乳腺癌耐药蛋白BCRP在肿瘤化疗耐药中的研究进展乳腺癌耐药蛋白BCRP在肿瘤化疗耐药中的研究进展

ABCG2(三磷酸腺苷(ATP)结合转运蛋白G超家族成员2)是ABC转运体(三磷酸腺苷结合盒转运体)超家族中的一员,因其介导肿瘤药物的化疗耐药中而为人们所熟知。自1998年克隆出ABC转运体家族的多药耐药蛋白(ABCG2/BCRP)后,有关于BCRP的研究论文已超过五千多篇。ABC转运体超家族成员均能引起药物耐药。本文主要对ABCG2的结构、功能、与其有关的底物药、抑制剂以及其对肿瘤药物耐药作用进行综述。

BCRP和Ki-67与乳腺癌新辅助化疗疗效的关系

目的:探讨乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)和Ki-67的表达与新辅助化疗疗效之间的关系。方法:回顾性分析我科2012年10月至2014年8月收治的Ⅱ-Ⅲ期乳腺癌新辅助化疗患者65例,采用免疫组化方法检测BCRP和Ki-67的表达,分析BCRP、Ki-67的表达水平与新辅助化疗疗效的关系。结果:原发性乳腺癌组织中BCRP的阳性表达率为67.7%。BCRP的表达水平与新辅助化疗后病理组织学反应有关,组织学显著反应组(病理反应4~5级)BCRP的表达水平明显低于非显著反应组(病理反应1~3级),差异有统计学意义(χ~2=12.77,P=0.001)。化疗前Ki-67高表达组临床缓解率明显高于低表达组(χ~2=17.72,P<0.00)。结论:联合检测乳腺癌组织中BCRP和Ki-67的表达水平对新辅助化疗疗效有一定的预测价值。

MDR1、BCRP和LRP基因在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨多药耐药基因(MDR1)、乳腺癌耐药蛋白(BCRP)及肺耐药蛋白(LRP)mRNA在乳腺癌组织中的表达及其相互关系,分析它们与乳腺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR方法检测2007年1月至2007年12月在宁夏医科大学附属医院手术切除的42例乳腺癌组织、42例癌旁组织及50例乳腺良性病变中MDR1、BCRP和LRP mRNA的表达。结果乳腺癌组织中MDR1、BCRP、LRP mRNA的阳性表达率分别为40.47%、38.09%及61.90%,与癌旁组织及乳腺良性病变组织相比阳性表达率均有统计学差异(P<0.05)。MDR1mRNA表达与绝经状况呈完全正相关(r=0.398,P<0.01),与腋窝淋巴结状况呈完全正相关(r=0.398,P<0.01);BCRP mRNA表达与腋窝淋巴结状况呈正相关(r=0.355,P<0.05);LRP mRNA表达与绝经状况、年龄、腋窝淋巴结状况及肿瘤大小之间均无相关性(P>0.05);MDR1mRNA和BCRP mRNA表达呈正相关(r=0.652,P<0.01),LRP mRNA与MDR1mRNA表达无相关性(r=0.147,P>0.05);LRP mRNA和BCRP mRNA表达无相关性(r=0.111,P>0.05)。2个耐药基因共表达率为47.61%,2种或3种耐药基因共表达率为61.89%。结论乳腺癌组织中存在耐药基因MDR1、BCRP和LRP的表达,单基因和多基因协同作用,以多基因共表达为主;检测MDR1和BCRP基因表达水平可辅助临床判断乳腺癌患者的预后。

MCF-7/BCRP细胞系的建立及其生物学特征

目的:建立表达乳腺癌耐药蛋白(BCRP)的耐药细胞系MCF-7/BCRP。方法:提取MCF-7细胞的总RNA,设计BCRP基因上下游引物,用RT-PCR法克隆出BCRP基因全长并连接到真核表达载体pcDNA3.1穴-雪上,转染MCF-7细胞后以G418筛选细胞。采用米托蒽醌外排实验、细胞毒性实验、细胞群体倍增时间、免疫荧光法鉴定构建的耐药细胞系。结果:MCF-7/BCRP对米托蒽醌耐药指数增加至14.72;外排米托蒽醌的作用增强;细胞群体倍增时间较亲代细胞延长;MCF-7/BCRP细胞能表达一定量的BCRP。结论:MCF-7/BCRP细胞能够表达BCRP并具有BCRP的耐药表型。

