藤黄酸对胃癌BGC-803细胞凋亡的作用及对survivin基因表达的影响

目的:研究藤黄酸对人胃癌细胞株BGC-803凋亡的作用及其对胃癌细胞survivin基因表达的影响。观察应用RNA干扰(RNAi)技术沉默survivin基因的表达后,藤黄酸对胃癌细胞BGC-803的抑瘤效应。方法:应用MTT、DNAladder等方法研究藤黄酸对胃癌细胞系BGC-803凋亡的诱导作用,运用RT-PCR、Western-blotting分析藤黄酸和survivin-siRNA对胃癌细胞survivin表达的影响。MTT法检测藤黄酸对转染survivin-siRNA后的BGC-803细胞株抑瘤作用。结果:藤黄酸可抑制BGC-803细胞的生长,其抑制率与药物浓度及作用时间呈依赖关系。藤黄酸作用BGC-803细胞后,survivin蛋白表达降低。通过siRNA有效阻断BGC-803细胞survivin基因的表达后,藤黄酸对细胞的抑瘤效果可以进一步提高。结论:藤黄酸可以有效的抑制survivin基因表达,从而促进肿瘤细胞凋亡,同时survivin-siRNA与藤黄酸具有明显的协同抗肿瘤作用。

伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭的影响及机制研究

目的:研究伊维菌素对人胃癌细胞BGC-823、MGC-803迁移和侵袭能力的影响及其作用机制。方法:0、2.5、5、10、20、40μmol/L伊维菌素分别作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后用MTT法检测细胞抑制率,再采用Transwell小室侵袭实验观察5μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用24 h对BGC-823、MGC-803细胞迁移和侵袭的影响,Western blot法分别检测5、10μmol/L伊维菌素和含0.67‰二甲基亚砜的磷酸盐缓冲液(对照组)作用于BGC-823、MGC-803细胞24 h后上皮-间质转化(EMT)标记物E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、Snail和EMT转导通路转化生长因子β(TGF-β)/Smad中TGF-β1、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白的表达水平。结果:伊维菌素对BGC-823、MGC-803细胞生长均有抑制作用,其细胞抑制率与其浓度呈正相关。与对照组比较,5μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞的迁移数和侵袭数均明显减少(P<0.01或P<0.001);5、10μmol/L伊维菌素作用后BGC-823、MGC-803细胞中E-cadherin蛋白表达明显增强(P<0.05或P<0.01或P<0.001),N-cadherin、Vimentin、Snail、TGF-βR、Smad2、Smad3蛋白表达均明显减弱(P<0.05或P<0.01或P<0.001),TGF-β1蛋白仅在10μmol/L伊维菌素作用后明显减弱(P<0.05)。结论:伊维菌素能显著抑制BGC-823、MGC-803细胞的迁移和侵袭,其可能与抑制TGF-β/Smad活性从而影响EMT过程有关。

氯化镧水杨酸8-羟基喹啉配合物抑制BGC-803细胞增殖及核分裂的研究

目的：观察氯化镧水杨酸8－羟基喹啉配合物（La（C7 H5 O3）2·（C9 H6 NO）·2H2 O）对体外培养的BGC －803细胞的生长抑制作用，并进一步探讨其作用机制。方法以BGC－803细胞为研究对象，应用MTT法检测细胞增殖活性、HE染色法检测细胞分裂、Annexin V－FITC染色法检测细胞凋亡率，以确定不同浓度配合物对细胞增殖和核分裂的影响。结果不同浓度La（C7H5O3）2·（C9H6NO）·2H2O处理BGC－803细胞24～72 h后，细胞增殖显著受到抑制，并呈浓度及时间依赖性；1．0、5．0、10．0μg/ml La（C7 H5 O3）2·（C9 H6 NO）·2H2 O处理24 h后，BGC－803细胞G0/G1期细胞数量显著增加，S期细胞数量显著降低（P＜0．01）；各浓度组细胞凋亡率均显著增加（P＜0．01）。结论 La（C7H5O3）2·（C9 H6 NO ）·2H2 O对BGC－803细胞具有生长抑制作用，其机制与阻滞细胞周期导致诱导凋亡有关。

