余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌BEL-7404细胞株凋亡的影响

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的影响。方法:采用MTT法测定余甘子叶化学成分没食子酸在体外对BEL-7404细胞增殖的影响;普通光学显微镜、倒置相差显微镜和荧光显微镜观察余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞后的形态学变化;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测余甘子叶化学成分没食子酸诱导BEL-7404细胞早期细胞凋亡的情况;Tunel法检测BEL-7404细胞的晚期凋亡情况及其凋亡率。结果:MTT法和显微镜观察显示余甘子叶化学成分没食子酸能不同程度抑制BEL-7404细胞的增殖,可致细胞形态学改变,出现典型的凋亡特征;AnnexinV/PI双标记法检测显示早期凋亡细胞随作用时间的延长而增加,Tunel法检测晚期凋亡细胞,其凋亡率亦随作用时间的延长而增大。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能抑制BEL-7404细胞的增殖并诱导其产生凋亡,其对BEL-7404细胞的凋亡影响呈时间依赖性。

MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究

MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Westernblot分别检测MG132对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响.结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长.通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.同时,MG132可诱导Beclin1和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成.上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径:细胞凋亡和自噬.

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL 74 0 4细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL 74 0 4细胞 ,通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL 74 0 4细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化 ,凝胶电泳可见细胞DNA有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL 74 0

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均<0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均<0.05),C组与D组无显著性差异(P>0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。

藤茶双氢杨梅树皮素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的抑制作用

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、克隆形成法观察APS对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:MTT法中,APS对BEL-7404细胞的IC50为22.99μg/mL;细胞生长曲线法提示其对BEL-7404细胞生长有明显抑制作用;克隆形成法中,药物浓度在9.88μg/mL以上时抑制率为100%,药物浓度为6.58μg/mL时抑制率为69.65%。结论:APS对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞体外放射治疗的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)联合体外放射治疗(放疗)对肝癌Bel-7404细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法25μmol·L-1Res联合放疗处理肝癌Bel-7404细胞,并将细胞分为4组:对照组,2 Gy放疗组,4 Gy放疗组,6 Gy放疗组,噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞的增殖及运动侵袭能力,荧光显微镜检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果与对照组比较,2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、6 Gy放疗组肝癌Bel-7404细胞增殖能力及侵袭能力均下降,凋亡细胞增多(P<0.05)。结论 Res能增强肝癌Bel-7404细胞对放疗的敏感性,放疗联合Res可使肝癌细胞增殖受抑,侵袭减弱,凋亡增加,其原因与降低MMP-2、VEGF蛋白表达有关。

锌对于原发性肝细胞癌BEL-7404细胞生物学行为的影响

目的:观察外源锌对原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7404细胞生物学行为的影响。方法:应用TSQ锌离子荧光探针、MTT法、DNA倍体法、吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法和Transwell小室法分别检测不同浓度硫酸锌刺激下BEL-7404细胞内锌离子含量、细胞活力、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移和侵袭能力的变化。应用real-time PCR和Western blot法分别检测不同浓度锌离子对BEL-7404细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着培养环境中锌离子浓度的升高,BEL-7404细胞内的锌离子含量增加,细胞的存活率和细胞迁移与侵袭能力降低,凋亡率升高(P<0.05);G0/G1期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:外源性给予锌离子可抑制HCC细胞的活力、迁移与侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期在G2/M期,并可能降低细胞的恶性表型。

外源NF-IL6(C/EBPβ)对肝癌细胞系BEL-7404的肿瘤抑制效应

目的 :探讨核转录因子NF IL6对肝癌细胞系BEL 740 4恶性度的影响。方法 :用磷酸钙介导转染技术 ,将NF IL6表达载体 (pCN)和空载体质粒 (pCN 空 )分别导入肝癌细胞系BEL 740 4 ,并借助细胞生长曲线 ,软琼脂集落形成试验 ,裸鼠成瘤试验对转染细胞的恶性度进行了检测。结果 :与原细胞系BEL 740 4和空载体转染的该细胞系相比较 ,转染了NF IL6基因的BEL 740 4的各细胞克隆生长速度减慢 ,在软琼脂中集落形成率恶性度下降 ,裸鼠成瘤试验显示成瘤性明显降低。结论 :表明外源转染的NF IL6对肝癌细胞系BEL 740

