颗粒状角膜营养不良一家系BIGH3基因突变的研究

目的对1个颗粒状角膜营养不良家系进行分子遗传学分析,探讨其BIGH3基因突变的类型。方法收集1个颗粒状角膜营养不良家系中2名患者和1名正常成员的外周血5 ml,提取白细胞DNA,利用合成的BIGH3基因第4、11和12外显子的特异性引物,进行PCR扩增,并对PCR产物直接行DNA测序分析。结果该家系患者成员的BIGH3基因第4外显子存在CGC>CAC(R124H)突变杂合子,而家系表现正常成员无此基因位点突变。结论该颗粒状角膜营养不良家系存在BIGH3基因突变,为R124H杂合突变类型,确诊为Avellino角膜营养不良。

一颗粒状角膜营养不良家系BIGH3基因突变的研究

目的对一颗粒状角膜营养不良(GCD)家系进行BIGH3基因突变筛查,以确定其致病基因。方法收集一常染色体显性遗传的GCD家系,提取该家系患者及正常者的DNA,通过聚合酶链式反应(PCR)扩增BIGH3基因的目的片段,纯化后直接测序,用DNAStar软件分析测序结果,检测其BIGH3基因突变的类型。结果该家系患者均检测出第4外显子的R124H突变(CGC>CAC),而家系中的正常者及50例正常对照者的BIGH3基因中均未发现该突变。家系成员都检测出第11、12外显子的同义单核苷酸多态性(SNP)。通过基因检测,确定该家系角膜营养不良的分型,即为GCDⅡ型,又称Avellino角膜营养不良(ACD)。结论 BIGH3基因突变导致了该家系角膜营养不良患者的角膜病变,突变类型为R124H杂合突变。

BIGH3相关性角膜营养不良的分子遗传学研究进展

BIGH3相关性角膜营养不良是临床上一种较常见的致盲性遗传眼病,大多为单基因常染色体显性遗传。其防治的关键在于通过揭示更多BIGH3基因的突变位点及其相关发病机制,以提供准确的临床诊断和基因治疗。近年来的研究表明,位于BIGH3基因4、11、12、14号突变位点外显子上的突变类型可能通过改变其表达蛋白(KE蛋白)的结构、诱导凋亡、影响蛋白的黏附爬行功能等机制引起角膜异常蛋白沉积而致病。就目前国内外该病分子遗传学方面的研究做一简要综述。

BIGH3^(R555W)突变转基因小鼠模型的建立

目的建立BIGH3^(R555W)突变转基因角膜营养不良小鼠模型。方法构建以磷酸甘油酸激酶(phosphoglycerate kinase,PGK)为启动子的BIGH3(M)-IRES-EGFP重组质粒载体,通过原核显微注射方法将线性化、纯化后的外源质粒注射入C57小鼠受精卵中,胚胎移植入假孕受体母鼠输卵管内,获得子代小鼠。用PCR方法检测子代鼠尾基因组DNA,通过RT-PCR及Western印迹法检测BIGH3^(R555W)基因表达。结果 8只假孕小鼠共移植注射后的胚胎84枚,出生35只子代鼠,经PCR检测得到4只转基因阳性小鼠。RT-PCR和Western印迹法检测结果显示,BIGH3^(R555W)在转基因小鼠角膜表达量明显增多。结论通过显微注射法使外源基因BIGH3^(R555W)突变体在小鼠基因组中整合,成功建立了BIGH3^(R555W)突变转基因小鼠模型,该模型可为今后进一步研究角膜营养不良疾病的发病机制提供依据。

两种角膜营养不良的BIGH3基因突变研究

目的 了解中国角膜营养不良患者所存在的 BIGH3基因突变类型。方法 应用聚合酶链反应并结合 DNA测序技术 ,分别对 3例颗粒状角膜营养不良和 12例 Avellino角膜营养不良患者以及 10名正常人 BIGH3基因第 4外显子和第 12外显子进行突变检测。结果 所检测的角膜营养不良患者均存在BIGH3基因突变 ,所有正常对照无 BIGH3基因突变。其中 12例为 R12 4 H突变杂合子 ,3例为 R5 5 5 W突变杂合子。结论 颗粒状、Avellino角膜营养不良分别存在 BIGH3基因 R5 5 5 W及 R12 4 H突变 ,而 R12 4 H突变相关的 Avellino角膜营养不良在 BIGH3基因突变所导致的角膜基质营养不良中最为常见。12 4和 5 5 5密码子亦是中国角膜营养不良患者 BIGH3基因的突变热点。

Analysis of human transforming growth factor β-induced gene mutation in corneal dystrophy

Background Corneal dystrophy is a group of inherited blinding diseases of the cornea. This study was to identify the mutations of the keratoepithelin (KE) gene for proper diagnosis of corneal dystrophy. Methods Three families with corneal dystrophy were analysed. Thirteen individuals at risk for corneal dystrophy in family A, the proband and her son in family B, and the proband in family C were examined after their blood samples were obtained. Mutation screening of human transforming growth factor β-induced gene (BIGH3 gene) was performed. Results Five individuals in family A were found by clinical evaluation to be affected with granular corneal dystrophy and carried the BIGH3 mutation W555R. However, both probands in families B and C, also diagnosed with granular corneal dystrophy, harboured the BIGH3 mutation R124H. Conclusion Molecular genetic analysis can improve accurate diagnosis of corneal dystrophy.

TGFBI基因相关的Thiel-Behnke角膜营养不良家系的建立者效应分析

目的 对2个Thiel-Behnke角膜营养不良的家系进行基因诊断和建立者效应分析.方法 提取家系A中15名成员（13例患者,2名健康成员）、家系B中14例成员（6例患者,8名健康成员）以及20名健康自愿者的基因组DNA,通过DNA测序检测转化生长因子β诱导基因（transforming growth factor beta induced,TGFBI/BIGH3）的突变,并对2个家系成员进行单倍型分析.结果 所有患者TGFBI基因的第12外显子发生R555Q突变,2个家系成员具有部分相同的单倍型.结论 基因检测有助于Thiel-Behnke角膜营养不良的确诊.2个患病家系可能来自于同一祖先.

分子遗传学方法在遗传性角膜营养不良分类中的应用

目的探讨应用分子遗传学方法对角膜营养不良进行分类的途径。方法采用聚合酶链-单链构象多态性(PCR-SSCP)分析,对18例角膜营养不良的患者进行BIGH3基因的4、11、12号外显子的突变筛查,并对发现的异常泳动带进行DNA测序,以确定突变位点。结果18例角膜营养不良均有BIGH3基因突变,其中R555W突变型6例,A546D突变型6例,R124C突变型2例,T538P突变型2例,A546T突变型1例,P501T突变型1例。结论PCR-SSCP结合DNA测序的分子遗传学方法快速、简单且灵敏,以此为基础对遗传性角膜营养不良进行分类准确可靠。