JRCL对人源性胃癌BGC-803细胞体外抑制作用的研究

目的:观察JRCL在体外对BGC-803细胞增殖的影响。方法:JRCL处理体外培养的BGC-803细胞,观察对细胞增殖的影响,观察肿瘤细胞形态学变化,检测细胞凋亡。结果:不同浓度JRCL对BGC-823细胞增殖具有抑制作用,并呈剂量依赖关系,高剂量JRCL对BGC-803细胞形态学有明显的影响。结论:JRCL具有抑制BGC-803细胞增殖作用,其作用强度与时间-浓度呈正相关。

曲古霉素A诱导胃癌细胞系BGC-803凋亡的机制研究

目的利用曲古霉素A(TSA)处理人胃癌细胞系BGC-803后观察细胞增殖情况并研究了凋亡相关基因表达量的变化。方法本研究通过TSA处理胃癌细胞系BGC-803细胞后,利用MTT、Real-time PCR、Western blot等试验方法,采用SPSS 17.0统计软件进行数据分析。结果 75 ng/m L的TSA处理48 h相较其他试验组,可显著抑制胃癌细胞系BGC-803细胞增殖(P<0.05),且其抑制作用具有剂量、时间依赖性;使促凋亡蛋白BAX、Caspase-3的mRNA、蛋白表达量升高,从而发挥促进细胞凋亡的作用。结论 TSA诱导BGC-803调亡是通过Caspase依赖途径进行的,且随着时间和剂量的增加,TSA对胃癌细胞的抑制效果越来越显著。

Snail在TGF-β1诱导胃癌细胞MGC-803上皮间质转化中的作用

目的 探讨Snail在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803上皮细胞向间质细胞转化过程中的表达及其作用.方法 TGF-β1处理人胃癌细胞MGC-803不同时间（0h,3h,6h,24h,48h,72h）,倒置显微镜观察细胞形态的变化,Western blot方法检测Snail蛋白及E-cadherin,Vimentin蛋白的表达情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力的变化.结果 （1）随着TGF-β1作用时间的延长,MGC-803细胞形态发生变化,伪足不同程度的增多;（2）在外源性TGF-β1作用下,胃癌细胞MGC-803均不同程度地表达Snail和E-cadherin,Snail从0h到6h表达量增强,到6h时达到最高.E-cadherin蛋白从0h到6h表达逐渐增高,6h时最高,后续变化不明显.Vimentin蛋白6h表达量最低,此后逐渐升高,72h时表达量最高;（3）Transwell小室实验显示6h时,细胞开始穿过ECM膜,随着时间的延长,穿过的细胞逐渐增多,72h最多.结论 在TGF-β1诱导人胃癌细胞MGC-803细胞EMT的过程中,Snail蛋白起到重要作用,启动Vimentin转录表达.

LncRNA LINC00342通过靶向miR-596促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭

目的研究LINC00342在胃癌组织、细胞中的表达水平及影响胃癌细胞生物学功能的具体通路。方法运用生物信息学技术,通过GEO数据库及相关预测软件,进行相关筛选及文献查询后,确定所研究的LncRNA及其下游所调控的miRNA;采用qRT-PCR检测LINC00342、miR-596在胃癌细胞系及人胃黏膜细胞中、胃癌组织及相应癌旁组织中的表达差异;细胞生物学功能上,过表达胃癌BGC-823细胞系中的LINC00342,将其分为pcDNA-LINC00342组和pcDNA组;过表达胃癌MGC-803细胞系中的miR-596,将其分为miR-596-mimic组及mimic-NC组;敲低胃癌MGC-803细胞系中LINC00342的表达,将其分为si LINC00342组及si-NC组、敲低胃癌BGC-823细胞系中miR-596的表达,将其分为miR-596-inhibitor组及inhibitor-NC组;分别进行CCK-8、Edu细胞增殖实验、划痕实验、Transwell细胞侵袭实验、细胞周期实验以验证LINC00342及miR-596对胃癌细胞功能的影响;双荧光素酶标记实验验证LINC00342与miR-596的靶向调控关系。结果通过生物信息学技术及相关软件预测分析,确定所研究LncRNA为LINC00342,预测其下游调控的miRNA为miR-596;LINC00342在胃癌组织中表达高于癌旁组织(P<0.05);在人胃癌细胞系中表达高于人胃黏膜细胞系(P<0.05),miR-596则相反(P<0.05);在胃癌细胞中,LINC00342的过表达能促进胃癌细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)和侵袭(P<0.001),且减少处于G0/G1期的细胞比率(P<0.01);LINC00342敲低后,胃癌细胞的增殖(P<0.05)、迁移(P<0.01)和侵袭(P<0.001)则受抑制,增加处于G0/G1期的细胞比率(P<0.01);miR-596则发挥着相反的作用。LINC00342和miR-596能特异性结合(P=0.0067)。结论在胃癌细胞中,LINC00342通过调控miR-596,促进胃癌细胞的增殖、迁移和侵袭。

