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驽巴贝虫BC-48基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达 被引量:3
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作者 薛书江 于龙政 +1 位作者 曹世诺 张守发 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期214-217,共4页
采用PCR方法扩增驽巴贝虫吉林分离株BC-48基因片段,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、单酶切鉴定后测序;构建BC-48的重组pGEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果显示,克隆的BC-4... 采用PCR方法扩增驽巴贝虫吉林分离株BC-48基因片段,将扩增产物与pGEM-T Easy载体连接,重组质粒经PCR、单酶切鉴定后测序;构建BC-48的重组pGEX-4T-2表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE、Western-blotting分析。结果显示,克隆的BC-48基因片段长610 bp,含有一个570 bp的开放阅读框,编码189个氨基酸,与GenBank中USDA株(U46551)的同源性为96.7%;表达的融合蛋白为45 ku,能被驽巴贝虫阳性血清识别;表明该融合蛋白具有较好的反应原性。 展开更多
关键词 驽巴贝虫 bc-48基因 克隆 表达
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含伪狂犬病毒完整UL49基因及部分UL48基因片段的克隆与序列分析 被引量:2
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作者 方六荣 牛传双 +3 位作者 肖少波 余晓岚 陈桦 陈焕春 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期306-310,共5页
以地高辛标记的伪狂犬病毒 (PRV)Ea株UL4 9.5基因片段为探针 ,同SalI、KpnI、BamHI消化的PRVEa株基因组DNA进行Southern杂交 ,确定SalI 2 .8kb、KpnI 17.0kb、BamHI 2 5 .0kb片段中含UL4 9基因。将SalI2 .8kb片段克隆到pUC119中 ,利用... 以地高辛标记的伪狂犬病毒 (PRV)Ea株UL4 9.5基因片段为探针 ,同SalI、KpnI、BamHI消化的PRVEa株基因组DNA进行Southern杂交 ,确定SalI 2 .8kb、KpnI 17.0kb、BamHI 2 5 .0kb片段中含UL4 9基因。将SalI2 .8kb片段克隆到pUC119中 ,利用其中的BamHI进行亚克隆 ,获得重组质粒pUC2 .0。测定约 2 .0kb片段的全序列并进行序列分析 ,发现该片段包含UL5 0基因部分编码区 ,UL4 9.5基因和UL4 9基因的完整编码区 ,并且在UL4 9基因下游 ,还存在一段约 36 9个碱基的序列 ,经与人单纯疱疹病毒I型 (HSV 1)、牛单纯疱疹病毒I型 (BHV 1)的UL4 8基因进行比对 ,具有较高的同源性 ,推测为PRVUL4 8基因的部分编码区。 展开更多
关键词 基因克隆 伪狂犬病毒 完整UL49基因 部分UL48基因 序列分析
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48%苯达松溶液不同施用量对含有bsl基因恢复系赫敏59的影响
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作者 汪婉琳 张伟 +2 位作者 翟春节 樊勇 张德文 《安徽农业科学》 CAS 2018年第12期52-53,56,共3页
[目的]研究48%苯达松溶液不同施用量对含有bsl基因恢复系赫敏59的影响。[方法]以含有bsl基因的水稻恢复系赫敏59为试验材料,进入始穗期时分别以不同施药量除草剂48%苯达松溶液(3 000、6 000、9 000、12 000 mL/hm^2)进行喷施。以喷施清... [目的]研究48%苯达松溶液不同施用量对含有bsl基因恢复系赫敏59的影响。[方法]以含有bsl基因的水稻恢复系赫敏59为试验材料,进入始穗期时分别以不同施药量除草剂48%苯达松溶液(3 000、6 000、9 000、12 000 mL/hm^2)进行喷施。以喷施清水为对照,分析不同施药量对含有bsl基因恢复系赫敏59的影响,以确定其最低致死施药量。[结果]在赫敏59始穗期施用48%苯达松溶液,其最低致死剂量为9 000 mL/hm^2。[结论]该研究为完善杂交水稻机械化制种技术提供资料。 展开更多
关键词 赫敏59 bsl基因 48%苯达松溶液 施药量 最低致死剂量
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间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48基因特点 被引量:5
