FAK shRNA抑制白血病BCR/ABL-BaF3细胞生长

目的:本实验研究黏着斑激酶(FAK)shRNA对白血病细胞生长的影响。方法:构建FAK shRNA慢病毒载体,转染至BCR/ABL-BaF3白血病细胞株,同时建立空白载体对照细胞株。通过蛋白质印迹方法检测FAK等蛋白表达情况,体外观察白血病细胞在RPMI-1640完全培养基生长以及在甲基纤维素半固体培养基集落形成。将BCR/ABL-BaF3经尾静脉注射到BALB/c小鼠体内建立白血病动物模型,观察小鼠生存情况,分析白血病细胞在小鼠脾脏的分布情况。结果:FAK shRNA能有效沉默FAK基因表达,降低STAT5蛋白磷酸化水平,并引起caspases-3活化。体外实验发现FAK shRNA能明显抑制白血病细胞生长。集落形成实验中,空白载体对照组与FAK shRNA组中细胞集落数量分别为215.60±13.01和125.00±9.06,2组差异显著(P<0.01)。白血病动物实验发现空白载体对照组小鼠生存时间是21-27 d,而FAK基因沉默组小鼠生存时间是52-60 d,2组差异显著(P<0.05)。白血病输注后第25 d,空白载体对照组与FAK shRNA组小鼠脾脏中白血病细胞所占百分比分别为(82.40±6.13)%和(14.50±3.70)%,2组差异显著(P<0.01)。结论:体外实验及动物体内实验均证实FAKshRNA能明显抑制白血病细胞生长,提示FAK基因沉默有望成为白血病治疗的新策略。

温热处理对K562细胞系bcr/abl融合基因mRNA转录和Caspase-3表达的影响

目的观察不同温度刺激对K562细胞bcr/abl融合基因mRNA转录和Caspase-3蛋白表达的影响。方法将培养获得的K562细胞分别进行40℃、43℃、46℃恒温刺激30min,以37℃作为对照;RT-PCR技术检测bcr/abl融合基因mRNA的转录,Westernbloting技术检测Caspase-3的表达。结果K562细胞热刺激30min后,bcr/abl融合基因mRNA的转录随温度升高而下调,Caspase-3的表达随温度升高而上调。结论温热刺激可降低K562细胞内bcr/abl融合基因mRNA的转录,提高Caspase-3的表达。

三氧化二砷对慢性粒细胞白血病细胞系的作用(英文)

本研究探讨三氧化二砷 (As2 O3)对两种慢性粒细胞白血病 (CML)细胞系有无作用及作用机制。实验选用了两种不同的CML细胞系KU81 2和MEG 0 1及两种其它白血病细胞系U937和PL2 1 ,加入不同浓度的As2 O3(0 .2 ,2和 1 0 μmol/L) ,在不同时间计数活细胞数 ,观察细胞形态 ,并以TUNEL法和DNA凝胶电泳检测细胞有无凋亡的发生 ;同时检测 0 .2 μmol/LAs2 O3作用时细胞表面CD34 ,CD1 3 ,CD33 ,CD1 9,CD1 1b ,CD1 4和CD7的变化 ,并通过RT PCR检测细胞bcr abl水平及caspase 3的变化。研究结果发现 ,不同浓度的As2 O3对 4种细胞系的作用不同 ,1 0 μmol/L时 4种细胞系均会发生细胞凋亡 ,2 μmol/L时则仅CML细胞系KU81 2和MEG 0 1会产生凋亡 ,0 .2μmol/L时 4种细胞系均不发生凋亡。在培养 2 4小时后 ,4种细胞系表面的CD34 ,CD1 3 ,CD33 ,CD1 9,CD1 1b ,CD1 4和CD7等均无明显改变。RT PCR检测bcr abl的水平发现在 2种CML细胞系中无明显改变 ,其caspase 3的活性较对照细胞均有所增加。结论 :As2 O3在较高浓度下可诱导 4种白血病细胞系产生凋亡 ,在 2 μmol/L仅可诱导CML来源的两种细胞系产生凋亡 ,CML细胞系对As2 O3较其它两种细胞系敏感 ,其作用机制与caspase