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Expression of the Capsid Precursor Protein gene of Foot-and-mouth Disease Virus and Green Fluorescent Protein Gene in BHK-21 Cells Mediated by Retroviral Vector
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作者 LI Jiong LIU Yan-hong +4 位作者 AN Fang-lan LIU Jun-lin LIU Xiang-tao SHANG You-jun YIN Hong 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第S1期70-75,共6页
We have constructed a retroviral vector mediated mammalian cell expression system of the capsid precursor protein of foot-and-mouth disease virus(FMDV).The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constr... We have constructed a retroviral vector mediated mammalian cell expression system of the capsid precursor protein of foot-and-mouth disease virus(FMDV).The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constructed by sequentially inserting capsid precursor protein gene(P1) of FMDV and enhanced green fluorescent protein gene(EGFP) into pBABEpuro.The recombinant retroviral vector and the pVSV-G plasmid were co-transfected into packaging cells(GP2-293) by liposomemediated transduction to produce the pseudovirus.The pseudovirus was used to infect BHK-21 cells and resistant cells were screened with puromycin.Green fluorescent proteins were observed by fluorescence microscopy and expression of the capsid precursor protein gene of FMDV was detected by indirect immunofluorescence.The recombinant retroviral vector pBABEpuro-P1-2A-EGFP was constructed successfully.The capsid precursor protein of FMDV and green fluorescent protein were expressed in BHK-21 cells.The mammalian cell expression system for the capsid precursor protein of FMDV has been constructed successfully,which lays the foundation of development of a FMDV subunit vaccine. 展开更多
关键词 retroviral vector FMDV capsid precursor protein gene green fluorescent protein gene bhk-21 cell
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Antitumor Effect of Apcin on Endometrial Carcinoma via p21-Mediated Cell Cycle Arrest and Apoptosis
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作者 Ke NI Zi-li LI +1 位作者 Zhi-yong HU Li HONG 《Current Medical Science》 SCIE CAS 2024年第3期623-632,共10页
Objective Endometrial carcinoma(EC)is a prevalent gynecological malignancy characterized by increasing incidence and mortality rates.This underscores the critical need for novel therapeutic targets.One such potential ... Objective Endometrial carcinoma(EC)is a prevalent gynecological malignancy characterized by increasing incidence and mortality rates.This underscores the critical need for novel therapeutic targets.One such potential target is cell division cycle 20(CDC20),which has been implicated in oncogenesis.This study investigated the effect of the CDC20 inhibitor Apcin on EC and elucidated