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叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞ES-D3中miR-302a、Bcl2L11表达观察及其靶向关系预测和验证 被引量:2
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作者 梁燕 曹丁丁 +2 位作者 李媛媛 刘卓 吴建新 《山东医药》 CAS 2020年第30期40-44,共5页
目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)... 目的观察叶酸缺乏的小鼠胚胎干细胞系ES-D3中微小RNA302a(miR-302a)、Bcl2L11的表达变化,并对miR-302a与Bcl2L11的靶向关系进行预测和验证。方法取适量ES-D3细胞,置于缺乏叶酸的培养液中培养,分别于培养0、24、48、72 h(A、B、C、D组)时收集细胞,实时荧光定量PCR法检测miR-302a、Bcl2L11 mRNA,Western blotting法检测细胞Bcl2L11蛋白(BimEL、BimL及BimS蛋白)。生物信息学软件预测Bcl2L11与miR-302a的靶向结合位点。以小鼠3T3细胞基因组DNA为模板,设计3’UTR扩增引物,PCR扩增基因的3’UTR序列,将其克隆到pmiR-RB-REPORT双荧光素酶报告载体中,构建Bcl2L11-3’UTR野生载体;设计突变引物将靶标序列突变,构建突变载体,miRNA-302a mimics及Negative Control分别与Bcl2L113’UTR双报告基因野生载体及突变载体共转染,分别为1组(Bcl2L113’UTR野生型载体+Negative Control)、2组(Bcl2L113’UTR野生型载体+miR-302a mimics)、3组(Bcl2L113’UTR突变型载体+Negative Control)、4组(Bcl2L113’UTR突变型载体+miR-302a mimics),转染后测算各组报告基因hRluc的相对荧光值,验证miR-302a与Bcl2L11是否存在相互作用。结果A、B、C、D组细胞miR-302a相对表达量分别为1.00±0.20、0.65±0.32、0.50±0.22、0.43±0.24,与A组比较,D组miR-302a相对表达量下降(P<0.05);A、B、C、D组细胞Bcl2L11 mRNA相对表达量分别为1.00±0.00、1.22±0.19、1.82±0.37、3.49±0.45,与A组比较,D组Bcl2L11 mRNA相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimEL相对表达量分别为0.86±0.02、0.87±0.03、0.92±0.02、1.10±0.06,与A组比较,C、D组BimEL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimL相对表达量分别为0、0.09±0.02、0.16±0.04、0.26±0.03,与A组比较,B、C、D组BimL相对表达量升高(P<0.05);A、B、C、D组细胞BimS相对表达量分别为0、0、0.11±0.04、0.18±0.04,与A组比较,C、D组BimS相对表达量升高(P<0.05)。miR-302a和Bcl2L11存在相互作用。1、2、3、4组报告基因hRluc的相对荧光值分别为1.00±0.07、0.64±0.02、1.00±0.03、0.95±0.06,与其他组比较,2组相对荧光值降低(P<0.05)。结论叶酸缺乏的ES-D3细胞中miR-302a表达下调、Bcl2L11 mRNA及蛋白表达上调。miR-302a与Bcl2L11基因有较强的相互作用,胚胎干细胞凋亡过程中Bcl2L11为miR-302a的靶基因。 展开更多
关键词 微小RNA 微小RNA302a 凋亡调节蛋白 bcl2l11基因 叶酸缺乏 胚胎干细胞 细胞凋亡 胚胎发育
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miR-221-3p靶向BCL2L11调控小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡 被引量:7
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作者 刘玉芳 陈玉林 +1 位作者 周祖阳 储明星 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1868-1876,共9页
【目的】BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡,同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗,文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响,为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和... 【目的】BCL2L11在哺乳动物中能够促进多种细胞凋亡,同时参与繁殖性状相关组织器官的发育及疾病治疗,文章利用分子生物学方法探究miR-221-3p靶向调控BCL2L11对小尾寒羊卵泡颗粒细胞凋亡的影响,为进一步研究BCL2L11在卵泡颗粒细胞凋亡和卵泡闭锁过程中的调控作用提供依据。