BIOMED-2标准化基因重排检测在非霍奇金淋巴瘤诊断中的意义

目的:利用BIOMED-2标准化免疫球蛋白(Ig)/T细胞受体(TCR)基因重排检测非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者骨髓Ig或TCR基因重排,探讨Ig/TCR基因重排在非霍奇金淋巴瘤诊断中的应用意义。方法:从骨髓及石蜡包埋组织(FFPE)标本中提取基因组DNA,采用BIOMED-2系统引物,进行多重PCR扩增并利用PCR片段分析法进行Ig/TCR基因重排的克隆性分析。结果:在235例T细胞非霍奇金淋巴瘤(T-NHL)中,TCRγ和TCRx单克隆重排阳性率分别为57.9%和50.2%,TCRγ和TCRβ的联合检出率为71.9%。在583例B细胞非霍奇金淋巴瘤(BNHL)IgH和IgK单克隆重排阳性率分别为70.7%和69.3%,IgH和IgK的联合检出率为81.6%。套细胞淋巴瘤与滤泡淋巴瘤、弥漫大B细胞淋巴瘤IgH(84.8%对34.0%(P<0.001);84.8%对9.2%(P=0.025)和IgK(75.8%vs 50.9%,P<0.001;75.8%vs 16.1%(P<0.001)重排阳性率差异具有统计学意义。Ig基因重排阳性BNHL患者中,65例(13.7%)患者存在TCR重排阳性。TCR重排阳性T-NHL患者中,未见Ig基因重排阳性。30例弥漫大B细胞淋巴瘤患者FFPE标本有25例(83.3%)检出Ig基因重排,与骨髓标本重排检出率相比较,差异具有统计学意义(P<0.001)。结论:利用BIOMED-2标准化Ig/TCR基因重排检测对于淋巴瘤的诊断有辅助性作用,并且利用序列分析法可提高重排检测的敏感性和特异性,对于淋巴瘤的早期诊断有很高的价值。

儿童急性B淋巴细胞白血病中相关融合基因检测结合BIOMED-2标准化Ig基因重排的应用研究

目的:探讨ALL相关基因检测与BIOMED-2标准化Ig基因重排技术在儿童B-ALL诊治中的应用以及两者的之间的相关性。方法:采用ALL相关基因检测试剂盒与BIOMED-2系统引物,分别进行RNA/DNA的多重PCR扩增,并应用RQ-PCR进行荧光检测及PCR片段分析法进行Ig基因重排的克隆性分析。结果:251例B-ALL患儿中TEL-AML1^+77例,E2A-PBX1^+28例,MLL-AF4^+10例,BCR-ABL^+11例,总阳性率为50.2%;IgH V_H-J_H重排阳性率为82.5%,IgK重排阳性率为53.4%。融合基因与基因重排的联合检出率为99%。E2A-PBX1^+组及MLL-AF4^+组中Ig H及Ig K分别与阴性对照组相比,其中Ig K阳性率的差异具有统计学意义(P<0.001及P=0.005)。对105例融合基因阳性患者同时检测染色体荧光原位杂交,其阳性符合率均大于94%。结论:ALL相关融合基因筛查与BIOM ED-2标准化Ig基因重排技术相结合,不仅可以大大提高在儿童B-ALL的检出率,还可以对疾病预后进行较为精确地分组,同时相对于染色体FISH检测更加快速灵敏。

BIOMED-2标准化Ig基因重排在多发性骨髓瘤中的应用研究

目的探讨BIOMED-2标准化Ig基因重排技术在多发性骨髓瘤（MM）诊治中的应用以及采用PCR片段分析毛细管电泳法（简称毛细管电泳法）进行克隆性检测的意义。方法选取2009年至2013年167例MM患者骨髓标本，以20例反应性浆细胞增多症患者骨髓标本作为对照，采用BIOMED．2系统引物，进行多重PCR扩增并采用毛细管电泳法进行Ig基因重排的克隆性分析。结果①167例MM患者中IgHVH-JH重排阳性者107例，阴性者60例，两组患者中IgHDH-JH重排发生率差异有统计学意义（14．0％对30．0％，P=0．013）；121例（72．4％）患者存在IgK重排。IgHVH-JH、IgHDH-JH、IgK联合检查，阳性检出率为94．6％。对照组Ig基因重排检测结果均为阴性。②琼脂糖电泳法结果示167例MM患者中9例（5．4％）患者IgH重排基因克隆性阳性，而毛细管电泳法结果则示为多克隆重排。③53例MM患者同时进行Ig基因重排检测和染色体荧光原位杂交IgH检测，两种方法的IgH阳性检出率差异有统计学意义（67．9％对49．1％，P=0．049）。结论IgHVH-JH、IgHDH-JH、IgK联合检测可大大提高MM患者Ig基因重排克隆性的检出率，尤其对于IgHVH-JH重排阴性者IgHDH-JH重排的补充检测尤为重要。基因重排检测采用毛细管电泳法可有效地区分单克隆、多克隆和寡克隆。Ig基因重排检测较染色体荧光原位杂交技术的IgH阳性检出率高。应用BIOMED-2标准化Ig基因重排技术检测对于MM的诊断有指导意义。