板蓝根高级不饱和脂肪酸对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADM逆转作用实验

目的 :板蓝根高级不饱和脂肪酸对肝癌耐药细胞株BEL 740 4/ADM耐药逆转作用及机制研究。方法 :MTT法观察药物对细胞的生长抑制作用 ;免疫组化法检测细胞P 糖蛋白 (P gp)和多药耐药相关蛋白 (MRP)的表达 ;采用高效液相色谱法(HPLC)测定细胞内ADM的浓度。结果 :耐药肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物产生多药耐药性 ,耐药细胞P gp和MRP的阳性率显著高于亲本细胞 (P <0 .0 1) ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时与ADM合用后能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ;ADM与板蓝根高级不饱和脂肪酸合用时 ,其细胞内ADM的含量较单独使用明显增高。结论 :肝癌细胞株BEL 740 4/ADM对多种化疗药物具有多药耐药性 ,其多药耐药性与P gp和MRP过量表达有关 ;板蓝根高级不饱和脂肪酸在非细胞毒剂量时能逆转BEL 740 4/ADM对ADM的耐药性 ,其逆转作用可能与降低P gp药物外排功能。

蝎毒对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM逆转作用研究

目的:研究蝎毒(BMK)对耐药肝癌细胞株Bel-7404/ADM耐药逆转的的机理。方法:采用免疫组化检测细胞表面P糖蛋白(P-gp)的表达,荧光定量PCR法检测多药耐药基因MDR1 mRNA水平。结果:50mg/L蝎毒处理Bel-7404和Bel-7404/ADM后,细胞表面P-gp表达分别由原来的4.20±0.05、68.49±3.07下降到4.05±0.07、37.15±2.03,差异均有统计学意义(u=3.0253,P=0.0025)。多药耐药基因MDR1 mRNA表达分别由原来的1.73±0.35、9.51±1.82下降到2.35±0.18、4.58±0.22,差异无统计学意义(u=1.6036,P=0.1088)。结论:BMK在非细胞毒剂量水平具有下调MDR1 mRNA、P-gp的表达的作用。

顺铂对肝癌细胞BEL-7404、BEL-7404/ADM中hTERT表达的研究

目的观察不同浓度及作用时间顺铂对BEL-7404、BEL-7404/ADM肝癌细胞hTERT-mRNA表达及影响。方法以不同浓度顺铂处理BEL-7404细胞24h、48h、72h后,RT-PCR检测hTERT-mRNA表达。结果不同浓度DDP处理48h、72h后,BEL-7404细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,与对照组比较有显著性差异,对比BEL-7404/ADM细胞,随着DDP剂量和作用时间的增加,hTERT活性也呈减弱趋势。结论顺铂可降低BEL-7404、BEL-7404/ADM细胞hTERT-mRNA表达,表现为明显的时间及浓度的依赖性。

两种儿茶素成分体外逆转人肝癌细胞BEL-7404/ADR多药耐药性

背景与目的:儿茶素具有多种抗肿瘤的活性,目前,国内外尚未见儿茶素用于肝癌多药耐药性的研究。本研究拟探讨两种儿茶素成分表儿茶素没食子酸酯(epicatechingallate,ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechingallate,EGCG)体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用及可能的机制。方法:MTT法检测ECG、EGCG的细胞毒作用;荧光分光光度法检测细胞内化疗药物的含量;RT-PCR法检测mdr1基因的表达。结果:ECG和EGCG在100mg/L以下剂量时对耐药肝癌细胞株BEL-7404/ADR的抑制率均小于10%,60mg/L的ECG和14mg/L的EGCG分别与0.8mg/L的阿霉素(adriamycin,ADM)合用能使ADM对BEL-7404/ADR的IC50由36mg/L分别下降至2.3mg/L和1.9mg/L,增敏倍数分别为15.8倍和19.2倍,联合用药可使细胞内ADM的浓度由(0.76±0.02)μg/108cells～(2.55±0.17)μg/108cells提高到(2.04±0.07)μg/108cells～(9.28±0.59)μg/108cells(P<0.01),并使mdr1表达与对照组相比分别下降了27.6%及41.3%,逆转肿瘤MDR作用以EGCG为强。结论:EGCG和ECG具有体外逆转人肝癌细胞多药耐药性的作用,可能与下调mdr1表达、增加细胞内化疗药物的积累有关。

