速眠新Ⅱ与氯胺酮复合组,每组10只。速眠新Ⅱ组诱导时肌内注射速眠新Ⅱ0.1mL/kg;速眠新Ⅱ与氯胺酮复合组采用肌内注射配比度为1∶2(V/V)的速眠新Ⅱ与氯胺酮0.2mL/kg。监测诱导前、后呼吸频率(RR)、血氧饱和度(SpO2)、呼气末二氧化碳(PET CO2)、心率(HR)和平均动脉压(MAP)等参数。结果显示,诱导后1min速眠新Ⅱ组RR、SpO2、MAP、HR与诱导前相比均显著下降(P<0.05),通气量(VE)极显著下降(P<0.01)。速眠新Ⅱ与氯胺酮复合组诱导前、后呼吸循环参数之间均无显著变化(P>0.05)。因此,速眠新Ⅱ与氯胺酮复合麻醉避免了单独使用速眠新Ⅱ对呼吸与循环系统抑制的不良反应,安全可靠。

丙泊酚静脉麻醉与异氟醚吸入麻醉在巴马小型猪实验中的比较

目的比较丙泊酚静脉麻醉与异氟醚吸入麻醉在巴马小型猪实验中的麻醉效果。方法巴马小型猪10头,平均分成2组,分别进行丙泊酚静脉麻醉和异氟醚吸入麻醉,并于术前、术中及术后对其进行麻醉监测。结果两组实验猪的数量、体重、手术时间和麻醉时间无显著性差异(P>0.05);异氟醚组恢复自主呼吸的时间短于丙泊酚组(P<0.05);与基础值相比,各组实验猪在麻醉后HR值均明显升高(P>0.01),MAP值降低明显(P>0.01);但各组间及组内SPO2和PH值差异不显著(P>0.05)。结论丙泊酚静脉麻醉应根据手术过程中实验动物的反应情况适当调整丙泊酚泵入量;而异氟醚吸入麻醉的麻醉过程平稳,麻醉效果好,术后苏醒快,适合情况复杂且时间较长的手术。

广西巴马小型猪2型糖尿病模型骨骼肌糖代谢及能量代谢相关基因的表达差异

目的探讨糖代谢及能量代谢过程中的关键调控基因(PGC-1α、Glut-4、ERRα、NRF-1、TFAM和线粒体基因)在2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)发生中的作用。方法以广西巴马小型猪T2DM模型建立的发病组和未发病组的背最长肌为实验材料,利用QRT-PCR实时荧光定量的方法对糖代谢及能量代谢相关基因mRNA和线粒体基因的表达情况进行检测。结果在广西巴马小型猪背最长肌中,T2DM组PGC-1α、Glut-4、ERRα和NRF-1的相对表达量均显著高于非T2DM组,TFAM和线粒体基因的相对表达量则稍低于非T2DM组。结论在T2DM巴马小型猪骨骼肌中,上调PGC-1α及其下游基因Glut-4、ERRα和NRF-1的表达水平,有利于改善葡萄糖代谢;而线粒体合成不足,致使ATP合成量不够,或引起胰岛素抵抗,进而导致2型糖尿病的发生。

洛伐他汀在巴马小型香猪体内毒动学研究

目的研究洛伐他汀在巴马小型香猪体内的毒动学特点。方法选健康雄性巴马小型香猪4头,灌胃给予洛伐他汀1.25 g.kg-1,采用反相高效液相色谱法测定不同时间的血药浓度,用3P97实用药动学程序计算毒动学参数。结果洛伐他汀分布相半衰期t1/2(α)为0.807 h,消除相半衰期t1/2(β)为18.376 h,浓度-时间曲线下面积(AUC)为95.964μg.h.mL-1。结论洛伐他汀在巴马小型香猪体内毒动学行为符合具一级消除的二室血管外给药模型,在巴马小型香猪体内清除较快。

