余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌BEL-7404细胞株凋亡的影响

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的影响。方法:采用MTT法测定余甘子叶化学成分没食子酸在体外对BEL-7404细胞增殖的影响;普通光学显微镜、倒置相差显微镜和荧光显微镜观察余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞后的形态学变化;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测余甘子叶化学成分没食子酸诱导BEL-7404细胞早期细胞凋亡的情况;Tunel法检测BEL-7404细胞的晚期凋亡情况及其凋亡率。结果:MTT法和显微镜观察显示余甘子叶化学成分没食子酸能不同程度抑制BEL-7404细胞的增殖,可致细胞形态学改变,出现典型的凋亡特征;AnnexinV/PI双标记法检测显示早期凋亡细胞随作用时间的延长而增加,Tunel法检测晚期凋亡细胞,其凋亡率亦随作用时间的延长而增大。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能抑制BEL-7404细胞的增殖并诱导其产生凋亡,其对BEL-7404细胞的凋亡影响呈时间依赖性。

MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制研究

MG132(Z-Leu-leu-leu-CHO)是一种蛋白酶体抑制剂,它可逆地抑制蛋白酶体活性,从而抑制泛素-蛋白酶体通路所介导的蛋白质降解,诱导细胞凋亡.实验研究MG132抑制肝癌细胞Bel-7404生长的机制.采用不同浓度梯度和时间梯度,通过荧光显微镜、透射电子显微镜、Hoechst33342染色、MTT检测、AnnexinⅤ/PI流式细胞术、Westernblot分别检测MG132对Bel-7404细胞的形态学变化、细胞内质网压力变化、自噬泡形成、凋亡小体形成、细胞存活率、细胞凋亡水平、凋亡及自噬信号途径中相关蛋白质表达的影响.结果显示,MG132能明显抑制Bel-7404细胞生长.通过增加内质网压力激活Caspase-12,也可通过线粒体途径调节Bcl-2/Bax水平,促进细胞色素c的释放,两者皆可激活下游效应Caspase-3,剪切PARP,诱导细胞凋亡.同时,MG132可诱导Beclin1和LC3B的上调,促使Bel-7404细胞发生自噬,可在透射电镜下观察到自噬泡形成.上述结果表明,MG132作用Bel-7404细胞涉及两类细胞程序性死亡途径:细胞凋亡和自噬.

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL 74 0 4细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL 74 0 4细胞 ,通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL 74 0 4细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化 ,凝胶电泳可见细胞DNA有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL 74 0

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均<0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均<0.05),C组与D组无显著性差异(P>0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。

藤茶双氢杨梅树皮素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的抑制作用

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、克隆形成法观察APS对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:MTT法中,APS对BEL-7404细胞的IC50为22.99μg/mL;细胞生长曲线法提示其对BEL-7404细胞生长有明显抑制作用;克隆形成法中,药物浓度在9.88μg/mL以上时抑制率为100%,药物浓度为6.58μg/mL时抑制率为69.65%。结论:APS对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。

两种儿茶素成分体外逆转人肝癌细胞BEL-7404/ADR多药耐药性

背景与目的:儿茶素具有多种抗肿瘤的活性,目前,国内外尚未见儿茶素用于肝癌多药耐药性的研究。本研究拟探讨两种儿茶素成分表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制。方法:MTT法检测ECG、EGCG的细胞毒作用;荧光分光光度法检测细胞内化疗药物的含量;RT-PCR法检测mdr1基因的表达。结果:ECG和EGCG在100mg/L以下剂量时对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADR的抑制率均小于10%,60mg/L的ECG和14mg/L的EGCG分别与0.8mg/L的阿霉素(adriamycin,ADM)合用能使ADM对BEL-7404/ADR的IC50由36mg/L分别下降至2.3mg/L和1.9mg/L,增敏倍数分别为15.8倍和19.2倍,联合用药可使细胞内ADM的浓度由(0.76±0.02)μg/108cells～(2.55±0.17)μg/108cells提高到(2.04±0.07)μg/108cells～(9.28±0.59)μg/108cells(P<0.01),并使mdr1表达与对照组相比分别下降了27.6%及41.3%,逆转肿瘤MDR作用以EGCG为强。结论:EGCG和ECG具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1表达、增加细胞内化疗药物的积累有关。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞体外放射治疗的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)联合体外放射治疗(放疗)对肝癌Bel-7404细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法25μmol·L-1Res联合放疗处理肝癌Bel-7404细胞,并将细胞分为4组:对照组,2 Gy放疗组,4 Gy放疗组,6 Gy放疗组,噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞的增殖及运动侵袭能力,荧光显微镜检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果与对照组比较,2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、6 Gy放疗组肝癌Bel-7404细胞增殖能力及侵袭能力均下降,凋亡细胞增多(P<0.05)。结论 Res能增强肝癌Bel-7404细胞对放疗的敏感性,放疗联合Res可使肝癌细胞增殖受抑,侵袭减弱,凋亡增加,其原因与降低MMP-2、VEGF蛋白表达有关。