the underlying mechanism involved.Methods The effects of Apcin on EC cell proliferation,apoptosis,and the cell cycle were evaluated using CCK8 assays and flow cytometry.RNA sequencing(RNA-seq)was subsequently conducted to explore the underlying molecular mechanism,and Western blotting and coimmunoprecipitation were subsequently performed to validate the results.Animal studies were performed to evaluate the antitumor effects in vivo.Bioinformatics analysis was also conducted to identify CDC20 as a potential therapeutic target in EC.Results Treatment with Apcin inhibited proliferation and induced apoptosis in EC cells,resulting in cell cycle arrest.Pathways associated with apoptosis and the cell cycle were activated following treatment with Apcin.Notably,Apcin treatment led to the upregulation of the cell cycle regulator p21,which was verified to interact with CDC20 and consequently decrease the expression of downstream cyclins in EC cells.In vivo experiments confirmed that Apcin treatment significantly impeded tumor growth.Higher CDC20 expression was observed in EC tissue than in nonmalignant tissue,and increased CDC20 expression in EC patients was associated with shorter overall survival and progress free interval.Conclusion CDC20 is a novel molecular target in EC,and Apcin could be developed as a candidate antitumor drug for EC treatment. 展开更多
关键词 endometrial carcinoma CDC20 APOPTOSIS cell cycle arrest P21 BBC3
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逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体基因和绿色荧光蛋白基因在BHK-21细胞中的表达 被引量:9
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作者 李炯 刘艳红 +4 位作者 安芳兰 刘俊林 刘湘涛 尚佑军 殷宏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期376-382,共7页
为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病... 为建立逆转录病毒载体介导的口蹄疫病毒衣壳前体蛋白哺乳动物细胞表达体系,将口蹄疫病毒(FMDV)衣壳前体基因(P1)和绿色荧光蛋白基因(EGFP)依次插入逆转录病毒载体pBABEpuro构建重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP。将重组逆转录病毒载体和pVSV-G质粒载体共转染GP2-293包装细胞,用产生的重组逆转录病毒感染幼仓鼠肾细胞(BHK-21)。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,用嘌呤霉素筛选抗性细胞,间接免疫荧光方法检测细胞中FMDV衣壳前体蛋白的表达。结果表明,重组逆转录病毒载体pBABEpuro-P1-2A-EGFP构建正确,绿色荧光蛋白和FMDV衣壳前体蛋白在细胞中能稳定表达。FMDV衣壳前体蛋白基因细胞表达体系的成功建立为进一步开展口蹄疫亚单位疫苗的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 逆转录病毒载体 口蹄疫病毒 衣壳前体基因 绿色荧光蛋白基因 bhk-21细胞
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羊口疮病毒ORF129基因重组质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量:10
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作者 白刚 贾怀杰 +4 位作者 何小兵 王盈盈 何妍萍 吴润 景志忠 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期8-13,共6页
为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEG... 为研究羊口疮病毒(ORFV)ORF129基因编码的锚蛋白调节宿主天然免疫应答的作用机制,利用PCR技术对ORFV/QH01/2010分离株ORF129基因进行扩增,并连接到pGEM-T easy载体,构建pGEM-ORF129重组质粒,双酶切后与pEGFP-N1真核表达载体连接,构建pEGFP-ORFV-ORF129真核表达质粒,经酶切、PCR鉴定及测序正确后转染BHK-21细胞,观察其在细胞中的表达情况.结果表明:ORFV ORF129基因在BHK-21细胞中获得稳定表达,并为进一步研究其编码蛋白在ORFV感染过程中的分子机制奠定了基础. 展开更多
