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稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系的建立 被引量:2
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作者 李欣 杨少华 +6 位作者 王洪梅 刘晓 武建明 高运东 王立群 仲跻峰 何洪彬 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期473-475,共3页
为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G... 为建立能稳定表达T7RNA聚合酶(T7RNAP)的BHK-21细胞系以研究RNA重组疫苗,本研究从BL21(DE3)大肠杆菌中扩增T7 RNAP基因,定向克隆于质粒pcDNA3.1(+)中,经双酶切及测序鉴定,获得阳性重组质粒pcDNA3.1-T7 RNAP。用该质粒转染BHK-21细胞,经G418筛选14d后获得阳性细胞株。RT-PCR和western blot检测结果表明,建立了稳定表达T7 RNAP的BHK-21细胞系,并且在不同代次的阳性细胞中能稳定表达目的基因和蛋白,该研究为RNA病毒感染性质粒在细胞内转录及病毒拯救技术平台的建立奠定了基础。 展开更多
关键词 T7 RNAP bhk-21细胞
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稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系的建立
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作者 马晓春 高继明 +4 位作者 孔宁 高丽丽 王彤彤 肖一红 周恩民 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期1179-1183,共5页
为建立稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系,采用RT-PCR方法从非洲绿猴肾细胞(Marc-145)中扩增波形蛋白基因,并将其与EmGFP基因、IRES基因共同克隆到pcDNA3.1/V5-His A载体中,成功构建重组质粒pcDNA3.1-GIV。通过非脂质体转染将其转染至... 为建立稳定表达猴源波形蛋白的BHK-21细胞系,采用RT-PCR方法从非洲绿猴肾细胞(Marc-145)中扩增波形蛋白基因,并将其与EmGFP基因、IRES基因共同克隆到pcDNA3.1/V5-His A载体中,成功构建重组质粒pcDNA3.1-GIV。通过非脂质体转染将其转染至BHK-21细胞中,经G418加压筛选,单克隆挑取,获得稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV。经Western-blot和RT-PCR检测,证明外源波形蛋白成功得到表达。本研究建立的稳定表达猴源波形蛋白的细胞系BHK-21-GIV,为研究波形蛋白的生物学功能及与猪繁殖与呼吸综合征病毒感染细胞的关系提供了有利的工具。 展开更多
关键词 波形蛋白 稳定细胞系 bhk-21细胞 猪繁殖与呼吸综合征病毒
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人血管紧张素Ⅱ2型受体AT2R重组细胞系的构建与鉴定
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作者 陈惠莹 毛莹莹 +3 位作者 裴娜娜 颜仁和 万鹏飞 李红卫 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期187-194,共8页
目的:构建人血管紧张素Ⅱ2型受体(hAT2R)过表达稳定细胞系,探讨AT2R激动剂Compound 21等对前列腺癌细胞的作用及机制.方法:构建含hAT2R基因的慢病毒表达载体pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包装成慢病毒.将重组慢病毒载体pLV-CMV-IRES-eGFP-h... 目的:构建人血管紧张素Ⅱ2型受体(hAT2R)过表达稳定细胞系,探讨AT2R激动剂Compound 21等对前列腺癌细胞的作用及机制.方法:构建含hAT2R基因的慢病毒表达载体pLV-CMV-hAT2R-IRES-eGFP并包装成慢病毒.将重组慢病毒载体pLV-CMV-IRES-eGFP-hAT2R感染前列腺癌细胞,并利用流式细胞术筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot方法检测重组细胞系中hAT2R表达水平,使用AT2R激动剂CGP42112检测受体功能.结果:重组慢病毒载体感染PC-3、DU145前列腺癌细胞24 h后均能观察到eGFP表达,用流式细胞术分别筛选出单克隆细胞株,RT-PCR及Western blot检测结果显示目的基因hAT2R在两株重组细胞系中表达显著升高,CGP42112处理24 h后,重组细胞系细胞活力较正常PC-3、DU145细胞显著降低.结论:成功构建hAT2R过表达稳定细胞系. 展开更多
关键词 hAT2R Compound21 慢病毒 稳定细胞系 前列腺癌
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稳定表达猪BRD4-BD1/2蛋白的猪肺泡巨噬细胞传代细胞系的构建及其用于ASFV增殖的效果观察
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作者 吴梦丽 孙华林 +4 位作者 杨吉飞 赵亚茹 关贵全 殷宏 牛庆丽 《畜牧兽医学报》 CAS 2024年第10期4646-4659,共14页
前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD... 前期研究发现宿主表观遗传调控蛋白——含溴结构域蛋白质4(bromodomain-containing protein 4,BRD4)有助于非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)的复制,为了深入研究BRD4对ASFV复制的影响,通过筛选出显著促进ASFV复制的BRD4-BD1/2结构域,利用慢病毒表达系统成功构建稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系,分析ASFV在3D4/21-BRD4-BD1/2细胞系与WT细胞系之间的复制差异。首先,以家猪基因BRD4-BD1/2为靶标,构建了含有3x Flag标签的重组质粒pLVX-IRES-puro-3x Flag-BRD4-BD1/2,并将其与质粒pMD2.G和pSPAX2共同转染至HEK-293T细胞进行慢病毒包装,获得具有感染能力的慢病毒。使用慢病毒感染3D4/21细胞后通过嘌呤霉素药物筛选,成功获得了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。利用RT-qPCR和Western blot技术分别检测了ASFV感染3D4/21-BRD4-BD1/2细胞后CP204L和B602L基因的转录水平以及相应蛋白表达水平,并通过HAD50测定评价ASFV的复制能力。研究结果表明:成功构建了稳定表达BRD4-BD1/2结构域的3D4/21细胞系。与3D4/21-WT细胞系相比,BRD4-BD1/2稳定表达细胞系能够显著促进ASFV复制。本研究提供了深入研究BRD4蛋白在ASFV复制中功能的生物材料,并为ASFV疫苗候选株的开发提供了理论基础。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 BRD4 BD1/2 3D4/21细胞 稳定表达细胞系
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Microcalorimetric Study of Energy Metabolism of HSV-2 and FMDV Infection Processes
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作者 张恒 郑从义 +3 位作者 李杰 顾朝江 汪存信 刘欲文 《Chinese Journal of Chemistry》 SCIE CAS CSCD 2006年第2期182-186,共5页
The metabolic thermogenic power data of the HSV-2 infected HeLa cells and the FMDV infected BHK-21 cells were determined by LKB-2277 bioactivity monitor. The aim of the study was to investigate the difference of the c... The metabolic thermogenic power data of the HSV-2 infected HeLa cells and the FMDV infected BHK-21 cells were determined by LKB-2277 bioactivity monitor. The aim of the study was to investigate the difference of the cell metabolism under the action of two different viruses and the effects of hyperthermia and drugs on it. The results illustrated that the metabolic thermogenic power of infected cells was larger than the uninfected ones and there was a significant difference between the metabolism heat released by the two types of infected cells. From the maximal thermal power and total metabolism heat, the infection process was observed to be thermosensitive and could be inhibited by interferon. Our experiments also revealed that 6 month storage of FMDV could attenuate its virulence and infectivity. The study shows that microcalorimetry is a potent tool to investigate the metabolism of virus infection process. 展开更多
关键词 HSV-2 FMDV HeLa cell line bhk-21 cell line METABOLISM MICROCALORIMETRY
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