板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的 :板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL 740 4/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法 :MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 :耐药肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 :肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P gp和MRP过量表达有关 ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gp药物外排功能。

锌对于原发性肝细胞癌BEL-7404细胞生物学行为的影响

目的:观察外源锌对原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7404细胞生物学行为的影响。方法:应用TSQ锌离子荧光探针、MTT法、DNA倍体法、吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法和Transwell小室法分别检测不同浓度硫酸锌刺激下BEL-7404细胞内锌离子含量、细胞活力、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移和侵袭能力的变化。应用real-time PCR和Western blot法分别检测不同浓度锌离子对BEL-7404细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着培养环境中锌离子浓度的升高,BEL-7404细胞内的锌离子含量增加,细胞的存活率和细胞迁移与侵袭能力降低,凋亡率升高(P<0.05);G0/G1期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:外源性给予锌离子可抑制HCC细胞的活力、迁移与侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期在G2/M期,并可能降低细胞的恶性表型。

黄芪多糖协同顺铂对BEL-7404人肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨黄芪多糖对人肝癌细胞BEL- 740 4细胞株细胞周期的影响及与顺铂联合使用,对BEL- 740 4肝癌细胞的杀伤作用。方法 通过四氮甲唑蓝(MTT )实验检测细胞的增殖抑制率,以观察黄芪多糖对肝癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 黄芪多糖可抑制肝癌BEL- 740 4细胞的生长、增殖;与顺铂联合应用对BEL 740 4肝癌细胞杀伤作用强于2种药物单独使用。黄芪多糖处理后的BEL- 740 4细胞出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,将细胞周期阻滞于G1期。结论 黄芪多糖对肝癌BEL -740 4细胞有杀伤作用;黄芪多糖与顺铂联合使用具有协同抗肿瘤作用。

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM逆转作用研究

目的:研究蝎毒(BMK)对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM耐药逆转的的机理。方法:采用免疫组化检测细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因MDR1 mRNA水平。结果:50mg/L蝎毒处理Bel-7404和Bel-7404/ADM后,细胞表面P-gp表达分别由原来的4.20±0.05、68.49±3.07下降到4.05±0.07、37.15±2.03,差异均有统计学意义(u=3.0253,P=0.0025)。多药耐药基因MDR1 mRNA表达分别由原来的1.73±0.35、9.51±1.82下降到2.35±0.18、4.58±0.22,差异无统计学意义(u=1.6036,P=0.1088)。结论:BMK在非细胞毒剂量水平具有下调MDR1 mRNA、P-gp的表达的作用。

蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响

目的 :观察蝎毒 (BMK)对人肝癌Bel 740 4细胞端粒酶活性的影响。方法 :不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel 740 4细胞 72h ,聚合酶链反应 端粒重复扩增 (PCR TRAP)法测定端粒酶活性 ,四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖抑制。结果 :BMK可抑制Bel 740 4细胞端粒酶活性 ,随BMK浓度增大 ,端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel 740 4细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论 :端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一 。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的:观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法:采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果:白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论:白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。

转染HBx诱导肝癌细胞株Bel-7404多药耐药的初步研究

目的研究HBx转染对肝癌细胞株Bel-7404增殖、细胞周期以及多药耐药的影响,并探讨HBx转染诱导肝癌多药耐药发生的可能机制。方法选用人肝癌Bel-7404细胞株进行转染,根据HBx转染情况将细胞分为三组,分别为转染HBx细胞组(Bel-7404-HBx组)、转染空载体细胞组(Bel-7404-con组)和空白细胞组(Bel-7404组);实时定量PCR检测各组细胞中HBx RNA的表达。Western blot法检测各组细胞中HBx、Notch-1和多药耐药蛋白(MRP)的表达,CCK-8法检测各组细胞增殖活性和多药耐性,流式分析仪检测各组细胞生长周期。结果 PCR扩增凝胶电泳显示Bel-7404-HBx组有HBx片段出现,而其他两组未见HBx m RNA的表达;Western bolt结果显示在Bel-7404-HBx组处有蛋白条带(即HBx蛋白),而Bel-7404组和Bel-7404-con组未见表达。与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组细胞增殖显著加快(P<0.05);与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Notch-1和MRP在Bel-7404-HBx组的蛋白表达增加;细胞周期结果显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组G_0/G_1期细胞显著减少(P<0.05),S期显著增加(P<0.01),G_2/M期变化不大(P>0.05);多药耐药实验显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂在Bel-7404-HBx组中耐药指数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论转染HBx的Bel-7404细胞可能通过诱导Notch-1与MRP的过表达,最终导致肝癌细胞株Bel-7404增殖能力增强和多药耐药的发生。