【方法】在前期课题组卵巢组织全转录组测序分析的基础上,获得了候选基因BCL2L11及其调控元件miR-221-3p,利用半定量和组织荧光定量(RT-qPCR)分析BCL2L11在小尾寒羊不同组织中的表达情况;通过RT-qPCR定量试验在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中鉴定了BCL2L11及miRNA-221-3p的表达情况;构建BCL2L11 3’UTR野生型和突变型载体,在HEK293T细胞中共转染miR-221-3p mimic和BCL2L11野生型和突变型及阴性对照,采用双荧光素酶报告基因检测系统确定miR-221-3p与BCL2L11靶向性关系;在绵羊卵巢原代颗粒细胞中转染miR-221-3p mimic及阴性对照实现miR-221-3p过表达,使用RT-qPCR技术在mRNA水平上检测miR-221-3p对BCL2L11以及卵巢颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas表达水平的影响;同时利用EdU试验分析miR-221-3p过表达和阴性对照组中颗粒细胞的增殖变化。【结果】半定量和组织RT-qPCR分析均表明BCL2L11在卵巢组织中表达量高于其他组织;RT-qPCR定量结果显示miR-221-3p和BCL2L11在小尾寒羊卵泡期和黄体期卵巢组织中差异表达,miR-221-3p在卵泡期卵巢中的表达量高于黄体期,而BCL2L11在卵泡期卵巢中的表达量低于黄体期,表现出负调控的现象;双荧光素酶报告基因验证分析显示,过表达miR-221-3p mimic显著抑制了BCL2L11 3’UTR荧光素酶的活性(P<0.05),阴性对照组则没有显著影响;过表达miR-221-3p,靶基因BCL2L11 mRNA表达水平显著降低,同时,卵泡颗粒细胞凋亡标志基因XIAP和Fas的表达量也显著降低(P<0.05);EdU试验分析显示,过表达miR-221-3p的颗粒细胞增殖率为18.9%,极显著高于阴性对照组的10.43%(P<0.01)。【结论】BCL2L11和miR-221-3p是调控绵羊卵巢发育的重要基因及调控元件,BCL2L11是miR-221-3p的靶基因之一,miR-221-3p过表达可抑制颗粒细胞凋亡,该作用结果可能通过抑制靶基因BCL2L11的表达进而影响了绵羊卵巢颗粒细胞的凋亡。 展开更多
关键词 miR-221-3p 小尾寒羊 卵巢颗粒细胞凋亡 bcl2l11
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miR-25通过靶向BCL2L11在脓毒症致AKI细胞模型中发挥保护性作用 被引量:2
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作者 吴斌 王美堂 《西南国防医药》 CAS 2021年第4期282-286,共5页
目的研究微小RNA(microRNA,miR)-25对脂多糖(LPS)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理HK-2细胞建立脓毒症致AKI的体外细胞模型,检测miR-25的表达水平。分别转染miR... 目的研究微小RNA(microRNA,miR)-25对脂多糖(LPS)诱导人肾小管上皮细胞(HK-2)增殖、凋亡和炎症的影响及作用机制。方法用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)处理HK-2细胞建立脓毒症致AKI的体外细胞模型,检测miR-25的表达水平。分别转染miR-25模拟物(mimic)及抑制剂(inhibitor),观察LPS诱导HK-2细胞损伤时,miR-25对细胞活性、炎症反应和凋亡的作用。双荧光素酶报告系统检测miR-25和BCL2L11的靶向关系,并通过将BCL2L11过表达质粒和miR-25 mimic共转染后进行LPS诱导处理,验证BCL2L11对miR-25减轻LPS诱导HK-2细胞损伤的逆转作用。结果实验发现经LPS诱导HK-2细胞中miR-25表达水平下调(P<0.05);过表达miR-25可提高LPS刺激后HK-2细胞的活性(P<0.05),降低凋亡因子Bax的表达(P<0.05),抑制剪切的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)和cleaved Caspase-9的活化(P<0.05),并可上调BCL-2抗凋亡蛋白的表达,另外还可减少炎性细胞因子的表达(P<0.05)。此外,荧光素酶报告基因检测发现BCL2L11是miR-25 的直接作用靶点,即 BCL2L11 的表达受 miR-25 的负调控 (P <0.05),另外 BCL2L11 可逆转 miR-25 对 LPS 刺激 HK-2 细胞炎症和凋亡的抑制作用(P<0.05);结论本研究揭示miR-25可能通过靶向BCL2L11在LPS诱导的HK-2细胞中发挥抗炎和抗凋亡作用。 展开更多
关键词 脓毒症 急性肾损伤 miR-25 bcl2l11
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鼻咽癌外泌体miR-20a通过靶向BCL2L11基因抑制肿瘤相关巨噬细胞凋亡 被引量:4
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作者 吕龙辉 黄晓悫 +3 位作者 熊小明 张旭 杨志惠 方红雁 《重庆医学》 CAS 北大核心 2017年第6期721-724,728,共5页