抑制赖氨酰氧化酶可抑制胃癌细胞体外迁移和异质黏附

目的用不同浓度的β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,BAPN)抑制赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)后,观察两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823的迁移、黏附能力变化,以探讨LOX对胃癌发生发展的影响。方法分别培养两株胃癌细胞MGC-803和BGC-823,用Real-Time PCR法检测两株胃癌细胞中LOX的m RNA;在用BAPN抑制LOX后,通过体外划痕实验和Transwell小室迁徙实验比较两株胃癌细胞的迁徙能力的变化,以同质黏附实验和异质黏附实验比较其黏附能力的变化。结果两株胃癌细胞中均有LOX的表达;加入0.2和0.3m M BAPN均可抑制胃癌细胞MGC-803和BGC-823的体外迁移能力,增强其同质黏附能力,减弱其异质黏附能力。结论 LOX可能通过增强胃癌细胞的迁移能力,减弱同质黏附、增强异质黏附能力来促进胃癌的转移。

胃癌细胞PTEN甲基化与其表达的相关性

目的:探讨胃癌细胞PTEN基因启动子区域甲基化与其mRNA表达的关系.方法:采用甲基化特异性PCR法(MSP)检测四种胃癌细胞系SGC-7901(中度分化)、BGC-823(低度分化细胞)、MGC-803(低度分化细胞)、HGC-27中PTEN基因甲基化状态,RT-PCR检测四种胃癌细胞系PTEN表达水平(未分化).结果:HGC-27、MGC-803、BGC-823细胞系可检测到PTEN基因启动子的甲基化,SGC-7901细胞未检测到甲基化,甲基化水平的顺序依次为:HGC-27最高(138.217±7.898,P<0.01),MGC-803、BGC-823次之(P>0.05).PTENmRNA表达水平的依次顺序为:SGC-7901最高(0.336±0.079,P<0.01),BGC-823、MGC-803次之(P>0.05),HGC-27表达水平最低(0.113±0.047,P<0.05),其表达水平随着其启动子区甲基化水平增高而降低.PTENmRNA表达及其启动子甲基化水平还与胃癌细胞分化程度相关.结论:胃癌细胞PTEN基因启动子区域出现异常甲基化,可能是导致其mRNA表达异常的主要原因,也可能是导致胃癌发生、发展的重要机制之一.

赖氨酰氧化酶对胃癌细胞血管生成拟态的影响

目的研究赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)对胃癌细胞MGC-803和BGC-823体外血管生成拟态(vasculogenic mimicry,VM)的影响。方法培养胃癌细胞,分别加入含有不同浓度LOX或LOX的抑制剂β-氨基丙腈(beta-aminopropionitrile,BAPN)作用72h,用过碘酸雪夫(periodic acid-schiff stain,PAS)染色方法检测VM形成的数量。结果在两种胃癌细胞株中,随着LOX浓度的增加,VM形成的数量也增加,LOX浓度与VM的形成呈正相关(r=0.847和r=0.851);此效应可被BAPN抑制,随着BAPN的浓度增加,VM形成的数量相应减少,BPAN与VM的形成呈现负相关(r=-0.791和r=-0.834)。结论外源性添加LOX可以促进胃癌MGC-803和BGC-823细胞株VM的形成。