巴马小型猪冠状动脉粥样硬化模型中炎症因子和病理形态学分析

目的:观察巴马小型猪冠状动脉粥样硬化模型血清炎症因子变化,探讨炎症与冠状动脉粥样硬化发病的关系,同时观察冠脉的病理改变。方法:将巴马小型猪随机分配,对照组予基础饲料喂饲,模型组予高脂喂饲联合球囊拉伤。在多个时间点分别对两组行血管内超声、血清炎症因子检测和病理学分析。结果:第24周,冠状动脉血管内超声示对照组平均面积狭窄率为6.56%,模型组平均面积狭窄率为44.12%。第24周、28周、36周和48周,模型组hs-CRP、IL-6、VCAM-1、MCP-1和s P-selectin明显高于同期对照组,统计学差异显著。模型组24周可见冠状动脉内膜局部不规则增厚,增厚的内膜中存在泡沫细胞;48周可见冠状动脉内膜不规则增厚,粥样斑块形成,增厚的内膜中存在大量脂质、泡沫细胞、炎细胞及增生的纤维组织,动脉中膜受压变薄。结论:炎症反应在AS发生、发展和恶化中起重要作用,炎症加速了斑块的进展。

蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因的比较

目的研究蕨麻猪与巴马小型猪脏器指数及低氧相关基因表达量的差异。方法采用Taq Man探针实时定量PCR(real-time quantitative PCR)技术,检测蕨麻猪与巴马小型猪心、肝、脾、肺、肾低氧反应基因表达量的变化。结果蕨麻猪的肾脏、脾脏指数低于巴马小型猪,蕨麻猪的心脏、肺脏指数高于巴马小型猪。蕨麻猪血管内皮细胞生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)与低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor 1,HIF-1α)在肺、肾中的表达量明显比普通猪高(P<0.05或P<0.01);促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)只在肺中比巴马小型猪高(P<0.05)。结论不同物种脏器指数可能是物种对物质环境、能量环境、外界病原体、能量代谢需求等综合因素进化适应的结果。蕨麻猪低氧相关基因明显比巴马小型猪高,揭示在基因方面蕨麻猪具有较强的高原适应性。

脾虚痰浊证巴马小型猪心肌组织LKB1/MPK信号通路的变化

目的:探讨脾虚痰浊证巴马小型猪心肌物质代谢相关通路LKB1/AMPK的变化。方法:普通级雄性巴马小型猪10只随机分为正常组、脾虚痰浊组,每组5头。采用疲劳过度联合高脂单笼饲养建立小型猪脾虚痰浊证模型。采用实时荧光定量PCR法检测心肌组织腺苷单磷酸活化蛋白激酶(AMPK)、磷酸化腺苷单磷酸活化蛋白激酶(p AMPK)、肝脏激酶B1(LKB1)mRNA表达,应用Western blotting法检测心肌组织AMPK、p AMPK、LKB1蛋白表达水平。结果:与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织AMPK、p AMPK mRNA表达水平显著下降(P<0.05),AMPK、p AMPK蛋白表达水平亦明显下降(P<0.01);与正常组小型猪相比,脾虚痰浊组小型猪心肌组织LKB1mRNA及蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。结论:心肌组织LKB1/AMPK信号通路相关分子表达下调可能为脾虚痰浊证的分子生物学基础。

广西巴马小型猪GHR基因克隆及部分序列的PCR-SSCP分析

为了探讨广西巴马小型猪矮小的分子机理,以广西巴马小型猪肝脏RNA为模板,扩增巴马小型猪生长激素受体(GHR)基因的全序列,将该扩增片段连接到pMD18-T载体后经过转化测序。采用PCR-SSCP方法,对4个品种120头猪的第10外显子的部分序列进行多态性分析。结果表明,克隆的广西巴马小型猪GHR基因全长为1917bp(GenBank登录号为EF041823),与GenBank(X54429)的序列同源性为99%,且第10外显子部分序列SSCP检测没有多态性。经序列比对后,发现广西巴马小型猪生长激素受体胞内域编码区发生7处突变,导致相应氨基酸发生置换,这有可能影响生长激素的胞内运输和生长激素受体的下游信号转导,但经SSCP检测发生突变的位点并没有引起单核苷酸构象的改变。该结论为进一步研究广西巴马小型猪的矮小机理与GHR基因的关系奠定了基础。