转染HBx诱导肝癌细胞株Bel-7404多药耐药的初步研究

目的研究HBx转染对肝癌细胞株Bel-7404增殖、细胞周期以及多药耐药的影响,并探讨HBx转染诱导肝癌多药耐药发生的可能机制。方法选用人肝癌Bel-7404细胞株进行转染,根据HBx转染情况将细胞分为三组,分别为转染HBx细胞组(Bel-7404-HBx组)、转染空载体细胞组(Bel-7404-con组)和空白细胞组(Bel-7404组);实时定量PCR检测各组细胞中HBx RNA的表达。Western blot法检测各组细胞中HBx、Notch-1和多药耐药蛋白(MRP)的表达,CCK-8法检测各组细胞增殖活性和多药耐性,流式分析仪检测各组细胞生长周期。结果 PCR扩增凝胶电泳显示Bel-7404-HBx组有HBx片段出现,而其他两组未见HBx m RNA的表达;Western bolt结果显示在Bel-7404-HBx组处有蛋白条带(即HBx蛋白),而Bel-7404组和Bel-7404-con组未见表达。与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组细胞增殖显著加快(P<0.05);与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Notch-1和MRP在Bel-7404-HBx组的蛋白表达增加;细胞周期结果显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组G_0/G_1期细胞显著减少(P<0.05),S期显著增加(P<0.01),G_2/M期变化不大(P>0.05);多药耐药实验显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂在Bel-7404-HBx组中耐药指数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论转染HBx的Bel-7404细胞可能通过诱导Notch-1与MRP的过表达,最终导致肝癌细胞株Bel-7404增殖能力增强和多药耐药的发生。

应用RNAi技术沉默survivin基因对肝癌细胞系BEL-7404生长的影响

目的为研究生存素survivin基因的功能及肝细胞癌(HCC)的基因治疗策略。构建针对survivin基因的siR-NA的表达载体,转染肝癌细胞系BEL-7404后评价其对survivin基因表达的抑制作用。方法依据survivin基因设计siRNA片断,构建pGenesil-1/survivin表达载体,脂质体LipofectamineTM 2000转染BEL-7404细胞。实时定量聚合酶链反应从基因转录水平检测survivin基因的表达率,应用免疫组织化学的方法检测肝癌细胞系BEL-7404中survivin蛋白表达抑制情况。结果本实验已成功构建了针对survivin基因的pGenesil-1/survivin质粒。实时定量PCR检测显示,BEL-7404细胞经特异性siRNA作用后survivin基因的表达受抑制,其Ct值由34.2降低到22.8,免疫组织化学结果显示,pGenesil-1/survivin介导的siRNA能抑制BEL-7404细胞中survivin蛋白的表达。结论构建的siRNA能特异地抑制sur-vivin靶基因在肝癌细胞株BEL-7404中的表达,为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM中hTERT表达的研究

目的观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。

动力素kinectin基因mRNA在7404肝癌细胞株的表达及意义

目的研究动力素作为肝癌相关抗原其在肝癌细胞株中的表达情况,评价其作为分子肿瘤标记以及肿瘤免疫治疗特异性靶位的可能性。方法运用RT-PCR技术检测国内建株的肝癌细胞株BEL-7404 kinectin基因(D2剪接区)mR-NA的表达,并与肝癌组织、相应癌旁肝组织、正常肝组织比较。结果肝癌细胞株BEL-7404中kinectin基因(D2选择剪接区)呈强阳性表达,肝癌组织中也呈较强的阳性表达,癌旁肝组织则表达呈弱阳性。结论 kinectin基因可作为肝癌诊断的辅助分子标记,并具有作为肝癌免疫治疗特异性靶位的潜在价值。

叶下珠提取物对肝癌细胞的抑制和对Bcl-2表达的影响

文本主要探讨叶下珠提取物对人肝癌细胞的抑制作用及其对Bcl-2的表达的影响。在倒置显微镜下利用利用MTT比色法观察体外培养的人肝癌细胞株(BEL-7404)在不同浓度的叶下珠提取物作用后的形态变化,通过这种方法来确定各种浓度下的叶下珠提取物对于肝癌细胞的抑制程度。同时制作爬片,利用细胞免疫化学法测定Bcl-2在细胞中的表达情况。结果显示叶下珠提取物对于肝癌细胞有抑制作用,且抑制效果在实验范围内随着药物的浓度增加而增强。并且,叶下珠提取物能够减弱Bcl-2在体内的表达程度。说明叶下珠提取物通过下调细胞凋亡抑制基因Bcl-2的表达,从而促进肝癌细胞的凋亡。