余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌BEL-7404细胞株凋亡的影响

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸对人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的影响。方法:采用MTT法测定余甘子叶化学成分没食子酸在体外对BEL-7404细胞增殖的影响;普通光学显微镜、倒置相差显微镜和荧光显微镜观察余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞后的形态学变化;AnnexinV/PI双标记法流式细胞术检测余甘子叶化学成分没食子酸诱导BEL-7404细胞早期细胞凋亡的情况;Tunel法检测BEL-7404细胞的晚期凋亡情况及其凋亡率。结果:MTT法和显微镜观察显示余甘子叶化学成分没食子酸能不同程度抑制BEL-7404细胞的增殖,可致细胞形态学改变,出现典型的凋亡特征;AnnexinV/PI双标记法检测显示早期凋亡细胞随作用时间的延长而增加,Tunel法检测晚期凋亡细胞,其凋亡率亦随作用时间的延长而增大。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能抑制BEL-7404细胞的增殖并诱导其产生凋亡,其对BEL-7404细胞的凋亡影响呈时间依赖性。

白英提取物诱导人肝癌BEL-7404细胞凋亡作用

目的 探讨中药白英提取物对肝癌BEL 74 0 4细胞系的凋亡作用。方法 用不同浓度的白英提取物处理肝癌BEL 74 0 4细胞 ,通过观察细胞形态、DNA凝胶电泳法研究白英提取物诱导肝癌BEL 74 0 4细胞产生凋亡现象。结果 光学显微镜下可见细胞呈凋亡特征性变化 ,凝胶电泳可见细胞DNA有规律断裂形成梯形图谱。结论 白英可诱导肝癌BEL 74 0

川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响

目的观察川芎嗪(TMP)对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)表达的影响,研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为:亲本组、耐药组、逆转组(耐药+TMP)、阳性对照组(耐药+维拉帕米)、二抗阴性对照组,用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组(P<0.01);耐药+TMP组和耐药+维拉帕米组均显著低于耐药组和亲本组(P<0.01)。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组(P<0.01);TMP组、维拉帕米组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组(P<0.01)。结论 TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达,增加阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用,从而增加对肿瘤细胞的抑制率,提高化疗疗效。

黄芪多糖协同顺铂对BEL-7404人肝癌细胞的杀伤作用

目的 探讨黄芪多糖对人肝癌细胞BEL- 740 4细胞株细胞周期的影响及与顺铂联合使用,对BEL- 740 4肝癌细胞的杀伤作用。方法 通过四氮甲唑蓝(MTT )实验检测细胞的增殖抑制率,以观察黄芪多糖对肝癌细胞的增殖抑制作用;应用流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡率。结果 黄芪多糖可抑制肝癌BEL- 740 4细胞的生长、增殖;与顺铂联合应用对BEL 740 4肝癌细胞杀伤作用强于2种药物单独使用。黄芪多糖处理后的BEL- 740 4细胞出现低于G1期DNA含量的亚二倍体凋亡峰,将细胞周期阻滞于G1期。结论 黄芪多糖对肝癌BEL -740 4细胞有杀伤作用;黄芪多糖与顺铂联合使用具有协同抗肿瘤作用。

MTT法测定多柔比星和氟尿嘧啶及顺铂对肝癌耐药细胞Bel-7402/ADM的IC_(50)值

目的研究多柔比星(ADM)、氟尿嘧啶(5-Fu)、顺铂(DDP)对人肝癌多药耐药细胞株Bel-7402/ADM的细胞毒作用,为开展逆转肿瘤多药耐药研究提供实验依据。方法以MTT法测定ADM、5-Fu、DDP对Bel-7402/ADM的细胞毒作用,计算每种药物的半数抑制浓度(IC50)。结果ADM、5-Fu、DDP对Bel-7402/ADM的IC50分别为10.00,30.60,11.48μmol.L-1。结论MTT法检测药物细胞毒作用方便快捷,节省试剂;随着化疗药物浓度的增加,药物对细胞的抑制率增加。