亮甲酚蓝筛选对广西巴马小型猪孤雌激活及克隆重构胚早期发育的影响

【目的】探讨亮甲酚蓝(BCB)染色是否可以筛选出发育潜能优秀的卵母细胞。【方法】猪卵丘卵母细胞复合体(COCs)在体外成熟培养前用13μmol/LBCB染色,根据卵母细胞胞质蓝色的有无分为阳性(BCB+,蓝色)和阴性组(BCB-,不着色),以在不含BCB的改良杜氏磷酸盐缓冲液(m-DPBS)中处理90min为控制对照组,直接培育作空白对照,体外成熟培养后统计各组卵母细胞的核成熟率及孤雌激活胚胎、克隆重构胚胎(供体细胞来自广西巴马小型猪)的早期发育率。【结果】BCB+组卵母细胞的核成熟率(80.8%)显著高于BCB-组(44.2%)和空白对照组(72.4%);BCB+组的孤雌囊胚形成率(32.9%)显著高于BCB-组(10.1%),但与对照组(25.8%)之间无显著差异;BCB+组显微操作核移植胚胎的囊胚发育率(14.1%)显著高于BCB-组(3.4%),但与对照组之间无显著差异;各组手工克隆胚胎发育率之间无显著差异。【结论】BCB染色筛选出的卵母细胞具有较好的核成熟发育潜能,但未能显著改善广西巴马小型猪显微操作及手工克隆胚胎的早期发育。

基于遥测技术对巴马小型猪部分生理指标的观测

目的应用遥测技术观察巴马小型猪在清醒自由状态下心电、血压、呼吸、活动等指标昼夜波动变化。方法取雄性6月龄巴马小型猪6只,行浅表股动脉VAP血管通路植入手术,恢复7 d后,用EMAK遥测系统进行24 h连续清醒自由状态下心电、血压、呼吸、活动指标监测,并用EMAK分析软件对上述指标进行分析。结果6月龄巴马小型猪心电、血压、呼吸、活动都有昼夜节律变化,白昼心率显著高于黑夜心率(P<0.01),且白昼PR间期、QRS间期与QT间期均显著低于黑夜(P<0.05,P<0.01),白昼平均心率为76.22次/分,黑夜平均心率为67.03次/分,白昼平均PR间期、QRS间期和QT间期分别为109.97 ms、42.72 ms、380.37 ms,黑夜平均PR间期、QRS间期和QT间期为112.32 ms、44.01 ms、389.24 ms。巴马小型猪白昼收缩压、舒张压、平均压都显著高于夜间(P<0.01),白昼平均收缩压、舒张压、平均压分别为129.57 mmHg、96.75 mmHg、111.73 mmHg,夜间平均收缩压、舒张压、平均压分别为122.81 mmHg、92.65 mmHg、106.19 mmHg,且黑夜收缩压、舒张压、平均压下降率分别为19.89%、19.05%、19.35%。另外,巴马小型猪在白昼的活动情况与呼吸频率都要显著高于夜间(P<0.01)。结论利用遥测技术可以对清醒自由状态下巴马小型猪心电、血压、呼吸、活动等进行连续监测,能真实的反应小型猪在24 h内上述生理指标的变化规律,为巴马小型猪在药理毒理研究中的应用提供参考。