熊果酸对肝癌细胞株Bel-7404转移及侵袭能力的影响

目的 观察熊果酸（UA）对肝癌细胞株Bel-7404细胞转移侵袭能力及相关基因基质金属蛋白酶（MMP）-2、金属蛋白酶组织抑制因子（TIMP）-2 mRNA和蛋白表达水平的影响.方法 选用3个组：A组（UA 50 μmol/L）、B组（顺铂10mg/L）和C组（DMEM空白对照）对Bel-7404细胞进行处理,用细胞迁移实验及Transwell小室法检测细胞的迁移及侵袭能力,逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot法检测细胞中MMP-2、TIMP-2 mRNA及蛋白的表达水平.结果 对Bel-7404细胞作用48 h后,A、B两组细胞的迁移速率（35.2±8.7）、（30.5±8.6）μm/h及侵袭穿膜细胞数（21.2±5.3）、（20.2±5.7）个、MMP-2 mRNA 0.24±0.06、0.23±0.05及蛋白0.21±0.01、0.24±0.04表达水平均较C组（75.6±8.7）μm/h、（54.8±7.8）个、0.46±0.11、0.42±0.06明显降低,差异均有统计学意义（P〈0.01）,而TIMP-2 mRNA0.87±0.05、0.83±0.06及蛋白0.98±0.06、0.95±0.09表达水平均比C组0.31±0.02、0.59±0.02高,差异均有统计学意义（P〈0.01）;A、B两组间细胞的迁移速率、侵袭穿膜细胞数、MMP-2和TIMP-2 mRNA及蛋白表达水平的比较差异均无统计学意义（P〉0.05）.结论 UA可抑制肝癌Bel-7404细胞株的迁移侵袭,其机制可能与MMP-2表达下调而TIMP-2表达上调有关.UA 50 μmol/L对Bel-7404细胞迁移侵袭能力的抑制作用与顺铂10 mg/L具有相同的效果及机制.

红鱼眼叶化学成分对人肝癌BEL-7404细胞株增殖的影响

目的:观察红鱼眼叶不同提取物及其化学成分对人肝癌BEL-7404细胞增殖的影响。方法:采用MTT法,观察红鱼眼叶不同提取物的含药血清对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用并从有效部位分离出单体成分,观察各化学成分对肝癌BEL-7404细胞的影响。结果:与20%空白血清对照组比较,红鱼眼叶乙酸乙酯提取物20%含药血清对人肝癌BEL-7404细胞有明显的体外抑制作用(P<0.05);红鱼眼叶乙酸乙酯提取物中没食子酸、柯里拉京、短叶苏木酚酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有明显抑制作用,其IC_(50)分别为46.81,32.40,41.15μg·m L^(-1),没食子酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖基本无抑制作用,其IC_(50)为-6.67μg·m L^(-1)。结论:红鱼眼叶乙酸乙酯提取物能抑制人肝癌BEL-7404细胞的增殖;从红鱼眼叶乙酸乙酯中分离的没食子酸、柯里拉京、短叶苏木酚酸乙酯对人肝癌细胞BEL-7404的增殖具有抑制作用。

维利帕尼和多柔比星联合作用对人肝癌耐药细胞株BEL-7404增殖和凋亡的影响

目的检测PARP抑制剂维利帕尼(veliparib)与抗癌药物多柔比星(doxorubicin)联合应用对肝癌耐药细胞株BEL-7404增殖抑制的作用。方法以BEL-7404细胞为研究对象,常规培养传代,经多柔比星和(或)维利帕尼处理24h后,通过四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察细胞的增殖率变化,采用流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染法分析细胞凋亡水平,通过单细胞凝胶电泳实验评价DNA损伤程度,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(Western blotting)法检测细胞线粒体和胞浆中细胞色素c水平变化。结果多柔比星和维利帕尼联合应用组的细胞增殖率明显低于对照组和多柔比星单独处理组(P<0.01),细胞凋亡率则显著高于对照组和多柔比星单独处理组(P<0.05);同时,多柔比星和维利帕尼联合应用组细胞DNA损伤水平较对照组和多柔比星单独处理组明显加重(P<0.01),而细胞色素c在胞浆中的水平则显著高于对照组和多柔比星单独处理组(P<0.01)。结论维利帕尼与多柔比星联合作用可以抑制BEL-7404细胞的增殖,并诱导细胞DNA损伤和凋亡,其机制与胞浆中细胞色素c的表达升高有关。