关键词 羊口疮病毒 ORF129基因 bhk-21细胞 融合表达
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稳定表达犬瘟热病毒细胞受体SLAM的BHK-21/SLAM细胞系的建立 被引量:5
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作者 朱颖 刘文鑫 +6 位作者 赵姝静 李丹丹 冯瑜菲 关玮琨 何丽丽 江馗语 师东方 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期440-443,共4页
为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细... 为建立稳定表达犬瘟热病毒(CDV)受体,即信号淋巴细胞激活因子(SLAM)的BHK-21细胞系,本研究将重组表达质粒pDisplay-SLAM转染于BHK-21细胞,通过G418压力筛选并结合有限稀释法、免疫荧光、RT-PCR和western blot筛选出稳定表达SLAM的阳性细胞(BHK-21/SLAM)。病毒感染试验结果显示,CDV在BHK-21细胞中无细胞病变(CPE)产生,而感染BHK-21/SLAM细胞12 h后即可出现CPE;BHK-21/SLAM细胞培养物上清液中的CDV核酸含量于24 h达到最高值(107.9拷贝/μL),明显高于对照组BHK-21细胞培养物上清液中的核酸含量(106.28拷贝/μL)。研究结果表明,与BHK-21细胞相比较,CDV在BHK-21/SLAM细胞中的病毒核酸含量更高,并能够产生明显的CPE。该细胞系的建立在CDV的分离、生物学特性研究和疫苗毒生产等方面具有良好应用前景。 展开更多
关键词 犬瘟热病毒 信号淋巴细胞激活因子 bhk-21细胞系 bhk-21 SLAM细胞系
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Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞差异蛋白质点2-DE分析 被引量:4
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作者 刘永杰 张克山 +5 位作者 尚佑军 郭建宏 郑海学 田宏 卢国栋 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期145-149,共5页
为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维... 为研究Asia 1型口蹄疫病毒(FMDV)感染BHK-21细胞后蛋白质组的变化及差异,将FMDV接种于培养的单层BHK-21细胞,同时设未接毒的BHK-21细胞作对照组。待细胞病变后分别提取2组细胞总蛋白借助2-DE技术及PDQuest8.0软件进行细胞蛋白质组二维电泳图谱差异性分析。结果显示感染组有1 457个可见蛋白质点,而对照组可见的蛋白质点为1 427个。感染组蛋白点的表达量与对照组相比,二者具有统计学差异(P<0.05)的蛋白质点472个,其中表达上调251个点,表达下调221个点,新合成蛋白点30个。结果表明FMDV感染BHK-21细胞后引起了细胞蛋白质组表达模式的改变,这种变化是病毒与细胞相互作用的结果。本研究首次利用蛋白质组学技术研究Asia 1型FMDV感染BHK-21细胞后蛋白质组学差异,有助于深入研究Asia 1型FMDV和BHK-21细胞相互作用的分子机制。 展开更多
关键词 Asia1型FMDV bhk-21细胞 感染 差异蛋白质组
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稳定表达施马伦贝格病毒核衣壳蛋白的BHK-21细胞系的建立 被引量:3
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作者 张永宁 吴绍强 +2 位作者 宋姗姗 董宣 林祥梅 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期438-443,共6页
为建立稳定表达施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳(N)蛋白的BHK-21细胞系,本研究在SBV-N蛋白编码基因的C端加入6个组氨酸(6×His)标签,将其克隆至慢病毒载体p LV-EGFP-C中构建重组慢病毒质粒p LV-EGFP-SBV-N,将其与慢病毒包装质粒p Helper... 为建立稳定表达施马伦贝格病毒(SBV)核衣壳(N)蛋白的BHK-21细胞系,本研究在SBV-N蛋白编码基因的C端加入6个组氨酸(6×His)标签,将其克隆至慢病毒载体p LV-EGFP-C中构建重组慢病毒质粒p LV-EGFP-SBV-N,将其与慢病毒包装质粒p Helper1.0和p Helper2.0共转染HEK-293T细胞,包装表达SBV-N蛋白的慢病毒。将重组慢病毒在聚凝胺(Polybrene)的介导下感染BHK-21细胞,采用嘌呤霉素(Puromycin)法和细胞有限稀释法筛选出一株稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系,命名为BHK-21-EGFP-SBV-N。间接免疫荧光试验进一步表明,该细胞系能够被SBV抗体阳性动物血清和特异性单克隆抗体2C8识别。稳定表达SBV-N蛋白的BHK-21细胞系的建立,为SBV血清学检测方法的建立提供材料。 展开更多
关键词 施马伦贝格病毒 核衣壳蛋白 B HK-21细胞 慢病毒载体
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猪乙脑病毒分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上的传代培养及E基因序列稳定性分析 被引量:3
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作者 胡博 滕蔓 +5 位作者 禹乐乐 罗俊 迟佳琪 宿靖伟 柴书军 张改平 《华北农学报》 CSCD 北大核心 2013年第6期71-76,共6页