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作者 王冰 刘军 +2 位作者 冯辉 孟红蕊 曹雅明 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1336-1337,共2页
目的阐明间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原编码基因Pvs48的特点。方法采集我国疟疾高发混合流行区云南省间日疟患者指尖血样本,制备血样干滤纸片提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48;双脱氧链终止法测序,并对测序结果进行序... 目的阐明间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原编码基因Pvs48的特点。方法采集我国疟疾高发混合流行区云南省间日疟患者指尖血样本,制备血样干滤纸片提取疟原虫基因组DNA;聚合酶链反应(PCR)扩增Pvs48;双脱氧链终止法测序,并对测序结果进行序列多态性分析。结果共成功扩增16例间日疟原虫分离株Pvs48基因。与间日疟原虫标准株Sal-I比较,检测出6处错义突变位点,导致6处氨基酸置换和3种基因型、3种氨基酸型。结论我国间日疟原虫传播阻断疫苗候选抗原Pvs48编码基因相对保守,不同地理株间差异无统计学意义。有限的基因突变再次提示以Pvs48为基础构建的传播阻断疫苗在我国具有广泛应用的可行性。 展开更多
关键词 间日疟原虫 传播阻断疫苗候选抗原 Pvs48 基因多态性
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牛支原体新疆分离株P48基因克隆及分子特征分析 被引量:3
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作者 凌晨 郝成武 +2 位作者 张飞 候凤 贺笋 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第2期457-466,共10页
本研究旨在分析牛支原体P 48基因的序列特性、蛋白的结构和功能。根据GenBank中PG45菌株P 48基因序列(GenBank登录号:CP002188.1)设计特异性引物,运用Overlap-PCR扩增获得P 48基因全长,其目的片段连接到pMD19-T载体上并进行测序,利用生... 本研究旨在分析牛支原体P 48基因的序列特性、蛋白的结构和功能。根据GenBank中PG45菌株P 48基因序列(GenBank登录号:CP002188.1)设计特异性引物,运用Overlap-PCR扩增获得P 48基因全长,其目的片段连接到pMD19-T载体上并进行测序,利用生物信息学方法分析和预测其核苷酸序列及其编码蛋白的理化性质、结构功能(信号肽、跨膜结构、磷酸化位点、糖基化位点、二级结构和三级结构)。结果显示,分离株P 48基因序列为1407 bp,与Mb PG45国际标准株的同源性为100%,聚类于一支;P 48基因编码467个氨基酸残基,组成一个无跨膜、稳定的亲水性蛋白;P48蛋白存在信号肽,有44个潜在的磷酸化位点和1个糖基化位点,其二级结构是混合型,其中α-螺旋所占比例最高(41.76%),无规则卷曲次之(37.69%)。功能预测显示,在信号转导、胁迫应答、受体等方面该蛋白存在较高概率。本研究成功克隆了分离株P 48基因片段,其编码的蛋白是一个稳定可溶、亲水性蛋白,为分析分离株P 48基因的特性和功能提供了一定的理论基础和科学依据。 展开更多
关键词 牛支原体 P 48基因 克隆 生物信息学分析
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Meta-analysis of the cell cycle related C12orf48
6
作者 LOKMAN VARISLI 《BIOCELL》 SCIE 2013年第1期11-16,共6页
The cell cycle is a conserved process from yeast to mammals and focuses on mechanisms thatregulate the timing and frequency of DNA replication and cell division.The temporal and spatial expressionof the genes is tight... The cell cycle is a conserved process from yeast to mammals and focuses on mechanisms thatregulate the timing and frequency of DNA replication and cell division.The temporal and spatial expressionof the genes is tightly regulated to ensure accurate replication and transmission of DNA to daughter cellsduring the cycle.Although the genes involved in interphase are well studied,most