目的探索鼻咽癌外泌体microRNA是否通过靶向凋亡基因而抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)凋亡。方法通过生物信息学方法确定目标microRNA及其靶基因,检测鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体内miR-20a的表达量。应用miR-20a的拟似物及... 目的探索鼻咽癌外泌体microRNA是否通过靶向凋亡基因而抑制肿瘤相关巨噬细胞(TAM)凋亡。方法通过生物信息学方法确定目标microRNA及其靶基因,检测鼻咽癌患者血清及鼻咽癌细胞培养基中的外泌体内miR-20a的表达量。应用miR-20a的拟似物及抑制物转染巨噬细胞;并检测干预后的凋亡指数及凋亡通路相关蛋白。结果 miR-20a在鼻咽癌外泌体中表达显著上调。miR-20a的靶基因为BCL2L11,过表达miR-20a可以抑制巨噬细胞凋亡,且凋亡通路相关蛋白Bim、caspase-9和caspase-3均显著减少(P<0.05)。结论miR-20a通过抑制Bim-caspase-9-caspase-3凋亡途径的活化从而抑制鼻咽癌中TAM凋亡。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 外泌体 miR-20a bcl2l11 巨噬细胞
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Onco-miR-24 regulates cell growth and apoptosis by targeting BCL2L11 in gastric cancer 被引量:12
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作者 Haiyang Zhang Jingjing Duan +14 位作者 Yanjun Qu Ting Deng Rui Liu Le Zhang Ming Bai Jialu Li Tao Ning Shaohua Ge Xia Wang ZhenzhenWang~ Qian Fan Hongli Li Guoguang Ying Dingzhi Huang Yi Ba 《Protein & Cell》 SCIE CAS CSCD 2016年第2期141-151,共11页
Gastric cancer is one of the most common malignancies worldwide; however, the molecular mechanism in tumorigenesis still needs exploration. BCL2L11 belongs to the BCL-2 family, and acts as a central regulator of the i... Gastric cancer is one of the most common malignancies worldwide; however, the molecular mechanism in tumorigenesis still needs exploration. BCL2L11 belongs to the BCL-2 family, and acts as a central regulator of the intrinsic apoptotic cascade and mediates cell apoptosis. Although miRNAs have been reported to be involved in each stage of cancer development, the role of miR-24 in GC has not been reported yet. In the present study, miR- 24 was found to be up-regulated while the expression of BCL2L11 was inhibited in tumor tissues of GC. Studies from both in vitro and in vivo shown that miR-24 regulates BCL2L11 expression by directly binding with 3'UTR of mRNA, thus promoting cell growth, migration while inhibiting cell apoptosis. Therefore, miR-24 is a novel onco-miRNA that can be potential drug targets for future clinical use. 展开更多
关键词 gastric cancer bcl2l11 miR-24 tumorigenesis cell apoptosis PROLIFERATION MIGRATION
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microRNA-181c-5p抑制Bcl2L11/Bim减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭 被引量:1
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作者 蔡溪巍 王秋野 +1 位作者 孙世忠 王沈峰 《解剖科学进展》 CAS 2021年第1期61-64,共4页