蝎毒对人肝癌Bel-7404细胞端粒酶活性的影响

目的 :观察蝎毒 (BMK)对人肝癌Bel 740 4细胞端粒酶活性的影响。方法 :不同浓度的BMK处理体外培养的人肝癌Bel 740 4细胞 72h ,聚合酶链反应 端粒重复扩增 (PCR TRAP)法测定端粒酶活性 ,四甲基偶氮唑盐比色 (MTT)法测定细胞增殖抑制。结果 :BMK可抑制Bel 740 4细胞端粒酶活性 ,随BMK浓度增大 ,端粒酶活性抑制增强。MTT结果显示BMK抑制Bel 740 4细胞增殖且抑制有浓度依赖性。结论 :端粒酶活性的抑制可能是BMK发挥抗癌活性的作用机制之一 。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭影响机制研究

目的:观察白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞增殖、凋亡、侵袭的影响,并研究其内在分子机制。方法:采用MTT法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞增殖的影响;流式细胞术检测白藜芦醇对Bel-7404细胞凋亡的影响;Transwell法检测白藜芦醇对Bel-7404细胞侵袭的影响。结果:白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞增殖,也可以诱导Bel-7404细胞凋亡,均呈浓度依赖性,与下调Procaspase3和PARP蛋白表达有关。白藜芦醇可以抑制Bel-7404细胞侵袭性,呈浓度依赖性,与下调MMP-9、VEGF蛋白表达有关。结论:白藜芦醇可以抑制肝癌Bel-7404细胞增殖,通过剪切Procaspase3、PARP蛋白而诱导凋亡,通过下调MMP-9和VEGF蛋白表达水平而抑制Bel-7404细胞侵袭性。

藤茶双氢杨梅树皮素对人肝癌BEL-7404细胞增殖的抑制作用

目的:探讨藤茶双氢杨梅树皮素(APS)的抗肿瘤作用。方法:以MTT法、生长曲线法、克隆形成法观察APS对人肝癌BEL-7404细胞的体外抑制作用。结果:MTT法中,APS对BEL-7404细胞的IC50为22.99μg/mL;细胞生长曲线法提示其对BEL-7404细胞生长有明显抑制作用;克隆形成法中,药物浓度在9.88μg/mL以上时抑制率为100%,药物浓度为6.58μg/mL时抑制率为69.65%。结论:APS对BEL-7404细胞的增殖有明显的抑制作用。

白藜芦醇联合放疗对肝癌Bel-7404细胞体外凋亡的影响

目的探讨不同剂量白藜芦醇联合不同剂量放疗对肝癌Bel-7404细胞凋亡的影响。方法用MTT法检测不同浓度白藜芦醇(0,25,50,100μmol/L)对肝癌Bel-7404细胞增殖的影响,用荧光显微镜检测不同浓度白藜芦醇细胞凋亡情况,寻找恰当的白藜芦醇的浓度进行下一步实验。按照不同的放射治疗剂量分组如下:A组予单纯白藜芦醇干预组;B组行放射治疗剂量2 Gy+白藜芦醇干预;C组行放射治疗剂量4 Gy+白藜芦醇干预;D组行放射治疗剂量6 Gy+白藜芦醇干预;检测肿瘤细胞的增殖、运动侵袭、细胞凋亡及各组细胞MMP-2、VEGF的表达情况。结果检测结果显示,白藜芦醇可以有效抑制肝癌Bel-7404细胞生长、促进肝癌Bel-7404细胞凋亡,呈浓度依赖关系。根据实验结果,选择25μmol/L白藜芦醇进行体外放疗的实验。与A组相比,B、C、D组对肝癌Bel-7404细胞的增殖凋亡作用均有显著性差异(P均<0.05);B组与C、D组有显著性差异(P均<0.05),C组与D组无显著性差异(P>0.05)。结论不同剂量放疗联合25μmol/L白藜芦醇均可提高放射治疗后肝癌Bel-7404细胞凋亡率,降低肿瘤侵袭性;白藜芦醇可能具有放疗增敏的作用。