of the genes which areinvolved in mitotic events still remain unidentified.Since,the discovery of mitosis related genes is stillincomplete,we performed a co-expression and gene ontology analysis for revealing novel mitosis regulatedgenes.In this study,we showed that C12orf48 is co-expressed with well-known mitotic genes.Moreover,it isalso co-expressed with the genes that have roles in interphase such as DNA replication.Furthermore,ourresults showed that C12orf48 is also differentially expressed in various cancers.Therefore,the results pre-sented in this study suggest that C12orf48 may be an important molecule for both interphase and mitosis.Since,the molecules involved in these mechanisms are crucial for proliferation as well as in carcinogenesis,C12orf48 should be considered as a novel cell cycle and carcinogenesis related gene. 展开更多
关键词 C12orf48 cell cycle CO-EXPRESSION gene ontology oncomine
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SPATA 48基因的多态性与男性少精症的相关性研究
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作者 孙文文 李凤仙 +1 位作者 尹以瑞 阿周存 《大理大学学报》 2021年第10期37-40,共4页
目的:研究SPATA 48基因SNP rs12672941和SNP rs998928的多态性与男性少精症的相关性。方法:应用Snapshot基因分型技术,在279例少精症患者和234例正常男性中,对SNP rs12672941和SNP rs998928的多态性分布进行调查。结果:少精症患者中rs12... 目的:研究SPATA 48基因SNP rs12672941和SNP rs998928的多态性与男性少精症的相关性。方法:应用Snapshot基因分型技术,在279例少精症患者和234例正常男性中,对SNP rs12672941和SNP rs998928的多态性分布进行调查。结果:少精症患者中rs12672941的等位基因C(28.5%vs.22.8%,P=0.040,OR=1.344,95%CI为1.013~1.785)和含有C等位基因的患者(TC/CC)基因型频率(49.8%vs.40.6%,P=0.037,OR=1.453,95%CI为1.023~2.063)显著高于正常男性,而少精症患者TT基因型频率(50.1%vs.59.4%,P=0.037,OR=0.688,95%CI为0.485~0.978)显著低于正常男性。在少精症患者和正常男性之间,rs998928的等位基因频率和基因型频率分布无显著性差异(P>0.05)。结论:SPATA 48基因SNP rs12672941的多态性与少精症相关,影响男性少精症的发病风险。 展开更多
关键词 男性少精症 SPATA 48基因 多态性
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驽巴贝斯虫PCR检测方法的建立及应用 被引量:6
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作者 薛书江 于龙政 +1 位作者 曹世诺 张守发 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2007年第4期106-109,共4页
根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现... 根据驽巴贝斯虫BC-48基因序列,设计并合成1对特异性引物,建立了驽巴贝斯虫PCR检测方法。试验扩增出610 bp的基因片段,其序列与GenBank上驽巴贝斯虫BC-48基因同源性为96.7%。而对新孢子虫、弓形虫、马巴贝斯虫的基因组DNA没有扩增带出现。对驽巴贝斯虫基因组DNA的最小检测量为2.812 fg/μL。通过对35份临床样品的检测,阳性率为20%。同时与血液涂片染色镜检进行了比较,结果表明,PCR检测方法准确、敏感、特异。 展开更多
关键词 驽巴贝斯虫 bc-48基因 PCR
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驽巴贝斯虫二温式PCR检测方法的建立及初步应用 被引量:7