目的探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组。采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多... 目的探讨MicroRNA-181c-5p(miR-181c-5p)对压力超负荷诱导(TAC)的心力衰竭的作用机制。方法 30只雄性C57BL/6小鼠随机分成对照组、TAC组和TAC+miR-181c-5p组。采用主动脉弓缩窄诱导小鼠心力衰竭动物模型,造模过程中,对模型组小鼠心肌多点注射给予5×10^(6) U/10μL过表达miR-181c-5p慢病毒载体,实验第4周处死所有小鼠,收集心脏组织标本。采用HE染色观察组病理学改变;Masson染色观察胶原纤维沉积;TUNEL检测观察心肌组织凋亡;实时定量PCR和Western blot技术检测心肌组织miR-181c-5p表达及凋亡蛋白表达。结果 miR-181c-5p在TAC诱导的心力衰竭心肌组织中表达下调。miR-181c-5p过表达减轻心肌炎症细胞浸润和纤维化、降低心肌细胞凋亡和靶向抑制Bcl-2家族的促凋亡基因Bcl2L11/Bim的mRNA和蛋白表达。结论 miR-181c-5p通过抑制Bcl2L11/Bim表达减轻压力超负荷诱导的小鼠心力衰竭。 展开更多
关键词 微小RNA-181c-5p 心力衰竭 凋亡 Bcl2样11(bcl2l11)基因 雄性C57BL/6小鼠
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基于微小RNA-30b-5p/B细胞淋巴瘤2样11轴分析滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病大鼠肺功能的影响及机制
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作者 付桃利 李小平 +4 位作者 田辉 荣辉 艾萍 王进军 黄雨威 《河北中医》 2024年第9期1493-1500,共8页
目的基于微小RNA-30b-5p/B细胞淋巴瘤2样11轴(miR-30b-5p/BCL2L11轴)分析滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺功能的影响及机制。方法选用84只SPF雄性Wistar大鼠,按照随机数字表法分为7组,即对照组、模型组、滋金补水膏低剂量组... 目的基于微小RNA-30b-5p/B细胞淋巴瘤2样11轴(miR-30b-5p/BCL2L11轴)分析滋金补水膏对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠肺功能的影响及机制。方法选用84只SPF雄性Wistar大鼠,按照随机数字表法分为7组,即对照组、模型组、滋金补水膏低剂量组、滋金补水膏中剂量组、滋金补水膏高剂量组、antagomir NC组、miR-30b-5p antagomir组,每组12只组。除对照组外,其余6组采用气道滴注脂多糖(LPS)联合烟雾暴露构建COPD大鼠模型,建模成功后,各组灌胃、尾静脉注射相应药物,每日1次,连续12周。小动物肺功能检测仪检测各组大鼠肺功能;实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组大鼠肺组织miR-30b-5p mRNA表达;苏木精-伊红(HE)染色法观察各组大鼠肺组织病理损伤情况,并测量肺组织小气道管壁厚度;原位缺口末端标记法(TUNEL)染色观察各组大鼠肺上皮细胞凋亡情况;酶联免疫吸附(ELISA)法检测各组大鼠血清白细胞介素(IL)-8、IL-1β水平;Western blot法检测各组大鼠B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及BCL2L11蛋白表达。双荧光素酶报告实验验证miR-30b-5p和BCL2L11之间的靶向关系。结果与对照组比较,模型组大鼠静息呼吸频率、RI、肺组织小气道管壁厚度、肺上皮细胞凋亡指数、血清IL-8和IL-1β水平及肺组织Bax、BCL2L11蛋白表达水平显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤严重,PIF、C_(dyn)值、肺组织miR-30b-5 p mRNA表达水平和Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);与模型组比较,滋金补水膏低、中、高剂量组大鼠静息呼吸频率、RI、肺组织小气道管壁厚度、肺上皮细胞凋亡指数、血清IL-8和IL-1β水平及肺组织Bax、BCL2L11蛋白表达水平显著降低(P<0.05),肺组织病理损伤减轻,PIF、C_(dyn)值、肺组织miR-30b-5p mRNA表达水平和Bcl-2蛋白表达显著升高(P<0.05),且除滋金补水膏中剂量组静息呼吸频率与滋金补水膏低剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余指标滋金补水膏低、中、高剂量组两两比较差异均有统计学意义(P<0.05);与滋金补水膏高剂量组、antagomir NC组比较,miR-30b-5p antagomir组大鼠静息呼吸频率、RI、肺组织小气道管壁厚度、肺上皮细胞凋亡指数、血清IL-8和IL-1β水平及肺组织Bax、BCL2L11蛋白表达水平显著升高(P<0.05),肺组织病理损伤加重,PIF、C_(dyn)值、肺组织miR-30b-5p mRNA表达水平和Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05),miR-30b-5p antagomir减弱了高剂量的滋金补水膏对COPD大鼠的改善作用。miR-30b-5p靶向负调控BCL2L11表达。结论滋金补水膏可抑制COPD大鼠肺上皮细胞凋亡和炎症反应,改善肺功能,缓解相关症状,其机制可能与促进miR-30b-5p表达、降低BCL2L11表达相关。 展开更多