为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V... 为研究猪乙脑病毒(JEV)分离株遗传基因的稳定性,将JEV分离株BSF.ZZ-1和BSF.ZZ-3在BHK-21细胞上进行连续传代培养,并对其E基因的遗传稳定性进行了研究。结果表明,经连续传代60次后病毒E基因趋于稳定,BSF.ZZ-1毒株E蛋白氨基酸位点E21(A→V)、E200(T→A)、E244(G→E)、E279(M→K)和E426(G→D),以及BSF.ZZ-3毒株的E244(G→E)、E255(F→L)、E285(M→L)、E368(L→S)和E497(N→S)传代后发生稳定点突变。与JEV毒力相关的部分位点如E107、E138、E176、E177和E315遗传稳定性较高,经连续传代后均未发生突变,与疫苗株SA14-14-2相应位点完全一致。但是,另外一些位点的遗传稳定性较差,如BSF.ZZ-3的E279(M→K→M)出现反复突变。这些突变是否与JEV的宿主细胞适应性及毒力变化相关有待进一步研究。 展开更多
关键词 乙脑病毒 BSF.ZZ-1 BSF.ZZ-3 bhk-21细胞系 传代培养 E基因 序列分析
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生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖伪狂犬病病毒工艺优化 被引量:4
9
作者 王家敏 李自良 +5 位作者 马芳芳 康碧静 田玲 李倬 马忠仁 乔自林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3936-3947,共12页
旨在筛选伪狂犬病病毒(PRV)敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID... 旨在筛选伪狂犬病病毒(PRV)敏感的BHK-21细胞并分析其生长和病毒增殖特性,优化反应器中BHK-21悬浮细胞的培养和病毒增殖条件,建立生物反应器培养BHK-21悬浮细胞增殖PRV工艺。本研究利用响应面和单因素优化法,以细胞生长动力学特性、TCID_(50)病毒滴度等参数为指标,优化1.2 L生物反应器中BHK-21悬浮细胞的最佳培养和增殖病毒条件,在5 L生物反应器中进一步批培养验证。结果显示,筛选获得PRV高敏感的BHK-21-02贴壁细胞和BHK-21-XF02悬浮细胞各1株,BHK-21-XF02悬浮细胞在含3%血清的SLM-BHK低血清培养基和SFM-BHK无血清培养基中均能实现良好的生长和病毒增殖。利用响应面法优化得到1.2 L反应器最佳培养条件为接种密度1.20×10~6cells·mL^(-1)、搅拌转速120 r·min^(-1)、DO值40%,5 L反应器批培养72 h细胞密度可达(7.61±0.18)×10~6 cells·mL^(-1)、细胞活率为(96.93±1.18)%。利用单因素法优化得到1.2 L反应器最佳病毒增殖条件为MOI 0.001、培养温度37℃、细胞密度2.0×10~6cells·mL^(-1)、搅拌转速80 r·min^(-1),5 L反应器批培养接毒后48 h病毒滴度达到最大值(7.13±0.11)lgTCID_(50)·mL^(-1)。本研究可为PRV疫苗相关研究和规模化生产提供参考。 展开更多
关键词 bhk-21悬浮细胞 生物反应器 伪狂犬病病毒 敏感性
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用乙基环丙沙星重建受猪鼻支原体污染的BHK-21细胞的研究 被引量:3
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作者 高林 廖德芳 +4 位作者 姚俊 肖雷 李华春 张念祖 李志华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第12期45-49,共5页
为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体... 为重建受猪鼻支原体人为污染的BHK-21细胞,本研究采用含10mg/L乙基环丙沙星的培养液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理,并用DNA荧光染色法和PCR法对处理进行全程监测。结果发现,4次循环处理并再传3代后,猪鼻支原体污染已被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受支原体污染的细胞提供了参考。 展开更多
关键词 乙基环丙沙星 猪鼻支原体 bhk-21细胞 清除污染
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辛德毕斯病毒在BHK-21细胞中繁殖过程的研究 被引量:3
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作者 梁凤霞 谢建新 +2 位作者 张琼 丁明孝 翟中和 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 1993年第3期161-165,共5页
辛德毕斯病毒(Sindbis virus)在 BHK-21细胞中繁殖的一步生长曲线表明,病毒感染后2小时便可产生大量的子代病毒;感染后6小时,病毒滴度达到最高峰,为10~9TCID_(50)/ml。电镜技术显示了病毒粒子的形态结构与形态发生过程。本文还对 SbV ... 辛德毕斯病毒(Sindbis virus)在 BHK-21细胞中繁殖的一步生长曲线表明,病毒感染后2小时便可产生大量的子代病毒;感染后6小时,病毒滴度达到最高峰,为10~9TCID_(50)/ml。电镜技术显示了病毒粒子的形态结构与形态发生过程。本文还对 SbV 的代谢合成动态及对宿主细胞的影响进行了研究和讨论。 展开更多
关键词 辛德毕斯病毒 bhk-21细胞 繁殖
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山羊痘病毒诱导BHK-21细胞凋亡的检测 被引量:2