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作者 张杨 达伊力特 +2 位作者 刘进 李佳 巴音查汗 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2014年第6期16-20,共5页
为了建立一种能快速、特异、敏感地检测马驽巴贝斯虫的方法,根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc-48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环... 为了建立一种能快速、特异、敏感地检测马驽巴贝斯虫的方法,根据GenBank中的驽巴贝斯虫(Babesia caballi)Bc-48基因序列设计了一对特异性引物,建立检测驽巴贝斯虫的二温式PCR方法。该方法能够特异地扩增155bp的片段,与双芽巴贝斯虫、环形泰勒虫、马泰勒虫、瑟氏泰勒虫均无交叉反应,能检测到的最低DNA拷贝数为5.17×102 copies/μL。应用所建立的方法检测了采集于和静县焉耆马匹样品,结果显示,马驽巴贝斯虫感染率为69.51%(57/82),与血液涂片检查结果37.8%(31/82)相比,其检出率更高。表明该二温式PCR检测方法具有较高的特异性和敏感性,可用于马驽巴贝斯虫病的早期诊断。 展开更多
关键词 马驽巴贝斯虫 bc-48 基因 样品检测
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杜氏肌营养不良症(DMD)的植入前遗传学诊断 被引量:4
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作者 钟昌高 李麓芸 +6 位作者 陆长富 林戈 龚斐 张瞻 廖宏庆 张红 卢光琇 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期2588-2592,共5页
目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴... 目的对杜氏肌营养不良症(duchenne muscular dystrophy,DMD)进行植入前遗传学诊断(preim-plantation genetic diagnosis,PGD),阻断DMD患儿的出生。方法针对患者的DMD基因的48号外显子缺失位点采用巢式PCR分别对患者和携带者的单个淋巴细胞、行体外授精-胚胎移植治疗的健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞进行扩增,建立稳定的经单细胞基因诊断DMD的方法。再对在该中心进行超排和体外授精-胚胎移植治疗的DMD携带者的胚胎活检后完成PGD,根据诊断结果选择健康的优质的胚胎移植入子宫。结果携带者的单个淋巴细胞的PCR扩增成功率为90.5%(95/105),健康志愿捐献者的单个卵裂球细胞PCR扩增成功率为85.7%(54/63),假阳性率为0(0/28)。分别对3例DMD携带者施行了植入前遗传学诊断,病例1移植了2枚未受累的优质胚胎,且成功妊娠单胎并已于2005年4月分娩了1个健康的女婴;病例2移植了2枚优良胚胎,不幸的是未能妊娠。病例3诊断为未受累的仅有的2枚胚胎因胚胎质量差而未能移植。结论该组采用的方案可对DMD基因的48号外显子缺失突变的DMD家庭进行PGD,达到了阻断DMD患儿出生的目的。 展开更多
关键词 杜氏肌营养不良症 单细胞巢式PCR 植入前遗传学诊断 DMD基因48号外显子缺失
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理脾调脂胶囊对血脂失调症大鼠及ApoE基因敲除小鼠PPARs mRNA的调控作用 被引量:2
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作者 刘桂荣 闫滨 +1 位作者 闫石 刘非 《中国中西医结合杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期663-666,共4页
目的研究理脾调脂胶囊对血脂失调症大鼠及ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠PPARα、γmRNA的调控作用,探讨其调节脂质代谢的作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、理脾调脂胶囊治疗组(理脾调脂组)、血脂康对照组(血脂康组),... 目的研究理脾调脂胶囊对血脂失调症大鼠及ApoE基因敲除(ApoE-/-)小鼠PPARα、γmRNA的调控作用,探讨其调节脂质代谢的作用机制。方法 48只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、理脾调脂胶囊治疗组(理脾调脂组)、血脂康对照组(血脂康组),造模4周,将ApoE-/-小鼠30只随机分为空白组、血脂康组、理脾调脂组。理脾调脂组大鼠、ApoE-/-小鼠(以下简称大、小鼠)每日灌胃理脾调脂胶囊,血脂康组每日灌胃血脂康,用药8周。