关键词 肺疾病 阻塞性 慢性病 中药疗法 膏剂 动物实验
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食管癌血浆miR-92a的表达及临床诊疗意义
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作者 徐涛 戴天阳 +2 位作者 何开明 胡智 宋琦 《西南医科大学学报》 2020年第2期130-134,共5页
目的:探讨食管癌血浆miR-92a及其靶基因BCL2L11的表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量qRT-PCR法检测不同临床分期食管癌血浆miR-92a及其靶基因BCL2L11的表达水平,体外转染实验研究过表达和抑制miR-92a对靶基因BCL2L11表达的影响,... 目的:探讨食管癌血浆miR-92a及其靶基因BCL2L11的表达及其临床意义。方法:采用实时荧光定量qRT-PCR法检测不同临床分期食管癌血浆miR-92a及其靶基因BCL2L11的表达水平,体外转染实验研究过表达和抑制miR-92a对靶基因BCL2L11表达的影响,分析食管癌和健康对照者血浆miR-92a表达与食管癌临床病理分期的关系。结果:与健康志愿者血浆中miR-92a的表达相比,食管癌患者血浆中miR-92a呈高表达(P<0.05),并且miR-92a的表达与食管癌的临床分期相关,食管癌临床分期越晚,血浆中miR-92a表达越高(P<0.05)。与健康志愿者血浆中BCL2L11的表达相比,食管癌患者血浆中BCL2L11呈低表达(P<0.05),并且BCL2L11的表达与食管癌的临床分期相关,食管癌临床分期越晚,血浆中BCL2L11表达越低(P<0.05)。通过体外转染实验表明:与对照组相比,转染miR-92a mimic后NCI-H716中miR-92a表达升高(P<0.05),BCL2L11表达下降(P<0.05);与对照组相比,转染miR-92a inhibitor后NCI-H716中miR-92a表达下降(P<0.05),BCL2L11表达升高(P<0.05);血浆miR-92a能够直接靶向负调控靶基因BCL2L11表达,导致血浆BCL2L11表达下调(P<0.05)。miR-92a诊断食管癌的敏感度为82.2%,特异度为85.7%,AUC为0.860。结论:食管癌血浆中miR-92a表达明显高于正常人,血浆miR-92a的检测可能有助于食管癌的诊疗和预后评估。 展开更多
关键词 食管癌 血浆miR-92a bcl2l11 诊疗标志物
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miR-665靶向BCL 2L11调控武安山羊成肌细胞增殖
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作者 冯婧 盛辉 +5 位作者 张效生 郭晓飞 姚大为 李玉鹏 陈龙宾 张金龙 《畜牧兽医学报》 2025年第2期582-590,共9页
旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL 2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只,各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL 2L11在武安山羊不同组织中的表达情况;利用RT-q... 旨在利用分子生物学方法探究miR-665靶向调控BCL 2L11对山羊成肌细胞增殖的影响。本研究选取1月龄和9月龄的健康山公羊各3只,各年龄段体重均接近且饲养环境相同。本试验通过RT-qPCR分析BCL 2L11在武安山羊不同组织中的表达情况;利用RT-qPCR检测了不同月龄武安山羊背最长肌组织中BCL 2L11和miRNA-665的表达情况;构建了BCL 2L113′UTR野生型和突变型载体,以及miR-665 mimics和对照组,将其共转染到HEK293T细胞,通过使用双荧光素酶报告基因检测系统鉴定了miR-665与BCL 2L11存在靶向性关系。在山羊成肌细胞转染miR-665 mimic及阴性对照,采用RT-qPCR检测了细胞凋亡标志因子XIAP和Fas表达水平,同时利用EdU试验分析miR-665过表达对山羊成肌细胞增殖的影响。结果表明,BCL 2L11在背最长肌组织中高表达;miR-665和BCL 2L11在9月龄和1月龄山羊背最长肌组织中表达情况存在差异,miR-665在1月龄的表达量高于9月龄,而BCL2L11则相反,两者存在负调控现象;通过双荧光素酶报告分析显示,当转染过表达miR-665 mimic后,显著抑制了BCL 2L11荧光素酶的活性,同时靶基因BCL 2L11的mRNA表达水平也明显降低。为进一步验证miR-665的功能,转染miR-665 mimic后发现细胞凋亡标志基因XIAP与Fas的表达量也显著降低;EdU试验分析显示,过表达miR-665后促进了成肌细胞的增殖。综上所述,在山羊背最长肌组织中miR-665作为BCL 2L11的调控元件,能够显著抑制山羊成肌细胞中BCL 2L11的表达水平,当miR-665过表达后,能够促进成肌细胞的增殖情况。 展开更多
关键词 miR-665 BCL 2L11 肌肉 武安山羊 成肌细胞
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