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作者 程振涛 岳筠 +5 位作者 周碧君 王开功 文明 李永明 许乐仁 朱时杰 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2011年第4期49-54,共6页
为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在,分别采用HE染色、凋亡试剂盒检测、流式细胞仪检测和DNA Ladder检测,对山羊痘病毒感染的BHK-21细胞培养物进行细胞凋亡检测。不同方法检测结果均显示,山羊痘病毒感染BHK-21细胞组相... 为验证山羊痘病毒诱导BHK-21细胞出现凋亡现象的存在,分别采用HE染色、凋亡试剂盒检测、流式细胞仪检测和DNA Ladder检测,对山羊痘病毒感染的BHK-21细胞培养物进行细胞凋亡检测。不同方法检测结果均显示,山羊痘病毒感染BHK-21细胞组相同时间细胞凋亡数明显高于对照组。表明山羊痘病毒可诱导BHK-21细胞发生凋亡。 展开更多
关键词 山羊痘病毒 bhk-21细胞 细胞凋亡 检测
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用乙基环丙沙星重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞 被引量:2
13
作者 高林 廖德芳 +3 位作者 姚俊 张念祖 李华春 李志华 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2011年第11期214-217,共4页
为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠... 为重建受大肠杆菌污染的BHK-21细胞,本研究采用药物乙基环丙沙星,先测出该药对大肠杆菌的最低抑制浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),再测出该药对BHK-21细胞的MIC,从而确定10mg/L为乙基环丙沙星不影响细胞生长,又能抑制大肠杆菌的安全浓度。然后用含该浓度乙基环丙沙星的MEM生长液,对受污染的BHK-21细胞进行物理、化学相结合的循环处理。经过3次循环处理,再传3代后,确认大肠杆菌污染已经被彻底清除,细胞恢复了健康。此方法为抢救受细菌污染的细胞提供了参考。 展开更多
关键词 乙基环丙沙星 大肠杆菌 bhk-21细胞 清除污染
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稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系的建立 被引量:2
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作者 李欣 杨少华 +6 位作者 王洪梅 刘晓 武建明 高运东 王立群 仲跻峰 何洪彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期473-475,共3页
为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G... 为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选14d后获得阳性细胞株。RT-PCR和western blot检测结果表明,建立了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系,并且在不同代次的阳性细胞中能稳定表达目的基因和蛋白,该研究为RNA病毒感染性质粒在细胞内转录及病毒拯救技术平台的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 T7 RNAP bhk-21细胞
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猪带绦虫AgB与猪CD58或IFN-γ共表达质粒的构建及其在BHK-21细胞中的表达 被引量:1
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作者 侯俊玲 景志忠 +6 位作者 郑亚东 胡志敏 骆学农 蒙学莲 窦永喜 刘军龙 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期694-699,共6页
猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患病,研制有效、安全、廉价的疫苗是当前主要的研究方向之一。本试验通过PCR方法,从含猪囊尾蚴B抗原(AgB)、猪CD58和猪IFN-γ的重组克隆质粒中扩增出AgB、CD58和IFN-γ基因,然后将其克隆到真核表达载体pBud... 猪囊尾蚴病是一种重要的人畜共患病,研制有效、安全、廉价的疫苗是当前主要的研究方向之一。本试验通过PCR方法,从含猪囊尾蚴B抗原(AgB)、猪CD58和猪IFN-γ的重组克隆质粒中扩增出AgB、CD58和IFN-γ基因,然后将其克隆到真核表达载体pBudCE4.1中。重组表达质粒鉴定后,在脂质体作用下转染BHK-21细胞,通过间接免疫荧光(IFA)或直接免疫荧光试验分别检测AgB、CD58和IFN-γ在BHK-21中的表达。结果显示,AgB、CD58和IFN-γ在BHK-21细胞中都成功表达,这为研制抗猪囊尾蚴DNA疫苗奠定了坚实基础。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 AGB CD58 IFN-Γ 转染 bhk-21细胞
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猪α干扰素在BHK-21细胞中的表达与生物活性分析 被引量:2
16
作者 肖红冉 王大伟 +4 位作者 贺志锐 王鹏雁 倪伟 胡圣伟 陈创夫 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 2013年第2期182-186,共5页