酶法测定大、小鼠血清总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)浓度,沉淀法测定大、小鼠血清高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C);内参照模板法荧光定量PCR检测大、小鼠肝脏PPARα、γmRNA的表达。结果理脾调脂组大、小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度较模型组、空白组显著降低(P<0.01),HDL-C浓度显著提高(P<0.01),大、小鼠PPARα、γmRNA表达较模型组(或空白组)显著提高(P<0.01);与血脂康组比较,理脾调脂组大、小鼠血清TC、TG、LDL-C浓度均降低(P<0.05),HDL-C浓度均显著提高(P<0.01,P<0.05),PPARα、γmRNA表达明显提高(P<0.05)。结论理脾调脂胶囊能显著提高实验性血脂失调症大、小鼠肝脏PPARα、γmRNA的表达,具有调控核因子而影响血脂代谢的作用。 展开更多
关键词 理脾调脂胶囊 血脂康 血脂失调症 过氧化物酶体增殖物激活受体 大鼠及ApoE^-/-鼠
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瘤胃细菌GH48家族糖苷水解酶基因多样性 被引量:2
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作者 李劲亭 苏小运 +4 位作者 田彦 董志扬 胡松年 黄力 戴欣 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期53-61,共9页
【目的】了解瘤胃细菌第48家族糖苷水解酶基因(GH48)多样性,为木质纤维素高效降解提供新的基因资源。【方法】通过基因序列比对,设计gh48的简并引物;同时提取两个瘤胃样品的总DNA和总RNA,并将总RNA逆转录成cDNA。以总DNA和cDNA为模板,通... 【目的】了解瘤胃细菌第48家族糖苷水解酶基因(GH48)多样性,为木质纤维素高效降解提供新的基因资源。【方法】通过基因序列比对,设计gh48的简并引物;同时提取两个瘤胃样品的总DNA和总RNA,并将总RNA逆转录成cDNA。以总DNA和cDNA为模板,通过PCR扩增分别建立克隆文库并对克隆文库进行测序;对所得序列进行out种类划分和聚类分析。【结果】本研究共得到了455条编码GH48家族蛋白的基因序列,核苷酸序列之间的相似性为58.65%-100%。对序列的进一步分析表明,89%可以作为区分其种类的界定标准。以此为依据确定所得到的基因序列分别编码66种不同的GH48家族蛋白,分别聚为5个相对独立的类群,其中新类群C中OTU65所代表的序列是cDNA克隆文库中的优势序列,分别占两个cDNA克隆文库的36.4%和19.5%。我们的结果揭示瘤胃细菌gh48基因具有丰富的多样性,同时,其中也存在优势表达的GH48家族蛋白。 展开更多
关键词 瘤胃细菌 木质纤维素降解 GH48 糖苷水解酶 多样性
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48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应 被引量:3
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作者 廖丹 徐云飞 +1 位作者 孟莎莎 周卫辉 《基因组学与应用生物学》 CAS CSCD 北大核心 2018年第9期3792-3798,共7页
为了研究48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应以及寻找可能消除边缘效应的方法措施。本研究用常规方法培养人胚肾细胞HEK293,运用脂质体转染试剂Lipofectamin 2000将荧光素酶报告基因质粒p GL4.13Z和内参质粒p RL-TK共转染入48孔板中的H... 为了研究48孔板荧光素酶报告基因实验边缘效应以及寻找可能消除边缘效应的方法措施。本研究用常规方法培养人胚肾细胞HEK293,运用脂质体转染试剂Lipofectamin 2000将荧光素酶报告基因质粒p GL4.13Z和内参质粒p RL-TK共转染入48孔板中的HEK 293细胞。转染后24 h用荧光素酶报告基因实验检测试剂测量细胞的荧光素酶活性,比较角落孔、边缘孔以及中间孔测定值的差异,以及内参照海肾荧光素酶活性校准后的差值,并通过细胞计数来观察此种差异是否与细胞数目和转染效率相关。在此基础上,寻找可能减小边缘效应的方法,如细胞种植入48孔板后将其室温静置、48孔板重叠、放弃使用边缘孔。运用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验存在边缘效应,边缘孔与中间孔的荧光素酶活性测定值有显著的差异且有统计学意义(p〈0.05),而边缘效应的产生与细胞数目和转染效率无明显关联。细胞种植入48孔板后将其室温静置1.5 h、或重叠一个48孔板以及空置边缘孔都不能减弱边缘效应;然而将48孔板四周边缘孔填充液体(磷酸盐缓冲液(1*PBS),水),可以削弱边缘效应。用48孔细胞培养板进行荧光素酶报告基因实验会产生边缘效应,并可能造成对实验结果的误判;48孔板四周边缘孔填充相应的液体可以削弱边缘效应。 展开更多
关键词 荧光素酶报告基因实验 边缘效应 48孔板
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