余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡机制的研究

目的:探讨余甘子叶化学成分没食子酸诱导人肝癌细胞株BEL-7404产生凋亡的机制。方法:采用PI和Hoechst33342双染色法流式检测对人肝癌细胞株BEL-7404各周期的影响;细胞荧光免疫染色法和Western blot法检测Bax和Bcl-2蛋白表达的变化。结果:PI和Hoechst33342双染色法分析结果表明,余甘子叶化学成分没食子酸作用BEL-7404细胞72 h后,G2/M期细胞数增多,呈现细胞阻滞现象,并伴有大量的细胞凋亡。荧光免疫染色显示,药物作用人肝癌细胞株BEL-7404 72 h后Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达则降低。Western blot法实验亦显示Bax蛋白表达升高。结论:余甘子叶化学成分没食子酸能阻滞G2/M期细胞,并通过上调Bax和下调Bcl-2蛋白表达,导致线粒体膜电位的下降,进而激活Caspase,最终导致细胞死亡,可能是其诱导人肝癌细胞株BEL-7404凋亡的分子机制之一。

白藜芦醇对肝癌Bel-7404细胞体外放射治疗的影响

目的探讨白藜芦醇(Res)联合体外放射治疗(放疗)对肝癌Bel-7404细胞增殖、侵袭、凋亡的影响。方法25μmol·L-1Res联合放疗处理肝癌Bel-7404细胞,并将细胞分为4组:对照组,2 Gy放疗组,4 Gy放疗组,6 Gy放疗组,噻唑蓝(MTT)法检测肿瘤细胞的增殖及运动侵袭能力,荧光显微镜检测细胞凋亡,Western-blot法检测细胞基质金属蛋白酶2(MMP-2)、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达情况。结果与对照组比较,2 Gy放疗组、4 Gy放疗组、6 Gy放疗组肝癌Bel-7404细胞增殖能力及侵袭能力均下降,凋亡细胞增多(P<0.05)。结论 Res能增强肝癌Bel-7404细胞对放疗的敏感性,放疗联合Res可使肝癌细胞增殖受抑,侵袭减弱,凋亡增加,其原因与降低MMP-2、VEGF蛋白表达有关。

锌对于原发性肝细胞癌BEL-7404细胞生物学行为的影响

目的:观察外源锌对原发性肝细胞癌(HCC)BEL-7404细胞生物学行为的影响。方法:应用TSQ锌离子荧光探针、MTT法、DNA倍体法、吖啶橙/溴乙啶双荧光染色法和Transwell小室法分别检测不同浓度硫酸锌刺激下BEL-7404细胞内锌离子含量、细胞活力、细胞周期、细胞凋亡及细胞迁移和侵袭能力的变化。应用real-time PCR和Western blot法分别检测不同浓度锌离子对BEL-7404细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达的影响。结果:随着培养环境中锌离子浓度的升高,BEL-7404细胞内的锌离子含量增加,细胞的存活率和细胞迁移与侵袭能力降低,凋亡率升高(P<0.05);G0/G1期细胞比例降低,G2/M期细胞比例升高(P<0.05);细胞白蛋白的mRNA和蛋白表达量增加(P<0.05)。结论:外源性给予锌离子可抑制HCC细胞的活力、迁移与侵袭能力,诱导细胞凋亡,阻滞细胞周期在G2/M期,并可能降低细胞的恶性表型。