ABCG2/Bcrp1转运蛋白:侧群干细胞的表型标记与功能调控蛋白

在骨髓、骨骼肌及神经组织均发现侧群干细胞 (SPSCs)。ABC转运蛋白ABCG2 /Bcrp1基因在不同来源侧群 (SP)干细胞均呈高表达 ,且该基因表达与SP细胞表型密切相关。SP细胞能向不同类型或不同胚层的组织细胞分化 ,很可能代表了一群更原始的干细胞 ,且与干细胞可塑性相关。而ABCG2 /Bcrp1在造血及神经等组织来源的SP干细胞中的特异表达 ,使得该转运蛋白成为从不同组织中分选多潜能干细胞的一种新的表型标记。

顺铂诱导耐药蛋白BCRP与EHD2表达上调并在细胞表面的富集

目的:建立顺铂耐受的人肺腺癌A549/DDP细胞株,研究EHD2(EH domain-containing protein-2)与肿瘤细胞药物耐受的潜在关系。方法:以DDP为诱导剂,采用低浓度逐步增量诱导方法建立人肺癌耐药细胞系A549/DDP,采用MTT法测定药物敏感性,免疫印迹法检测耐药蛋白BCRP及EHD2蛋白的表达水平,免疫荧光方法检测BCRP及EHD2的细胞定位。结果:成功建立DDP耐药细胞系A549/DDP,对DDP的耐药指数为7.6;免疫印迹结果显示BCRP在耐药细胞系A549/DDP中的表达明显高于其亲本细胞A549,EHD2蛋白在耐药细胞系的表达略有增高;免疫荧光成像显示EHD2蛋白在细胞膜表面富集,并与BCRP耐药蛋白共定位。结论:BCRP和EHD2在获得性耐药细胞中富集,并于细胞膜表面共定位,提示内吞蛋白EHD2可能调控耐药蛋白BCRP的膜稳定性,从而介导肿瘤细胞耐药。

BCRP/ABCG2的结构功能及相关抑制剂研究

化学治疗是临床上治疗癌症的一种主要方式。研究发现多重耐药菌（multi—drug resistance，MDR）主要是由一类被称为ABC转运蛋白超家族（ATP binding cassette transporters）的膜蛋白所引起的，它们能够利用ATP水解提供的能量将化学治疗药物排出细胞外，导致肿瘤细胞呈现抗药性。

BCRP基因在非小细胞肺癌组织和非癌肺组织中的表达及意义

目的：进一步研究从人类乳腺癌细胞株 (MCF-7/AdrVp)中克隆出的、对蒽环类抗癌药耐药的 BCRP基因在非癌肺组织及非小细胞肺癌组织中的表达。方法：从术后即刻获得的正常肺组织和有活力的非小细胞肺癌组织新鲜标本中及时提取细胞总 RNA，通过 RT-PCR及 PCR法获得并扩增 BCRP基因的 cDNA产物，再经凝胶电泳分离 BCRP基因 cDNA带，然后再通过转膜技术把这些 BCRP基因 cDNA产物转移到杂交膜上，用 Southern blot杂交技术检测 BCRP基因的表达程度。结果：细胞总 RNA分别从 8个只有肺癌组织标本和 12对同时获取的肺癌组织及非癌肺组织标本中成功提取，然后用变性凝胶电泳鉴定提取 RNA的质量。其中 4例标本因术中缺血时间太长，或有坏死炎症或术前放化疗等原因，所提 RNA有降解而放弃进一步的检测。通过 RT-PCR及 PCR方法从 16例可用标本中获得并扩增 BCRP基因的 cDNA产物，再通过转膜及 Southern blot杂交技术，最终发现 BCRP基因在正常肺组织中均有不同程度的表达（ 10/10），而在非小细胞肺癌组织标本中只有一半病人的标本有不同程度的表达 (8/16)。结论： BCRP基因可能是一个在非癌肺组织中常规表达的基因，而在部分病人的肺癌组织中可能此基因有缺失或被抑制。因此。

