硫氧还蛋白1对胃癌细胞系BCG823生长的影响

目的探讨硫氧还蛋白1(thioredoxin-1,Trx1)对胃癌细胞系细胞周期及增殖速度的影响。方法对BCG823、AGS、MNK45、NUGC3、PHM82五种胃癌细胞系的质粒转染效率进行测定,选择出转染效率高的细胞系;并用实时PCR(RT-PCR)测定胃癌细胞系中Trx1的表达水平,选择出表达较低的细胞系。将所构建的Trx1真核重组表达载体pcDNA3.1myc-His-Trx1转染入上述实验筛选出的胃癌细胞系,使细胞中Trx1过表达,用流式细胞仪检测过表达Trx1的胃癌细胞进入S期的比例。结果 BCG823、AGS两种细胞系的转染效率高,满足实验需要。BCG823的Trx1表达较AGS低[BCG823细胞系的ΔCT(Trx-GAPDH)=1.43,AGS细胞系的ΔCT(Trx-GAPDH)=1.10,ΔCT值与表达量成反比],选择BCG823作为实验对象。转染pcDNA3.1myc-His-Trx1的细胞Trx1表达升高(与内参蛋白的比值为0.45±0.02和0.26±0.03,n=3,t=9.127,P=0.000),进入S期的细胞比例升高(转染带有Trx1质粒的细胞进入S期的比例为28.54%,而转染了空载体者进入S期的比例为22.24%,χ2=104.759,P=0.000)。结论 Trx1表达水平上调可以促进胃癌细胞进入S期。

涤痰荡瘤汤调节ERK2/ETS1/MMP9通路抑制裸鼠胃癌移植瘤生长

目的探讨涤痰荡瘤汤对人胃癌细胞裸鼠胃原位移植瘤的抑瘤作用及其对microRNA-506-3p和胞外信号调节激酶2(ERK2)/E26转录因子1(ETS1)/基质金属蛋白酶9(MMP9)信号通路的影响。方法培养人胃癌细胞系MKN45、BCG823并分别构建人胃癌细胞裸鼠原位移植瘤模型,两种模型均随机分为中药组(涤痰荡瘤汤)、西药组(5-FU)、空白组(生理盐水)。饲养6周后处死荷瘤鼠剥离瘤体称重计算抑瘤率,并观察肿瘤转移情况。qPCR和Western blot分别检测各组肿瘤组织中microRNA-506-3p、ETS1、ERK2、MMP9的mRNA及蛋白表达。结果MKN45肿瘤组织中,中药组和西药组抑瘤率分别为45.1%和60.4%,BCG823肿瘤组织中,中药组和西药组抑瘤率分别为51.1%和66.6%。qPCR检测结果显示:在MKN45、BCG823移植瘤中,与空白组比较,中药组和西药组microRNA-506-3p表达上调(P均<0.01),ERK2、ETS1表达均降低(P均<0.01);与西药组比较,中药组microRNA-506-3p表达降低(P<0.01),ERK2、ETS1表达升高(P均<0.01);在MKN45移植瘤中三组MMP9的表达差异无统计学意义(P>0.05),在BCG823移植瘤中,西药组和中药组均低于空白组,且西药组低于中药组(P均<0.01)。Western blot检测结果显示:在MKN45、BCG823移植瘤中,与空白组比较,中药组和西药组中ERK2、ETS1及MMP9表达降低(P均<0.01),中药组ERK2、ETS1及MMP9表达高于西药组(P均<0.01)。结论涤痰荡瘤汤能抑制人胃癌细胞裸鼠胃原位移植瘤增殖,其机制可能通过上调microRNA-506-3p从而下调ERK2、ETS1、MMP9表达而起效。