实验用巴马小型猪行硬脑膜成形术全身麻醉的实施及管理

目的探讨实验用巴马小型猪行硬脑膜成形术时全身麻醉的实施及管理的方法。方法将12头巴马小型猪按随机数字表法随机分为观察组(n=6)和对照组(n=6)。对照组采用传统的纤维蛋白胶粘合法进行硬脑膜成形术,观察组采用新的CO_(2)激光焊接法进行硬脑膜成形术。麻醉方法:耳后肌肉注射氯胺酮(10 mg/kg)、咪达唑仑(0.5 mg/kg)和阿托品(0.5 mg)混合液进行基础麻醉,耳缘静脉给予0.05 mg芬太尼和罗库溴铵(0.6 mg/kg)进行诱导麻醉,持续吸入1.5%~2%的异氟烷维持麻醉。麻醉即刻、10 min、30 min、1 h、2 h、3 h、4 h,记录两组小型猪血压(BP)、心率(HR)、呼吸频率(RR);持续监测血氧饱和度。记录麻醉诱导开始至意识消失时间、停止吸入麻醉至自主呼吸恢复时间、至清醒时间;记录术后并发症。结果全麻维持效果Ⅰ级11只;Ⅱ级1只(对照组);脉搏血氧饱和度维持在95%~100%;麻醉后1 h,两组小型猪HR、RR和BP下降并维持在稳定水平,两组均无统计学差异(P>0.05)。两组巴马小型猪麻醉诱导时间、停止吸入麻醉至自主呼吸恢复时间、停止吸入麻醉至清醒时间均无统计学差异(P>0.05)。12头巴马小型猪全部存活,无麻醉相关并发症。结论应用巴马小型猪进行脑膜修补术时,应用芬太尼联合罗库溴铵行静脉诱导、术中持续吸入异氟烷进行维持麻醉是安全、可行的。

特制眠乃宁及氯胺酮对广西巴马小型猪的麻醉观察

目的观察特制眠乃宁及氯胺酮对广西巴马小型猪的麻醉效果。方法选用15头雌性健康广西巴马小型猪,分别用特制眠乃宁及盐酸氯胺酮注射液进行麻醉,试验前后的条件一致,评价方法相同。结果用盐酸氯胺酮麻醉的动物,只有2例勉强完成操作;用特制眠乃宁麻醉的动物,多数可以很快进入麻醉状态,其余动物追加药物的1/3可以达到麻醉效果。结论与氯胺酮相比,眠乃宁使用量小、麻醉效果好。

异氟醚吸入麻醉在巴马小型猪中的应用

目的探讨异氟醚吸入麻醉方法对小型猪麻醉的效果。方法对20头巴马小型猪进行异氟醚吸入麻醉,进行麻醉监测。结果麻醉20例,无麻醉意外情况或死亡,成功率100%。结论异氟醚吸入麻醉应用于小型猪实验,麻醉效果好,麻醉过程平稳,麻醉深度容易控制,安全性高,生命体征稳定,手术后苏醒快,是一种理想的麻醉方法 。

巴马小型香猪口服洛伐他汀的药代动力学研究

目的建立巴马小型香猪的药物代谢研究模型,了解巴马小型香猪机体对药物的作用.方法选择抗动脉粥样硬化的HMG-CoA还原酶抑制剂型药物洛伐他汀（LV）为模型药,给6月龄雄性巴马小型香猪二组共8头,单剂量（6.0 mg/kg,2.4 mg/kg）灌胃,采用RP-HPLC法检测LV的血药浓度,并计算药代动力学参数.结果 LV在巴马小型香猪的处置符合一室开放模型;Tmax分别为（2.54±0.18）,（2.82±0.44）h;T1/2α分别为（1.53±0.05）,（1.52±0.44）h;T1/2β分别为（2.04±0.32）,（2.77±0.89）;Cmax分别为（28.86±3.76）,（10.93±1.77）ng/mL;AUC分别为（202.76±41.98）和（104.86±16.44）（ng/mL）×h.结论 LV在巴马小型香猪的吸收速度约为正常人的0.5倍,消除速度为正常人的1.5～2倍,但整个代谢过程类似正常人,均属一室开放模型,提示巴马小型香猪可作为心血管系统药物LV药代研究的良好模型.