非小细胞肺癌组织BCRP、LUNX mRNA表达变化及意义

目的观察非小细胞肺癌(NSCLC)组织中乳腺癌耐药蛋白(BCRP)、肺组织特异度蛋白X(LUNX)mRNA表达变化,并探讨二者在NSCLC诊断、疾病进展评估及预后判断中的作用。方法选取NSCLC组织54例份作为观察组,正常肺组织24例份作为对照组。采用实时荧光定量PCR法检测两组组织BCRP、LUNX mRNA相对表达量,分析观察组中二者的相关性及其在NSCLC诊断中的价值。比较观察组不同临床病理参数患者癌组织中的BCRP、LUNX mRNA相对表达量,随访并比较BCRP、LUNX高低表达患者的中位生存时间。结果观察组与对照组BCRP mRNA相对表达量分别为0.60±0.27、0.19±0.09,LUNX mRNA相对表达量分别为12.94±2.10、9.41±4.25;两组比较P均<0.05。观察组BCRP、LUNX mRNA相对表达量呈正相关关系(r=0.426,P<0.01)。BCRP、LUNX联合诊断NSCLC的曲线下面积(AUC)为0.824,均高于LUNX、BCRP单独诊断的0.792、0.761,联合诊断的灵敏度为70.37%、特异度为83.33%。观察组中、低分化者BCRP mRNA相对表达量低于高分化者(P<0.05);观察组不同性别、年龄、组织学分型、临床分期、分化程度、淋巴结转移者的BCRP、LUNX mRNA相对表达量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。BCRP、LUNX高表达患者的中位生存时间均短于低表达患者(P均<0.05)。结论 NSCLC组织中BCRP、LUNX表达均升高,且BCRP高表达与肿瘤分化程度有关,二者联合检测有助于NSCLC患者的诊断和预后判断。

c-erbB-2与BCRP在脑胶质瘤中的表达及与临床分期的关系

目的探讨脑胶质瘤患者组织中原癌基因c-erbB-2、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)的表达及临床意义。方法选择2016年6月年至2017年8月在我院手术切除的脑胶质瘤标本62例作为观察组,另选同期颅脑外伤的正常脑组织12例为对照组。应用免疫组织化学SP法检测两组标本中的c-erbB-2和BCRP的阳性率表达,分析与患者临床病理特征的关系。结果观察组c-erbB-2、BCRP阳性表达率分别为41.94%(26/62)和46.77%(29/62),均明显高于对照组;脑胶质瘤组织c-erbB-2、BCRP阳性率与患者病理分期、分化程度具有关联性,病理分期越高,c-erbB-2和BCRP阳性率越高;而分化程度越低,c-erbB-2和BCRP阳性表达率越高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论脑胶质瘤组织中c-erbB-2和BCRP均呈高表达,其表达水平与患者病理分期呈正相关。

球虫感染对蛋鸡肝脏和肠道mdr_1、mrp_2和bcrp mRNA表达水平的影响

为探索球虫感染对蛋鸡肝脏和肠道组织中多药耐药蛋白基因(mdr1)、多药耐药相关蛋白基因(mrp2)和乳腺癌耐药蛋白基因(bcrp)mRNA表达的影响,采用荧光定量PCR方法,以β-actin为内参,对球虫感染蛋鸡以及健康蛋鸡的肝脏、十二指肠、空肠、回肠中的mdr1和mrp2及bcrp mRNA进行相对定量测定。结果表明:与健康对照鸡比较,球虫感染导致mdr1 mR-NA表达水平在十二指肠中有显著上调(P=0.043),而在其他组织中mRNA表达水平均无显著差异(P>0.05);mrp2 mR-NA表达水平在健康和球虫感染蛋鸡的肝脏及肠道中均无显著差异(P>0.05);bcrp mRNA表达在肝脏(P=0.021)、回肠(P=0.021)、空肠(P=0.021)中均出现显著性下调,在十二指肠中则变化不显著。结论:球虫感染可使蛋鸡组织中的部分ABC(ATP-binding cassette)转运子的mRNA表达水平发生变化,但是不同基因在不同组织的变化趋势不同。提示:疾病期间用药可能会对药物的吸收和排泄有影响。