沙枣对人肝癌Bel-7404细胞增殖和凋亡的影响

目的:观察沙枣提取物对人肝癌Bel-7404细胞增殖抑制作用及其对细胞凋亡的影响。方法:以没食子酸为对照品,采用Folin-Ciocalteu法测定沙枣提取物各分离组分的总酚含量。通过MTT法,观察各组分对Bel-7404细胞增殖抑制作用。选取对Bel-7404增殖抑制活性最强的20%乙醇洗脱组分,设50、100、150μg/ml剂量组,采用Ainexin V-FITC/PI双染法,流式细胞仪检测其诱导细胞凋亡,并采用Hoechst 33258荧光染色法观察细胞形态变化。结果:沙枣提取物各分离组分对Bel-7404增殖抑制作用各不相同,其中20%乙醇洗脱组分的50、100、150μg/ml剂量组的凋亡率分别为29.8%、58.7%和76.2%;凋亡细胞的细胞核或细胞质内可见浓染致密的颗粒块状荧光。结论:沙枣提取物可抑制Bel-7404细胞增殖,诱导其凋亡,并与总酚含量呈现一定的量效关系。

田基黄不同提取物含药血清体外抗乙肝和抗肝癌作用的实验研究

目的观察田基黄不同提取物的含药血清体外抗乙肝和抗肝癌的作用。方法采用酶链免疫法,观察田基黄不同提取物的含药血清对2215细胞分泌HBeAg和HBsAg的抑制作用。采用MTT技术,观察田基黄不同提取物的含药血清对肝癌细胞BEL-7404增殖的抑制作用。结果当含药血清浓度为5%时,田基黄乙醇总提取物和正丁醇提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好抑制作用,抑制率分别为34.84%和57.95%,以及76.02%和53.15%(P<0.05);当含药血清浓度为20%时,醋酸乙酯提取物对HBeAg和HBsAg呈现较好的抑制作用,抑制率分别为79.79%和57.22%(P<0.05);水提取物3种浓度的含药血清对HBeAg和HBsAg都有较好的抑制作用,抑制率分别达到了70%和30%以上(P<0.05)。田基黄各提取物对肝癌BEL-7404细胞都有一定的抑制作用,该抑制作用呈明显的量效关系,当含药血清浓度为20%时,乙醇总提取物、醋酸乙酯提取物、正丁醇提取物和水提取物的抑制率分别为29.74%,53.80%,40.79%和54.24%(P<0.01)。结论田基黄不同提取物含药血清能抑制2215细胞分泌HBeAg和HBsAg,并且能抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖。其抗乙肝的有效成分主要分布在田基黄的水提取物中,而抗肝癌的有效成分则均衡分布于各种极性部位。

苦参碱对人肝癌细胞及正常肝细胞增殖和粘附功能影响的比较

目的观察苦参碱对人肝癌细胞BEL-7404及正常肝细胞QSG-7701增殖和粘附能力的影响。方法采用MTT法测定苦参碱对BEL-7404和QSG-7701的增殖;倒置相差显微镜观察细胞形态学变化;粘附实验检测细胞粘附率。结果苦参碱1.0～4.0g/L能有效抑制BEL-7404细胞的增殖。0.5～1.0g/L浓度的苦参碱能有效地诱导BEL-7404分化。当苦参碱的浓度低于0.5g/L时,其对QSG-7701细胞的增殖有一定的促进作用。0.25、0.5、0.75、1.0g/L苦参碱处理72h后,BEL-7404细胞黏附抑制率分别为18.6%、24.4%、30.3%、44.7%,与对照组比较差异均有显著性(P<0.01);而QSG-7701细胞黏附抑制率分别为1.7%、3.5%、6.1%、37.8%,只有1.0g/L浓度的苦参碱与对照组比较有差异显著性(P<0.01)。结论苦参碱能有效抑制肝癌细胞BEL-7404的增殖,且抑制作用具有时间、剂量依赖性;低浓度能有效地诱导肝癌细胞分化;高浓度的苦参碱有较强的抑制人正常肝细胞增殖作用,低浓度具有一定的生长刺激作用;苦参碱抑制BEL-7404细胞粘附。