PHA-767491联合TRAIL抑制肝癌细胞Bel-7404增殖

将小分子抗癌药物PHA-767491和携带TRAIL基因的非复制型腺病毒(Ad-TRAIL)共同作用于肝癌细胞Bel-7404,探讨PHA-767491联合TRAIL蛋白对肝癌细胞增殖的协同抑制作用及其作用机理.MTT法检测细胞存活率,Hoechst 33342荧光检测细胞凋亡现象和流式细胞仪检测细胞凋亡水平.结果表明,PHA-767491联合Ad-TRAIL抑制Bel-7404细胞增殖的能力显著优于单一用药.Western印迹进一步分析蛋白表达水平显示,PHA-767491可以通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Xiap的表达,从而显著增强TRAIL蛋白诱导Bel-7404细胞凋亡的能力;PHA-767491联合AdTRAIL处理Bel-7404细胞后,不仅Bel-7404细胞凋亡水平显著增加,并且伴随着PARP和Caspase3的大量剪切.本研究证实,PHA-767491和TRAIL的联合使用对抑制肝癌细胞Bel-7404增殖表现出了显著的协同效应,为今后癌症药物的联合治疗提供了新的思路.

转染HBx诱导肝癌细胞株Bel-7404多药耐药的初步研究

目的研究HBx转染对肝癌细胞株Bel-7404增殖、细胞周期以及多药耐药的影响,并探讨HBx转染诱导肝癌多药耐药发生的可能机制。方法选用人肝癌Bel-7404细胞株进行转染,根据HBx转染情况将细胞分为三组,分别为转染HBx细胞组(Bel-7404-HBx组)、转染空载体细胞组(Bel-7404-con组)和空白细胞组(Bel-7404组);实时定量PCR检测各组细胞中HBx RNA的表达。Western blot法检测各组细胞中HBx、Notch-1和多药耐药蛋白(MRP)的表达,CCK-8法检测各组细胞增殖活性和多药耐性,流式分析仪检测各组细胞生长周期。结果 PCR扩增凝胶电泳显示Bel-7404-HBx组有HBx片段出现,而其他两组未见HBx m RNA的表达;Western bolt结果显示在Bel-7404-HBx组处有蛋白条带(即HBx蛋白),而Bel-7404组和Bel-7404-con组未见表达。与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组细胞增殖显著加快(P<0.05);与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Notch-1和MRP在Bel-7404-HBx组的蛋白表达增加;细胞周期结果显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,Bel-7404-HBx组G_0/G_1期细胞显著减少(P<0.05),S期显著增加(P<0.01),G_2/M期变化不大(P>0.05);多药耐药实验显示,与Bel-7404组和Bel-7404-con组比较,丝裂霉素、阿霉素、5-氟尿嘧啶、顺铂和奥沙利铂在Bel-7404-HBx组中耐药指数明显增加(P<0.05或P<0.01)。结论转染HBx的Bel-7404细胞可能通过诱导Notch-1与MRP的过表达,最终导致肝癌细胞株Bel-7404增殖能力增强和多药耐药的发生。

不同化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒长度的影响

目的观察不同浓度几种化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒长度的影响。方法采用Southern Blot-ting及凝胶电泳法测定不同化疗药物对人肝癌BEL-7404细胞端粒限制片断长度(TRF)变化影响。结果TRF随化疗药物浓度的增加而逐渐缩短:低浓度组(A、B组)中DDP,MMC,ADM对BEL-7404细胞表现出明显的抑制性,与对照组比较有统计学差异(P<0.05);VCR对BEL-7404细胞的端粒长度均不具抑制性。高浓度组(C组)DDP、ADM、MMC、VCR中的平均TRF与对照组比较均有统计学差异,与低浓度组比较进一步缩短(P<0.05)。结论上述药物对端粒的抑制作用呈浓度效应关系。

薄层色谱-气相色谱法测定人肝癌细胞BEL-7404中芥酸甲酯的含量及意义

目的探讨测定人肝癌细胞BEL-7404内芥酸甲酯浓度的方法。方法采用薄层色谱一气相色谱法测定空白细胞裂解液、加药细胞裂解液、加药细胞培养液内芥酸钾酯浓度，并确定芥酸甲酯浓度和峰面积之间的关系。结果芥酸甲酯50-5000μg/ml具有良好的峰面积-浓度线性关系（r=0．99995）；芥酸甲酯微乳液进人到人肝癌细胞BEL-7404内的量为24．9％。结论薄层色谱-气相色谱法能够准确测定药物进人细胞的浓度。其操作简单快速、干扰小。