宫颈癌Hela细胞株中Bcrp1^+表型细胞的侵袭力

目的探讨Bcrp1+宫颈癌Hela细胞的侵袭及转移能力。方法采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选HeLa细胞系中Bcrp1+表型细胞,并利用Boden小室侵袭试验检测两组Bcrp1+表型及Bcrp1-表型细胞的侵袭能力。结果 Hela细胞系中存在Bcrp1+细胞,比例为7.1%。Bcrp1+表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为99±14.2,侵袭深度为(365.61±52.32)μm;Bcrp1-表型组侵袭过人工基底膜的细胞数为57±13.3,侵袭深度(301.04±53.81)μm。Bcrp1+亚群细胞穿透人工基底膜的细胞数及穿透深度均明显强于Bcrp1-亚群,差异有统计学意义(P<0.05)。结论Bcrp1+表型Hela细胞具备较强的侵袭转移能力,其中可能含有宫颈癌干细胞,Bcrp1可能成为宫颈癌干细胞标记物。

MDR1、BCRP、CXCR4在耐药白血病中的表达研究

目的本研究选择与白血病耐药密切相关的MDR1、BCRP及CXCR4为研究对象,在临床病例中进行检测,为指导治疗和判断预后提供临床依据。方法采用荧光定量RT-PCR方法检测白血病化疗耐药、白血病化疗敏感患者及正常人MDR1、BCRP及CXCR4的表达。结果 MDR1、BCRP、CXCR4基因的表达量在耐药组、敏感组及正常对照组间有显著性差异,P<0.05;CXCR4与MDR1基因的表达量有显著正相关性,R值为0.366;BCRP基因的表达量在ALL患者中高于AML患者,P<0.05;MDR1基因的表达量在老年组高于儿童少年组,P<0.05。结论联合检测MDR1、BCRP、CXCR4对于指导白血病治疗和判断预后具有重要意义。

华南地区汉族人群BCRP基因G34A和C421A多态性

目的研究乳腺癌耐药蛋白(BCRP)单核苷酸多态(SNP)G34A和C421A在华南地区汉族人群中的分布,同时比较不同地区人群间BCRP基因型及等位基因频率分布的差异。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法,检测华南地区无亲缘关系的汉族人群BCRP基因G34A和C421A多态性,结合文献比较不同人群间等位基因频率的差异。结果华南地区人群BCRP基因G34A基因型分布频率为:GG基因型267例(39.03%)、GA基因型328例(47.95%)、AA基因型89例(13.02%)。C421A基因型分布频率为:CC基因型288例(45.79%),CA基因型277例(44.04%),AA基因型64例(10.17%)。其基因型频率在东亚、高加索以及非洲人群中的分布存在显著差异(P<0.05)。结论 BCRP基因在华南汉族人群中存在G34A和C421A多态性,其在不同人群中的分布频率存在显著差异。

ABCG2/Bcrp1可能是大鼠气管上皮干细胞的标记物

目的:探索气管上皮干细胞的表面标记物。方法:取2周龄的Wistar大鼠,取出气管环,5-FU损伤12h后,取气管上皮涂片进行增殖细胞核抗原、ABCG2/Bcrp1抗原染色、RT-PCR检测ABCG2/Bcrp1基因表达。结果:5-FU损伤后大鼠气管上皮气管环的上皮全部脱落,残留间隔分布的裸核样细胞,基底膜完整。气管上皮涂片免疫组织化学染色可见PCNA染色阳性的细胞与阴性细胞间隔分布,间接免疫荧光染色可见ABCG2/Bcrp1阳性细胞;RT-PCR检测ABCG2/Bcrp1阳性反应产物与预计长度符合。结论:ABCG2/Bcrp1可以作为气管上皮干细胞的标记,为进一步分离纯化扩增奠定基础。

宫颈癌HeLa细胞中Bcrp1^+、CK17^+及CD44v5^+表型细胞的检测与分离

目的:检测Bcrp1、CK17及CD44v5在宫颈癌HeLa细胞中的表达情况及相互关系,推测该3种抗体成为宫颈癌干细胞标记物的可能。方法:采用免疫荧光标记物流式细胞仪分选并检测HeLa细胞中的CK17+、CD44v5+、Bcrp1+表型细胞;利用免疫细胞化学染色法,检测Bcrp1+及Bcrp1-1两组HeLa细胞中CK17及CD44v5的表达情况。结果:HeLa细胞中存在CD44v5+细胞,所占比例为0.1%,CK17+细胞为0.7%,Bcrp1+细胞为11%;Bcrp1+组HeLa细胞中存在CK17+及CD44v5+细胞,而Bcrp1-组中则无,组间比较差异有显著性(P<0.05)。结论:表达CK17及CD44v5的HeLa细胞同时表达Bcrp1转运蛋白,CK17及CD44v5均有可能成为宫颈癌干细胞的标记物。