为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-tim... 为了构建猪α-干扰素(PoIFN-α)的真核表达系统,鉴定其生物学活性,分离猪的外周血淋巴细胞,提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增猪α-干扰素基因序列,克隆至pcDNA3.1(+)载体,并转染BHK-21细胞。通过G418筛选获得稳定转染的细胞株,采用real-time PCR及ELISA测定PoIFN-α基因在BHK-21细胞内的表达,利用淋巴细胞增值试验(MTT)检测表达蛋白的生物学活性。结果表明:稳定整合PoIFN-α基因的BHK-21细胞系其PoIFN-αmRNA的转录效率比阴性对照组提高1.52倍,蛋白表达量显著提高1.35倍。MTT试验表明真核表达PoIFN-α淋巴细胞增值活性与阴性对照组相比差异显著(P<0.01),表明BHK-21细胞表达的PoIFN-α具有良好的生物学活性,为开发新型抗病毒制剂奠定基础。 展开更多
关键词 猪Α干扰素 bhk-21细胞 生物活性分析
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水泡性口炎病毒感染BHK-21细胞的超微结构改变 被引量:1
17
作者 褚秀玲 宋德光 +2 位作者 苏建青 韦旭斌 高丰 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期265-267,共3页
应用超薄切片技术对水泡性口炎病毒(VSV)在BHK-21细胞上的形态发生和早期发育进行了观察。结果表明,VSV能导致BHK-21细胞圆缩,胞浆严重空泡化,线粒体嵴断裂及空泡化;病毒在细胞浆内复制、增殖,在细胞膜上以出芽方式获得囊膜而成熟。
关键词 水泡性口炎病毒 bhk-21细胞 细胞病变 超微结构
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重叠延伸PCR法扩增猪囊尾蚴AgB基因及其在BHK-21细胞中的表达 被引量:4
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作者 郭爱疆 才学鹏 +5 位作者 贾万忠 房永祥 乔军 刘红霞 潘小梅 景志忠 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期2572-2578,共7页
【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构... 【目的】克隆猪囊尾蚴AgB基因并在体外细胞中表达。【方法】采用RT-PCR法分别扩增AgB基因的上半段和下半段序列。采用重叠延伸PCR法(splicing overlap extension PCR method,SOE-PCR)把具有35个相同碱基的上下半段扩增为全长基因,并构建到真核表达载体pVAX1,将酶切、PCR、测序鉴定的阳性质粒经脂质体转染BHK-21细胞。通过SDS-PAGE、Western-blotting、间接免疫荧光法,检测细胞中B抗原的表达。【结果】琼脂糖凝胶电泳显示扩增的不同片段大小分别与预期的相同。重组表达载体转染BHK细胞后有荧光出现。表达的蛋白能被猪囊尾蚴病阳性血清所识别。【结论】通过重叠延伸PCR法成功扩增了AgB基因全长并构建到真核表达载体,目的蛋白在BHK-21细胞中表达。 展开更多
关键词 猪囊尾蚴 AgR基因 重叠延伸PCR 真核表达 bhk-21
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BHK-21细胞稳定测定猪乙型脑炎病毒半数细胞感染量效价(TCID_(50))的条件优化及应用 被引量:6
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作者 滕蔓 罗俊 +4 位作者 樊剑鸣 邢广旭 赵东 杨苏珍 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第6期15-21,共7页
为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250~2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新... 为建立BHK-21细胞测定乙型脑炎病毒(Japenese encephalitis virus,JEV)病毒效价的方法,对96孔细胞板中不同初始接种量BHK-21细胞在多种维持液中的生长状态进行探讨,发现当BHK-21细胞以1250~2500个/孔接种96孔板培养24 h后,更换含3%新生牛血清的DMEM后在37℃、5%CO2条件下可至少良好维持72~96 h。在此条件下并基于Reed-Muench法测定病毒效价的原理,本文建立了准确测定JEV TCID50的方法,利用该方法对JEV野毒分离株及商品疫苗进行测定,均获得稳定、准确的病毒效价。本实验为JEV的体外培养、病毒定量、疫苗评价等提供了一种准确、稳定、易判定的参考方法。 展开更多
关键词 乙型脑炎病毒 bhk-21细胞 效价测定 TCID50
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BHK-21和BSR细胞用于RFFIT检测的一致性研究 被引量:2
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作者 李云云 于鹏程 +4 位作者 申辛欣 余春 吕新军 裴秋玲 唐青 《国际检验医学杂志》 CAS 2011年第8期827-828,共2页
目的比较BSR和BHK-21两种细胞分别引入快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系后其检测结果的差异。方法将BSR、BHK-21两种细胞分别引入RFFIT体系后,检测106份人血清样品中狂犬病毒中和抗体,并分析结果的相关性和一致性。结果两种方法结果... 目的比较BSR和BHK-21两种细胞分别引入快速荧光灶抑制试验(RFFIT)检测体系后其检测结果的差异。方法将BSR、BHK-21两种细胞分别引入RFFIT体系后,检测106份人血清样品中狂犬病毒中和抗体,并分析结果的相关性和一致性。结果两种方法结果之间有较好的直线相关关系(r=0.859),并有正向回归关系,直线回归方程:Y=2.261+0.737X(P<0.01);经同一份样品的重复检验,两种方法检测的稳定性较好。结论 BHK-21细胞系可以用于国内RFFIT检测体系。 展开更多
关键词 研究 bhk-21 BSR 相关性 稳定性
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