外源NF-IL6(C/EBPβ)对肝癌细胞系BEL-7404的肿瘤抑制效应

目的 :探讨核转录因子NF IL6对肝癌细胞系BEL 740 4恶性度的影响。方法 :用磷酸钙介导转染技术 ,将NF IL6表达载体 (pCN)和空载体质粒 (pCN 空 )分别导入肝癌细胞系BEL 740 4 ,并借助细胞生长曲线 ,软琼脂集落形成试验 ,裸鼠成瘤试验对转染细胞的恶性度进行了检测。结果 :与原细胞系BEL 740 4和空载体转染的该细胞系相比较 ,转染了NF IL6基因的BEL 740 4的各细胞克隆生长速度减慢 ,在软琼脂中集落形成率恶性度下降 ,裸鼠成瘤试验显示成瘤性明显降低。结论 :表明外源转染的NF IL6对肝癌细胞系BEL 740

PHA-767491联合TRAIL抑制肝癌细胞Bel-7404增殖

将小分子抗癌药物PHA-767491和携带TRAIL基因的非复制型腺病毒(Ad-TRAIL)共同作用于肝癌细胞Bel-7404,探讨PHA-767491联合TRAIL蛋白对肝癌细胞增殖的协同抑制作用及其作用机理.MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342荧光检测细胞凋亡现象和流式细胞仪检测细胞凋亡水平.结果表明,PHA-767491联合Ad-TRAIL抑制Bel-7404细胞增殖的能力显著优于单一用药.Western印迹进一步分析蛋白表达水平显示,PHA-767491可以通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Xiap的表达,从而显著增强TRAIL蛋白诱导Bel-7404细胞凋亡的能力;PHA-767491联合AdTRAIL处理Bel-7404细胞后,不仅Bel-7404细胞凋亡水平显著增加,并且伴随着PARP和Caspase3的大量剪切.本研究证实,PHA-767491和TRAIL的联合使用对抑制肝癌细胞Bel-7404增殖表现出了显著的协同效应,为今后癌症药物的联合治疗提供了新的思路.

应用RNAi技术沉默survivin基因对肝癌细胞系BEL-7404生长的影响

目的为研究生存素survivin基因的功能及肝细胞癌(HCC)的基因治疗策略。构建针对survivin基因的siR-NA的表达载体,转染肝癌细胞系BEL-7404后评价其对survivin基因表达的抑制作用。方法依据survivin基因设计siRNA片断,构建pGenesil-1/survivin表达载体,脂质体LipofectamineTM 2000转染BEL-7404细胞。实时定量聚合酶链反应从基因转录水平检测survivin基因的表达率,应用免疫组织化学的方法检测肝癌细胞系BEL-7404中survivin蛋白表达抑制情况。结果本实验已成功构建了针对survivin基因的pGenesil-1/survivin质粒。实时定量PCR检测显示,BEL-7404细胞经特异性siRNA作用后survivin基因的表达受抑制,其Ct值由34.2降低到22.8,免疫组织化学结果显示,pGenesil-1/survivin介导的siRNA能抑制BEL-7404细胞中survivin蛋白的表达。结论构建的siRNA能特异地抑制sur-vivin靶基因在肝癌细胞株BEL-7404中的表达,为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法和材料。

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM中hTERT表达的研究

目的观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。

不同化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒长度的影响

目的观察不同浓度几种化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒长度的影响。方法采用Southern Blot-ting及凝胶电泳法测定不同化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒限制片断长度(TRF)变化影响。结果TRF随化疗药物浓度的增加而逐渐缩短:低浓度组(A、B组)中DDP,MMC,ADM对BEL-7404细胞表现出明显的抑制性,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);VCR对BEL-7404细胞的端粒长度均不具抑制性。高浓度组(C组)DDP、ADM、MMC、VCR中的平均TRF与对照组比较均有统计学差异,与低浓度组比较进一步缩短(P<0.05)。结论上述药物对端粒的抑制作用呈浓度效应关系。