初治及复发急性髓细胞白血病患者BCRP基因表达的意义

目的 :探讨急性髓细胞白血病 (AML)患者初治及复发时乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)基因表达与临床耐药及预后的关系。方法 :应用半定量逆转录—聚合酶链反应 (RT PCR) ,以 β2 微球蛋白 ( β2 MG)作内对照 ,检测了 5 1例初治及 1年内复发的 13例AML患者BCRP基因的表达 ,并检测了 15例正常人BCRP基因表达水平 ,将BCRP/ β2 MG≥ 0 4 6定为BCRP阳性。结果 :初治AML患者BCRP阳性率为 39 2 % ,BCRP阴性与BCRP阳性患者的首次完全缓解 (CR1)率分别为 90 3%和 35 0 %(P =0 0 0 0 0 ) ;13例一年内复发的患者BCRP基因表达水平 ( 1 0 6 5± 0 2 2 6 )显著高于初治时表达水平 ( 0 336± 0 2 0 8) (P =0 0 0 0 0 ) ;BCRP基因表达水平在AML的各亚型间无统计学差异。结论 :BCRP基因高表达可以导致临床耐药 ,是AML患者不利的预后因素。

关于乳腺癌耐药蛋白BCRP/ABCG2的研究进展

乳腺癌耐药蛋白是体内重要的跨膜半转运蛋白,是一种依赖ATP酶的半结合转运体,主要负责将内、外源性物质排至细胞外。乳腺癌耐药蛋白在体内分布广泛,胎盘、干细胞、血脑屏障、小肠及肾小管等重要组织中均有表达,是介导肿瘤细胞耐药的重要蛋白,是影响肿瘤药物临床用药个体差异的重要因素之一。本文就乳腺癌耐药蛋白的生理结构、组织分布及对体内药物代谢过程的影响等方面的研究进展作一综述。

BCRP与P-gp在乳腺癌组织中的表达及其意义

目的探讨乳腺癌耐药蛋白与P-gp在乳腺癌组织中的表达特点,及与淋巴结转移的关系。方法采用免疫组化的方法检测P-gp与乳腺癌耐药蛋白在乳腺癌组织中以及正常乳腺组织中的表达情况,并探讨其表达与淋巴结转移的关系。结果 BCRP与P-gp在乳腺癌组织中的阳性表达率均明显高于正常乳腺组织(P<0.01)。在伴有淋巴结转移的乳腺癌组织中BCRP与P-gp的阳性表达率均较不伴有淋巴结转移者为高(P<0.05)。结论 P-gp与BCRP均在乳腺癌组织中有一定程度的表达,且与有无淋巴结转移有关,二者的存在可能与乳腺癌化疗的多药耐药机制有关。

乳腺癌组织中HER2、BCRP基因表达的检测及相关性分析

目的探讨人表皮生长因子受体Ⅱ(HER2/neu)与乳腺癌耐受蛋白(BCRP)在乳腺癌组织中的表达及在乳腺癌化疗中的潜在价值。方法采用RT-PCR和免疫组织化学方法分别检测48例乳腺癌组织和相应的癌旁组织的HER2、BCRP的转录和蛋白质水平的表达。结果RT-PCR结果显示,乳腺癌组织中HER2和BCRP阳性率分别是29%(14/48)和33%(16/48),明显高于癌旁组织[4%(2/48)和6%(3/48),P<0.001];免疫组化检测癌组织发现HER2和BCRP的表达率分别为30%(12/40)和33%(11/34),与RT-PCR结果一致,且9例HER2表达阳性的组织中BCRP表达均为阳性,二者的表达高度相关,P<0.001。结论HER2和BCRP在乳腺癌组织比癌旁组织有明显增加的表达率,且两基因的表达相关,提示两基因表达的上调在乳腺癌的发生及恶性表型维持中可能起一定作用。